慢性乙型肝炎患者IL-1RN(T+8006C)位点基因多态性分析

万鸿君，彭 芳(武汉大学人民医院检验科，武汉 430060)



慢性乙型肝炎患者IL-1RN(T+8006C)位点基因多态性分析

万鸿君，彭 芳(武汉大学人民医院检验科，武汉 430060)

目的 探讨白细胞介素-1受体拮抗剂基因(IL-1RN)第2号外显子+8006T/C位点基因多态性在慢性乙型肝炎患者中的分布及其相关性。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性的分析方法，对450例慢性乙型肝炎患者和420例对照者IL-1RN(T+8006C)位点基因多态性进行检测，计算并分析其等位基因和基因型频率。结果 观察组和对照组IL-1RN(T+8006C)位点基因型的分布最常见为TT型，TC型次之，CC型则较为罕见；在不同年龄组、不同性别间其分布比较，差异无统计学意义(P>0.05)；观察组C型等位基因及TC基因型频率明显低于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。结论 IL-1RN(T+8006C)位点等位基因及基因型的分布不存在年龄和性别间的区别，但与慢性乙型肝炎存在相关性，在乙型肝炎病毒感染中，C型等位基因可能具有保护作用。

白细胞介素-1受体拮抗剂； 基因； 多态性； 慢性乙型肝炎

白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)基因(IL-1RN)2号外显子存在一个+8006T/C位点基因多态性，由T→C转换所引起，与IL-1Ra的表达相关，而IL-1Ra可特异性地抑制IL-1引起的炎性反应，是一种重要的内源抗炎因子，因此，该多态性可能与疾病的发生发展密切相关[1-2]，但与慢性乙型肝炎是否相关目前尚不清楚。本文观察和分析了IL-1RN(T+8006C)位点基因多态性在慢性乙型肝炎患者中的分布，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本院门诊与住院部慢性乙型肝炎患者共450例为观察组，其中男250例，女200例，年龄18～82岁，平均年龄(43.1±13.5)岁，所有病例均根据相关标准进行诊断[3]。选择同期420例健康体检者为对照组，其中男230例，女190例，年龄18～83岁，平均年龄(44.6±14.2)岁。所有研究对象均为无血缘关系的汉族人群，排除其他病毒性肝炎，并排除内分泌、肝脏、肾脏和心脑血管疾病，血常规及生化指标均在参考范围内。

1.2 仪器与试剂 主要仪器为美国PE公司 GeneAmp PCR System 2700 扩增仪，法国VL自动凝胶成像及分析系统，PCR试剂及Alu 1内切酶为Promega产品，引物由大连宝生物工程有限公司合成。

1.3 方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性的分析方法进行。根据相关文献[4]设计一对引物，P1：5′-TTC TAT CTG AGG AAC AAC CAA CTA GTA GC-3′，P2：5′-AGG ATT AGG ACA TTG CAC CTA G-3′，扩增IL-1RN第2号外显子区(7 977～8 150)的片段。模板DNA的制备及IL-1RN(T+8006C)位点基因多态性的检测与分析参照相关文献[5]进行。

1.4 统计学处理 研究对象IL-1RN(T+8006C)位点等位基因及基因型频率用频率计数法计算，并用Hardy-Weinberg定律进行遗传平衡分析。研究对象等位基因及基因型频率用χ2检验进行比较，以α=0.05为检验水准，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 IL-1RN(T+8006C)位点基因型检测结果 用限制性内切酶Alu 1酶切扩增产物，经电泳后根据特异性电泳条带可检测出三种基因型：即TT基因型有1条带(146 bp)，TC基因型有2条带(174 bp和146 bp)，而CC基因型有1条带(174 bp)，见图1。

注:1为CC基因型；2为TC基因型；3为TT基因型；M为pGEM3Zf(+)DNA/Hae分子量标志物。

2.2 不同性别间IL-1RN(T+8006C)位点基因多态性分析 研究对象IL-1RN(T+8006C)位点等位基因及基因型频率经χ2检验发现符合Hardy-Weinberg遗传平衡，表明具有群体代表性。研究人群中，IL-1RN(T+8006C)位点等位基因的分布以等位基因T为最常见，而等位基因C次之；IL-1RN(T+8006C)位点基因型以TT型最为多见，其次为TC型，CC型较罕见。观察组TC基因型及C等位基因频率明显低于对照组，差异有统计学意义(χ2=13.20，χ2=11.98，P<0.01)；观察组及对照组在本组不同性别间基因型和等位基因频率比较，差异无统计学意义(χ2=0.07，χ2=0.04；χ2=0.02，χ2=0.02；P>0.05)，见表1。

