几种消毒剂对青霉菌消毒效果的比较

杭柏林,吴胜杰,李杰,史杰,魏晓晓,夏一赫,胡建和

（1.河南科技学院,河南新乡453003；2.新乡市畜产品质量监测检验中心,河南新乡453003）

几种消毒剂对青霉菌消毒效果的比较

杭柏林1,吴胜杰1,李杰2,史杰2,魏晓晓1,夏一赫1,胡建和1

（1.河南科技学院,河南新乡453003；2.新乡市畜产品质量监测检验中心,河南新乡453003）

为了解常用化学消毒剂对青霉菌的消毒效果,测定了来苏儿、碘酊、84消毒液、新洁尔灭、双氧水、甲醇、高锰酸钾、硫柳汞、甲醛、氢氧化钠、苯酚和五水硫酸铜对青霉菌的杀灭效果,用显微镜观察了碘酊和甲醇对青霉菌形态的影响.结果表明：五水硫酸铜、苯酚、碘酊、来苏儿、84消毒液等对青霉菌的消毒效果较好,抑制了青霉菌菌丝的形成.研究为临床上预防青霉菌感染打下了基础.

青霉菌；消毒效果；消毒剂；比较

青霉菌（Penicillium）是真菌的一种,属于半知菌类[1].青霉菌的种类很多,通常生于柑桔类水果上,在蔬菜、粮食、肉类和皮革上也常有分布.青霉属霉菌可以产生多种霉菌毒素,主要有褚曲霉毒素、展青霉毒素、橘青霉毒素、棒曲霉毒素、霉酚酸、蓝酪霉菌毒素和青霉酸[2-3].这些毒素通过某种途径进入动物饲料中,对动物生产将会产生诸多不利的影响,若进入动物性食品中,则对人类健康造成威胁[3-6].因此,开展对青霉菌的研究显得很重要.应用消毒剂是清除或避免霉菌感染的重要方法,在畜禽疫病防治中发挥着重要作用.本研究以从饲料中分离的青霉菌为受试菌株,使用目前常用的消毒剂对该株青霉菌进行了消毒效果观察,希望为临床生产和进一步深入研究打下基础.

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 消毒剂和其他试剂材料 硫酸铜（天津市东丽区天大化学试剂厂）、硫柳汞（天津市金特化学品有限公司）、高锰酸钾（天津市长城化学试剂厂）、苯酚（上海埃彼化学试剂有限公司）、氢氧化钠和氯化钠（天津市北方天医化学试剂厂）、甲醇（佛山市远东化学试剂公司）、甲醛（烟台市双双化工有限公司）、来苏儿（石家庄市卫明消毒剂厂）、新洁尔灭（山东利尔康消毒科技股份有限公司）、2%碘酊（德州安捷高科消毒制品有限公司）、30%双氧水（天津市恒兴化学试剂制造有限公司）、84消毒液（德州欣瑞达消毒制品有限公司）、葡萄糖（天津市巴斯夫化工有限公司）和琼脂（天津市福晨化学试剂厂）等均为实验室常规消毒剂和试验试剂.马铃薯为市售农产品.

1.1.2 菌株来源 试验用的青霉菌从饲料中分离获得,由河南科技学院动物科学学院预防兽医学实验室分离、鉴定和保存.

1.1.3 真菌培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA固体培养基）配方[7-8]：马铃薯300 g,葡萄糖20 g,琼脂20 g,蒸馏水1 000 mL.制法：将马铃薯去皮切块,加1 000 mL蒸馏水,煮沸10～20 min,用纱布过滤加蒸馏水至1 000 mL；加入葡萄糖和琼脂,加热融化,补蒸馏水至1 000 mL,分装包扎,121℃高压灭菌20 min.PDA液体培养基：只是在配置的PDA固体培养基中不加入琼脂,其余成分和制作方法同PDA固体培养基.

