泌尿生殖道炎细小脲原体PCR检测结果临床研究

金宁，刘文力，杨琳，程欣，韩莹

（沈阳市第七人民医院，沈阳110003）

泌尿生殖道感染（Urinogenital tract infection）可由多种病原体引起，其中细小脲原体（Ureaplasma parvum，Up）的检测结果报道较少[1-7]。为探讨Up 在泌尿生殖道炎中的临床特点，笔者对我院性病门诊有泌尿生殖道异常分泌物者进行了病原体检测。现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2012 年11 月1 日—2013 年12 月31 日到我院皮肤性病科就诊并进行泌尿生殖道分泌物检测的标准如下：①患者有尿频、尿急和尿道刺激感，男性尿道口有稀薄分泌物，女性有白带增多，下腹部不适及外阴瘙痒等症状；②就诊病人的配偶有性病或泌尿生殖道异常分泌物，本人要求进行泌尿生殖道分泌物检测；③3 周内没有用过抗生素者。总计1 477 例门诊患者符合上述标准，其中男787 例，女690 例。全部患者均进行了人型支原体（Macoplasma homonis，Mh）和解脲脲原体（Ureaplasma urealytium，Uu）培养，及Up、沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct）、HPV13 种高危型及低危6、11 型，HSV-Ⅰ、Ⅱ型和奈瑟氏淋球菌（Neisseria gonococcus，NG）的PCR 检测。1 240 例进行了分泌物涂片革兰染色，并进行阴道加德纳菌和线索细胞检测，阳性诊断为细菌性阴道病（Bacterial vaginosis，BV）。

1.2 试剂与方法 Uu/Mh 培养应用珠海迪尔生物工程有限公司提供的支原体（Uu/Mh）分离培养药敏试剂盒，Ct、HSV-Ⅰ、Ⅱ型和NG 检测由中山大学达安基因股份有限公司提供的Ct、HSV 和NG 核酸定量检测试剂盒（均为PCR 荧光探针法），PCR 仪为Roche LightCyclerⅡ仪器。Up、HPV13 种高危型及6、11 两种低危型的核酸测定由上海之江生物科技股份有限公司提供的Up 核酸测定试剂盒、高危型HPV 分型核酸测定试剂盒和HPV6、11 型核酸测定试剂盒（均为荧光PCR 法），仪器为CObaSZ 多色荧光PCR 仪。Up 荧光PCR 法可对Up1、3、6、14 血清型全部进行检测，但未进行血清型分型。均严格按试剂盒使用说明书进行操作。

1.3 标本的采集 男性：用无菌拭子插入前尿道2～4 cm 处，略捻拭子取出分泌物（应略带黏膜），将带分泌物的棉拭子置入无菌玻璃管，塞紧密封后送检。女性：用无菌生理盐水棉球拭去宫颈外分泌物，再用无菌拭子插入宫颈内1～2 cm，停5 s 后旋动棉拭子采取宫颈分泌物，将棉拭子置入无菌玻璃管，塞紧后密封送检。

1.4 结果判读 Up 荧光PCR 法核酸测定交叉点值（Crossing point，Cp）≤38 为阳性。Uu/Mh 分离培养：Uu 液体培养基颜色由黄色变为红色为阳性。沙眼衣原体PCR 荧光探针法循环阈值（Cycle threshold，Ct）<37 为阳性。淋球菌PCR 荧光探针法Ct 值<37 为阳性。高危型HPV 荧光PCR 法Ct 值<35 为阳性，HPV6、11 型荧光PCR 法Cp 值≤38 为阳性。HSV-PCR 荧光探针法Cp 值≤40 为阳性。分泌物涂片革兰染色分级为：<5，5～10，11～20，21～30，≥31（白细胞+吞噬细胞）/高倍视野。

1.5 统计学处理 应用Excel 2003 版软件输入数据，并筛选相关数据。采用χ2检验，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