2.3 不同年龄间IL-1RN(T+8006C)位点多态性的分布 IL-1RN(T+8006C)位点等位基因及基因型分布在本组不同年龄组间比较，差异无统计学意义(χ2=1.56，χ2=1.17，χ2=0.64，χ2=0.58；P>0.05)。但观察组TC基因型及C等位基因频率明显低于对照组，差异有统计学意义(χ2=11.31，χ2=10.26，P<0.01)，见表2。

表1 IL-1RN(T+8006C)位点多态性在不同性别间的比[n(%)]

注：与对照组比较，aP<0.01。

表2 IL-1RN(T+8006C)位点多态性在不同年龄组间的比较[n(%)]

注：与对照组比较，aP<0.01。

3 讨 论

IL-1家族中唯一的内源性拮抗剂为IL-1Ra，在疾病的发生发展过程中可能起着重要作用，其机理可能是与IL-1竞争结合IL-1受体而有效地拮抗IL-1所引起的炎性反应[6]。IL-1RN(+8006T/C)位点基因多态性目前在IL-1家族中研究较少。有研究表明，IL-1RN第2号内含子可变数串联重复多态性的等位基因Ⅱ(IL-1RN*Ⅱ)与IL-1RN(+8006T/C)位点的等位基因C存在紧密连锁[4]，而前者与IL-1Ra的表达紧密相关[7]，因此，IL-1RN(+8006T/C)位点的等位基因C可能与疾病的发生发展密切相关，其机理是通过与IL-1RN*Ⅱ的紧密连锁或直接调控IL-1Ra的表达。

慢性乙型肝炎是最主要的慢性病毒性疾病之一，在该病的病程中，遗传因素可能起着重要作用。近年来，乙型肝炎病毒易感性、治疗及预后等与细胞因子及其基因多态性已受到广泛关注[8-11]。有研究发现，乙型肝炎病毒感染后果与肿瘤坏死因子基因多态性有关[8]。然而，目前关于慢性乙型肝炎病程与IL-1RN(T+8006C)位点基因多态性是否相关尚不清楚。

本研究发现，在慢性乙型肝炎患者和对照人群中，IL-1RN(+8006T/C)位点可检测出TT、TC和CC三种基因型，其中等位基因T发生频率最高，而等位基因C发生频率较低。在不同性别和不同年龄组之间，IL-1RN(+8006T/C)位点基因型和等位基因型的分布比较，差异无统计学意义(P>0.05)，表明该位点碱基突变不存在性别和年龄之间的区别。观察组C等位基因及TC基因型频率明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，表明慢性乙型肝炎病程与该位点基因多态性存在相关性。据此推测，携带等位基因C的个体体内IL-1的活性可能较不携带等位基因C者强，原因是其产生IL-1Ra的能力较低所致，而IL-1活性增强可进而导致IL-1β的分泌增强，刺激机体产生肿瘤坏死因子、IL-2和IL-6，这些细胞因子可使中性粒细胞的吞噬作用得到进一步激活，促使机体清除感染病毒和其形成的免疫复合物。

总之，IL-1RN(+8006T/C)位点等位基因及基因型的分布不存在年龄、性别间的区别，但与慢性乙型肝炎密切相关，C型等位基因可能在个体预防乙型肝炎病毒感染中具有保护作用，其确切机制尚待进一步研究。

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Analysis of gene polymorphism at the position IL-1RN(T+8006C) in patients with chronic hepatitis B

WANHong-jun，PENGFang

(DepartmentofClinicalLaboratory，RenminHospitalofWuhanUniversity，Wuhan，Hubei430060,China)

Objective To investigate the distribution and correlation of gene polymorphism in the second exon of interleukin-1 receptor antagonist gene at position +8006[IL-1RN(T+8006C)] in patients with chronic hepatitis B.Methods The IL-1RN(T+8006C) polymorphism was detected by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphisms methods in 450 patients with chronic hepatitis B(observation group) and 420 healthy persons(control group)，then the genotype and allele frequencies were calculated and analyzed.Results In the observation group and control group，the TT genotype was the most frequent，then the TC genotype，and CC genotype was rare.The distribution of genotypes and allele was no different among different gender and age groups(P>0.05).The frequencies of TC genotype and C allele were lower in patients with chronic hepatitis B than that of the control group(P<0.01).Conclusion The distribution of IL-1RN(T+8006C) genotypes and allele were no difference among different gender and age groups，but it has correlation with chronic hepatitis B.Allele C might be a protect factor against hepatitis B virus infection.

interleukin-1 receptor antagonist; gene; polymorphism; chronic hepatitis B

万鸿君，男，博士，副主任技师，主要从事免疫学研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.10.021

A

1672-9455(2015)10-1389-02

2014-11-05

2015-01-15)