1.2 试验方法

1.2.1 分生孢子悬液的制备 分生孢子悬液的制备按文献[9]的方法进行,简述如下：将培养好的青霉菌丛,用无菌刮刀从培养基上刮取,放入已灭菌的带有玻璃珠的三角瓶内,加入50 mL无菌生理盐水,充分振荡后,用已灭菌的脱脂棉过滤,以除去菌丝,用血球计算器计数悬液中孢子的数量,贮存于2～10℃,使用时以无菌生理盐水调节孢子数量为5×106CFU/mL.

1.2.2 消毒剂抑制青霉菌试验 抑菌率检测按文献[10]的方法进行,简述如下：在生物超净工作台内,将一定量的不同消毒剂混入50℃左右的已灭菌的PDA培养基,混匀后倾入平板,静置凝固,配置成含消毒剂的培养基,用移液器取10 μL分生孢子悬液点于培养基中央,以不加消毒剂的平板点菌做对照,于20℃培养5 d,测量样品及对照菌落直径,再换算作抑菌率.抑菌率/%=（对照菌落直径-样品菌落直径）/对照菌落直径×100.参考文献[11]选择消毒剂常用质量（体积）分数,见表1；抑制菌丝试验按照细菌药敏试验的纸片扩散法[12]进行,简述如下：用打孔器制备直径约6 mm的滤纸片,灭菌后备用；将0.5 mL孢子悬液滴注到PDA固体培养基上,用灭菌L型棒涂布均匀,静置待其稍干；将灭菌滤纸片浸泡于一定浓度的消毒液中,约1 min后取出滤纸片,贴附于已经接种的PDA培养基上,于20℃培养.

1.2.3 镜下形态观察 形态观察按文献[7-8]的方法进行,简述如下：取处理过的干净载玻片,滴1滴美兰染色液,用接种环挑取固体培养基上的青霉菌于染色液中央,轻轻搅动5～10下,使染色液中的菌丝散开,盖上盖玻片,置于光学显微镜（400倍）下观察.

2 结果与分析

2.1 消毒剂对青霉菌的抑菌率

几种消毒剂的抑菌效果见表1.

由表1可知,使用单一消毒剂对青霉菌的抑菌效果以0.2%五水硫酸铜为最好,抑菌率为78.5%；0.1%苯酚次之,抑菌率为75.2%；0.2%高锰酸钾为最弱,抑菌率为23.8%.

2.2 消毒剂对青霉菌菌丝生长的抑制

接种后,有消毒剂（新洁尔灭和84消毒液）浸润的地方没有青霉菌菌丝生长,在没有消毒剂浸润的培养基表面,开始有白色小点的青霉菌菌丝生长,并且生长的地方逐渐扩大,直到在培养基上所能生长的地方,均为白色,而有消毒剂浸润的地方仍无菌落生长（如图1-A）.但随着时间延长,青霉菌菌丝的生长面积逐渐增大（如图1-B）.

图1 新洁尔灭和84消毒液对青霉菌菌丝的抑制Fig.1 Inhibition of bromogeramine and 84 disinfectant to hypha of Penicillium

2.3 消毒剂对青霉菌分生孢子穗的影响

在显微镜下,对照组呈现青霉菌典型的扫帚状分生孢子穗（如图2-A）,而试验组则见不到这种的扫帚状形态.其中,碘酊的效果较好,视野中几乎见不到菌丝（如图2-B）；而甲醇的效果稍差,视野中还可以见到一些菌丝（如图2-C）,但其杂乱无章,无法形成青霉菌的典型形态.

图2 青霉菌的镜下形态Fig.2 The morphology observation of Penicillium with microscope

3 小结与讨论

消毒剂的菌丝抑制试验与细菌的药敏试验方法基本一致.该方法比抑菌率测定试验的方法来的相对简单.因此,菌丝抑制试验方法可以用于初步判断受试物质对青霉菌有没有消毒作用,至于消毒作用的强弱可以通过抑菌率测定试验来进行测试.物质的挥发性可能是影响抑菌率测定的一个重要因素.比如,甲醛是生产实际中空间熏蒸消毒的常用消毒剂,但其抑菌率仅有63.6%,不如五水硫酸铜.因为甲醛是易挥发的物质,而五水硫酸铜不易挥发.