1 477 例泌尿生殖道分泌物病原体检测阳性854 例，占57.82%，其中男365 例，女489 例，年龄17～70 岁，中位年龄31 岁。其中Up 感染228 例，其中男64 例，女164 例，年龄18～70 岁。男性阳性占男性泌尿生殖道病原体阳性病例的17.53%（64/365），女性占33.54%（164/489），女性明显高于男性，差异有统计学意义（χ2=27.35，P=0.000）。Uu、Mh、HPV、HSV 和BV 检测阳性分别为398、237、66、19和47 例，男女占泌尿生殖道病原体阳性病例的构成比对比，女性也均明显高于男性，差异均有统计学意义（具体数据及统计学结果从略），只有Ct 和NG 的女性明显高于男性（数据从略）。1 240例泌尿生殖道分泌物涂片革兰染色分级与病原体检测结果见表。

表1 1 240 例泌尿生殖道分泌物涂片革兰染色分级与病原体检测结果 例

3 讨论

泌尿生殖道感染主要由沙眼衣原体（Ct）和支原体中的人型支原体（Mh）和解脲脲原体（Uu）引起。Uu 的14 种血清型中1、3、6、14 血清型属于细小脲原体（Up），其他血清型属于Uu。Mh 和Uu 的实验室检测的“金标准”是泌尿生殖道分泌物的分离培养法[3]，但培养法不能区分Uu 和Up[5-6]，因此不能对泌尿生殖道感染做出准确的实验室诊断。Up 的荧光PCR 法检测则能准确诊断Up。

据报道，在男女泌尿生殖道感染中Up 占25.8%～69.2%[3,6]，在男性中占7%～22.85%[2,5,7]，在女性泌尿生殖系统感染中，Up 占优[1]，甚至达80.88%[4]。Up 发病率各家报道不一，可能与不同地区病原体流行存在一定差异有关[12]。本文泌尿生殖道病原体阳性854 例，Up 阳性占26.70%（228/854），占检测病原体中第3 位，说明Up 是泌尿生殖道感染主要病原体之一。

有文献报道女性Uu 和Mh 检出率均高于男性[8-10]。本文男女Up 感染率对比（χ2=27.35，P=0.000），及Uu、Mh、HPV、HSV 和BV 的阳性率、男女病原体总阳性率对比，差异均有统计学意义，都说明女性分泌物病原体检出率高于男性。分析可能有以下原因：①男性尿道感染病原体后，排尿可将病原体随尿排出体外，减少了尿道内病原体感染量，而女性感染后，由于生理解剖学上的特点，病原体大部分存在于阴道内，随阴道分泌物或经血排出体外机会较少，因此女性感染病原体后，病原体获得了繁殖的时间和场所，所以病原体阳性检出率均较高，而男性病原体阳性检出率很低；②男性尿道感染病原体后，仍有较小比例感染病原体，是由于他们较频繁与泌尿生殖道感染的女性发生不洁性交，接触病原体频率较高；③男性性交前一般会排尿，性交后一段时间不排尿或排尿较少，使尿道内的病原体获得繁殖时间，并向尿道深部蔓延，导致尿道黏膜及邻近器官发生感染，出现各种疾病，并产生异常分泌物，病原体检出阳性。④男、女Ct 和NG 检出率对比，男性却高于女性（Ct：χ2=35.37，NG：χ2=112.36，P均=0.000），其原因需进一步探讨，或与男性尿道及附属器官更适于Ct 和NG 生长繁殖有关。

关于男性尿道感染中Up 的作用，有文献认为Up 并不起主要作用[2,7]，甚至无关[5]，还有作者认为男性高危性行为者Up 定植比例较小，Up 可能是男性尿道正常定植菌群[2]。但我们也见到与Up 感染有关疾病的报道。例如，男性不育可有多种原因引起，但有报道在支原体（包括Uu 和Up）阳性病例的精液标本中观察到精子中尾部损伤、精子凝聚和穿透卵母细胞的能力受损，Up 的PCR 阳性的精液中，正常精子细胞的百分数、精液量和精子运动性百分数低于正常精液标本[13]，这些男性不育病例年龄20～50岁，均有1 年以上不育史，说明Up 感染时间较长，Up 感染与男性不育有密切关系。还有报道在慢性前列腺炎患者的精液中可以检出Up，检出率为17.15%，提示Up 是慢性前列腺炎最常见的病原体[14]。他们除Ⅳ期外均有不同程度的下尿路症状或感染症状，持续时间超过3 个月[15]。

