Th17细胞及相关细胞因子与不同严重程度特应性皮炎的相关性研究

苏湘川，任小丽，石青青

（浙江省台州市立医院，台州 318000）

特应性皮炎（Atopic dermatitis，AD）是一种与遗传过敏素质有关的慢性炎症性皮肤病，多自婴儿期起病,病情迁延反复,部分可持续至成年期。在儿童期，特应性皮炎是一种常见疾病，发病率较高，并呈现逐年上升的趋势。在我国儿童皮肤病中，AD 占皮肤科儿童就诊人数的30%左右[1]。本病的病因不明，发病机制涉及炎症损伤、细胞诱导分化、细胞凋亡及免疫系统的调控等多方面[2]。Th17 细胞是独立于Th1/Th2 型细胞的一种新型T 细胞，能分泌炎症介质白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-17（IL-17）等多种细胞因子诱导免疫炎症反应[3]。本研究通过检测不同严重程度AD 患者外周血Th17 细胞比例及Th17 细胞相关细胞因子表达水平，旨探讨Th17 细胞及其相关细胞因子在不同严重程度AD 患者发病中的意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2011 年1 月—2013 年12 月在我科就诊的轻度AD 患者34 例，中度AD 患者36 例，重度AD 患者34 例，诊断均符合Williams 诊断标准[4]。病情严重程度按欧洲特应性皮炎评分标准（SCORAD）进行评分[5]，评分越高，病情越重，按分值从低到高分为3 组，＜25 分为轻度组，25～50 分为中度组，＞50 分为重度组。其中轻度AD 患者男22 例，女12 例，平均年龄（10.27±2.41）岁；中度AD 患者男23 例，女13 例，平均年龄（11.27±2.72）岁；重度AD患者男21 例，女13 例，平均年龄（11.56±2.05）岁。所有患者未合并系统感染性疾病、免疫系统疾病及肝、肾、造血系统疾病和内分泌系统等严重原发性疾病和精神病患者。并于入组前1 周停用抗组胺药及外用糖皮质激素，半年内未系统使用糖皮质激素、免疫抑制剂及免疫调节剂。健康对照组为随机抽取本院同期35 例健康体检者，其中男22 例，女13 例，平均年龄（10.82±1.98）岁。各组间性别、年龄差异无统计学意义。

1.2 试剂和仪器 PE-抗IL-17 流式抗体，PE-IL-6 流式抗体，PE-IgG1 同型对照抗体均为美国eBioscience 公司产品；佛波酯、离子霉素、植物血凝素、固定剂和破膜剂为美国Sigma 公司；美能星、流式细胞仪为BD公司；RPMI1640 培养基为Gibco 产品。

1.3 外周血Th17 细胞的检测[6]取100 μL 患者全血，用100 μL RPMI1640 培养基等量稀释，加入1 μL/mL 佛波酯工作液4 μL，37 ℃，5%CO2培养箱培养4～6 h。加入10 μL PECy5 抗CD3 和10 μL FITC抗CD8 单抗，室温、避光、温育15 min。分为2 管，每管加入上述已染色的全血100 μL 编号为a 和b，分别加入固定液100 μL，室温，避光温育15 min，再各自分别加入PBS 3 mL，1 200 r/min 离心5 min，除去上清液。各自再加入破膜剂100 μL，同时在a 管中加入10 μL PE-IgG1 同型对照抗体，b 管中加入10 μL PE-IgG1 抗IL-17 流式抗体，室温，避光温育15 min，每管中加入PBS 3 mL，1 200 r/min 离心5 min，除去上清液，加入0.5 mL PBS 重悬细胞，上机检测。

1.4 血清中IL-17、IL-6 的检测 采清晨空腹静脉血5 mL，离心、取血清，采用ELISA 法检测患者血清及健康组血清中IL-17、IL-6，操作严格按试剂说明书进行。ELISA 试剂盒为晶美生物工程有限公司提供。