消毒剂的质量（体积）分数会影响到消毒效果[7,9].本次研究主要选择了实际生产中所常用的消毒剂质量（体积）分数,未进行不同质量（体积）分数消毒剂的试验,没有观察到质量（体积）分数的不同对消毒效果带来的差异.如消毒效果不是很好的高锰酸钾,就不能了解是否是因为质量分数低而影响了它的消毒效果.

不同消毒剂对不同或相同病原微生物的杀灭效果是不同的[13].本研究结果亦同样证明了这一观点.因此,在针对传染病病原的消毒过程中,不能根据经验随便选择消毒剂,而是要慎重选择消毒剂种类,最好通过消毒鉴定试验后再选择有效的消毒剂.这样对于防治动物疫病、节约成本具有重要作用.

[1]汪昭贤.兽医真菌学[M].杨凌：西北农林科技大学出版社,2005：138.

[2]雷红宇.圆弧青霉菌毒素-青霉酸的单克隆抗体及免疫毒理学研究[D].长沙：湖南农业大学,2009.

[3]陆承平.兽医微生物学[M].北京：中国农业出版社,2007：274-275.

[4]袁慧,易厚生,文利新,等.湖南省霉变饲料中部分青霉菌毒素的实验调查[J].湖南饲料,1998（5）：22-24.

[5]侯引绪,于凤芝.绵羊青霉菌丝中毒[J].中国兽医杂志,2006,42（5）：53.

[6]邱之华,王群英,邓红江.雏鸡青霉菌感染[J].中国兽医杂志,1994,20（8）：37.

[7]胡建和,王丽荣,杭柏林.动物微生物学[M].北京：中国农业科学技术出版社,2006：457-458.

[8]姚火春.兽医微生物学实验指导[M].北京：中国农业出版社,2002：98-100.

[9]张文福.医学消毒学[M].北京：军事医学科学出版社,2002：324-325.

[10]冯志敏,刘蓉.几种防腐剂对青霉菌抑菌效果的观察[J].四川省卫生管理干部学院学报,1997,16（3）：138,140.

[11]胡建和,刘俊伟.养殖场消毒指南[M].北京：化学工业出版社,2010：20-35.

[11]杨利珍,周乐,徐红,等.一株青霉菌的分离及抑菌活性成分研究[J].西北农业学报,2009,18（4）：98-102.

[12]张亚尼,宋晖,张福娥.5种含氯消毒剂杀菌效果及能量试验研究[J].中国消毒学杂志,2005,22（2）：147-149,152.

[13]谈智,徐燕,吉钟山,等.八种化学消毒剂对黑曲霉菌杀灭效果的研究[J].中国消毒学杂志,2007,24（1）：41-43.

（责任编辑：卢奇）

Comparison of disinfection effects of several disinfectants on Penicillium

Hang Bolin1,Wu Shengjie1,Li Jie2,Shi Jie2,Wei Xiaoxiao1,Xia Yihe1,Hu Jianhe1
（1.Henan Institute of Science and Technology,Xinxiang 453003,China；2.Xinxiang Center of Quality Monitoring and Detection for Livestock Product,Xinxiang 453003,China）

The disinfection effects of lysol,iodine tincture,84 disinfectant,bromogeramine,hydeogen peroxide, methanol,potassium permanganate,thiomersal,formaldehyde,sodium hydroxide,phenol,blue copperas on Penicillium were compared.Effects of iodine tincture and methanol on the mycelium morphology of Penicillium were observed with microscope.The results showed that blue copperas,phenol,iodine tincture,lysol and 84 disinfectant had better disinfection effects on Penicillium,and inhibited the formation of hypha of Penicillium.These findings would be helpful for the prevention of Penicillium infection.

Penicillium；disinfection effects；disinfectant；comparison

S851.3

A

：1008-7516（2015）02-0043-03

10.3969/j.issn.1008-7516.2015.02.010

2015-03-09

杭柏林（1978―）,男,江苏海安人,博士,讲师.主要从事动物微生物学的教学和科研.