我们认为，男性发生不洁性交感染Up 后，尿道中的Up 经常会随尿液排出体外，尿道中存留的Up数量很少。本文男性Up 检出率明显少于女性，也说明了这一点。上述报道Up 与泌尿生殖道感染无关，可能与男性病例携带Up 量少，经常随尿排除，加之免疫功能较好，一般不会感染Up，若感染了Up，也会抑制或掩盖了Up 的感染，减少或未发现或无泌尿生殖道感染的临床症状[5]。只有Up 感染量较多，感染时间较长，加上身体一般条件较差或免疫功能存在某种不足，Up 在尿道内存活繁殖，并进一步向尿道深部进展，感染Up 的范围扩展到尿道深部黏膜和其他邻近器官，如射精管、精囊、前列腺等，其毒力因素使其发生病理性改变[6，13]，因此会出现前列腺炎症[14]，精液中检测到Up 及精液质量低于正常男性精液，甚至导致不育[13]及尿道分泌物。因此，我们认为，男性只要尿道分泌物中检测出Up，也是尿道感染的指征，因为正常性生活情况下，是不会感染Up 的，且不管检出量多少均应予以治疗。否则，长期不治疗有可能使Up 量增加，引起相关疾病的发生。

Up 与女性生殖系统疾病的关系，有报道Up 与泌尿生殖道炎症关系密切，孕期妇女宫颈分泌物PCR 法Uu 阳性率为58%，其中Up 占91.4%。在女性泌尿生殖道感染中，临床症状常常表现为轻或无症状，以致感染反复迁延和不可逆的病理变化而导致许多疾病的发生[1]。还有报道Up 是泌尿生殖道感染，尤其是体弱人群泌尿生殖道感染的主要病原体[6]。我们认为，女性感染Up 后，由于随阴道分泌物排除体外的机会很少，造成Up 在女性生殖系统内繁殖，使得Up 数量增加，引起Up 感染，此时检测以Up占优（本研究女性Up 构成比明显多于男性也支持这一点），如泌尿生殖道炎或黏液脓性宫颈炎，表现为阴道及宫颈异常分泌物。如在孕期前或早期发生Up 感染，可使宫内发生Up 感染，进而宫内胎儿也发生Up 感染，引起孕妇发生自发性流产或早产、产后子宫内膜炎、绒毛膜羊膜炎[1,6]。由于女性泌尿生殖道的感染菌种多，菌量大，Up 在其中的作用不一定很明显或突出，但本研究Up 阳性者均有临床表现（阴道宫颈异常分泌物），也反证Up 是泌尿生殖道主要的病原体之一。而孕妇由于Up 感染引起子宫感染性改变，不能正常保留胎儿，及胎儿受到Up 感染，引发自发性流产或早产[1]，还有报道新生儿支气管肺发育异常可能与出生前胎内Up 感染（也包括Uu 感染）有关[16]。也说明Up 感染可见于体质处于异常期（如孕妇）或较弱者（包括胎儿及新生儿）。

本研究1 240 例分泌物涂片革兰染色分级的病原体检测阳性率对比，差异有统计学意义（χ2=75.76，P=0.000），提示随着涂片白细胞+吞噬细胞/HP 的增加，泌尿生殖道病原体感染率呈上升趋势，说明分泌物涂片可以粗略反映临床症状的轻重，对临床感染有一定的提示作用，但仍应以病原体检测结果为主要诊断依据。

综上所述，泌尿生殖道感染可由Uu、Mh、Up、Ct、NG、HPV、HSV 和BV 等多种病原体引起，Up 是主要致病病原体之一。Up 感染可见于体弱者，在感染量大、感染时间长等条件下可以致病，并引起临床症状。PCR 法检测Up 虽然未对Up 进行血清分型，但与Uu/Mh 分离培养对比，对泌尿生殖道感染高危人群及有临床症状者能够做到准确诊断，具有准确、快速（检测2 h 即可得出结果，而培养法需要48 h 出结果）的优点，对及时治疗具有临床意义，可以在临床开展应用。

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