1.5 统计学处理 数据以均数±标准差（x±s）表示，采用统计软件SPSS16.0 进行分析。对各组数据进行F 检验，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

不同严重程度特应性皮炎患者外周血Th17 细胞、IL-17、IL-6 水平与健康组比较，差异有统计学意义（P＜0．05），见表1。

表1 各组Th17 细胞比例，IL-17、IL-6 浓度比较 例

3 讨论

AD 是一种与遗传过敏素质有关的慢性炎症性皮肤病，其特征为湿疹样皮损、瘙痒剧烈、皮肤干燥，常伴有血清中IgE 水平增高和外周血嗜酸细胞粒细胞增多的异常免疫现象[7]。Th17 细胞是一种新发现的CD4+T 细胞亚群，可通过分泌IL-17、IL-6等细胞因子诱导产生多种前炎症细胞因子和趋化因子，在自身免疫性炎症中发挥着重要作用[3]。IL-6是一种多功能细胞因子，参与机体的炎性反应过程和能量代谢调节，是炎性反应的细胞因子网络中一个中枢性调节因子，又称前炎性反应细胞因子，参与机体的各种病理生理过程。郑益志等[8]研究发现AD 患者血清中IL-6 明显高于正常健康对照组，与本研究结果相似。Th17 细胞是IL-17 的主要来源细胞，反之IL-17 是Th17 细胞的主要效应分子，两者变化趋势的一致性共同反映了Th17 细胞在AD 发病中的作用。AD 的确切发病机制尚未阐明，因此，从根本上控制本病仍难以实现。进一步研究其发病机制，对于改善当前的治疗手段、开发新的治疗方法非常必要[9-10]。目前国际上已开始研发多种生物制剂,例如作用于IL-17 及其受体的靶向药物,如IL-17R-Ig 融合蛋白、IL-17 抗体等。我们通过研究发现不同严重程度AD 患者外周血Th17 细胞、IL-17、IL-6 水平与正常健康体检者比较明显升高，且随着病情严重程度增加而逐渐增高，说明Th17 细胞及其分泌的细胞因子对AD 的发病及病情发展存在一定的关系, 可尝试用此类生物制剂改善AD 的炎症状态、缓解病情。

[1] 王侠生，廖康煌.杨国亮皮肤病学[M].2 版.上海：上海科学技术文献出版社，2006：395-400.

[2] Bellanti JA,Settipane RA.Atopic Dermatitis,Genetics,Immunology and T regulatory cells[J].Allergy Asthma Proc,2007,28:507-509.

[3] Kolls JK. 17 cells in mucosal immunity and tissue inflammation[J].Semin Immunopathol,2010,32:1-2.

[4] Williams HC, Burney PG J,Hay RJ, et al. The U.K.working party’s diagnostic criteria for Atopic dermatitis[J].Br J Dermatol,1991,131:383-396.

[5] Orange AP, Glazenburg EJ, Wolkerstorfer A, et al. Practical issues on interpretation of scoring atopic dermatitis: the SCORAD index,objective SCORAD and the three item severity score[J].Br J Dermatol,2007,157:645-648.

[6] 沈斌，屠巧峰，冷建杭，等.特应性皮炎患者外周血辅助性T 细胞17 与白介素17 的检测[J].中华皮肤科杂志，2012，45（2）：106-109.

[7] 马蕾，陈世义，李艳阳，等．特应性皮炎患者外周血单个核细胞、血清及泪液中MIF 检测的临床意义[J].中华检验医学杂志，2010，33（10）：1155-1159．

[8] 郑益志，余土根，贾丽莹，等. 特应性皮炎血清瘦素及白细胞介素-6 水平与中医证型相关性研究[J].中华中医药杂志，2013，28（12）：3669-3671.

[9] Gelbard CM,Hebert AA.New and emerging trends in the treatment of atopic dermatitis[J].Patient Prefer Adherence,2008,2:387-392．[10] Katoh N.Future perspectives in the treatment of atopic dermatitis[J].Dermatol,2009,36:367-376.