HPLC法测定蒙药复方述达格-4中庚酮类成分的含量Δ

信莎莎，杨 洋，孙国园，董 玉（内蒙古医科大学药学院，呼和浩特 010059）

蒙药复方述达格-4的法定质量标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准（蒙药分册）》[1]。其处方由高良姜、紫硇砂、木香、石菖蒲（质量比为4∶2∶1∶1）四味药材组成，具有镇“巴达干赫依”、消喘止痛的功能，可用于治疗膈肌痉挛、胸闷气短、胸肋刺痛、消化不良等症。高良姜主要含有黄酮类及庚烷类化合物。本课题组前期对该药进行了分离与鉴定，并测定了其中黄酮类成分的含量[2-4]。在此基础上，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法对前期分离纯化得到的庚烷类成分进行定量测定，以为全面控制蒙药复方述达格-4有效成分的含量提供参考。

1 材料

1260型HPLC仪，包括梯度泵、自动进样器、检测器、柱温箱、化学工作站（美国Agilent公司）；AB135-S型超声波清洗仪（瑞士Mettler-Toledo 公司）；BS224S 型电子分析天平（北京塞多利斯仪器系统公司）。

1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮对照品（内蒙古医科大学药学院实验室自制，纯度：99%）；乙腈（色谱纯，美国Fisher公司）；甲醇、乙醇、三氯甲烷、二氯甲烷、石油醚、丙酮、乙酸乙酯均为分析纯，水为娃哈哈纯净水。

蒙药复方述达格-4中各味药材均由内蒙古天立药材有限公司提供（经内蒙古医科大学药学院乔俊缠教授鉴定为真品）。样品共有4批（编号1～4）。其中，编号1：高良姜（批号：20140410），紫硇砂（批号：20140410），木香（批号：20140101），石菖蒲（批号：20140108）；编号2：高良姜（批号：20140426），紫硇砂（批号：20140410），木香（批号：20140101），石菖蒲（批号：20140108）；编号3：高良姜（批号：20140528），紫硇砂（批号：20140410），木香（批号：20140101），石菖蒲（批号：20140108）；编号4：高良姜（批号：20140707）；紫硇砂（批号：20140410）；木香（批号：20140101）；石菖蒲（批号：20140108）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Intersil ODS-3（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.5%磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0～25 min，45%A→55%A；25～40 min，55%A→100%A）；流速：1.0 ml/min；检测波长：210 nm；柱温：30 ℃；进样量：20 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取经减压干燥至恒质量的1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮对照品0.51 mg，置于10 ml量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液 取复方述达格-4样品5.0 g，精密称定，置于100 ml 圆底烧瓶中，精密加入10 倍体积的50%乙醇，回流提取2次，每次2 h，趁热用棉花粗滤，合并提取液，回收溶剂至无醇味，加蒸馏水稀释至15 ml。后经大孔树脂柱，用2倍体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用8倍体积的50%乙醇洗脱；收集洗脱液，回收溶剂，用70%乙醇定容于25 ml量瓶中，摇匀。精密量取上述溶液1.0 ml，置于25 ml量瓶中，用70%乙醇定容于25 ml量瓶中，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液 按复方述达格-4 比例，制得不含高良姜的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。

2.3 专属性试验

取“2.2”项下对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图1。由图1 可知，供试品中1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮色谱峰能达到有效分离，且保留时间与相应对照品一致；阴性对照溶液在相同保留时间处无色谱峰，表明其余药味对1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮测定无干扰。

图1 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮Fig 1 HPLC chromatogramsA.reference substances；B.test samples；C.negative control；1.1-phenyl-7-（3-methoxy-4-hydroxy）phenyl-5-ol-3-heptanone

2.4 线性关系考察

分别精密量取“2.2.1”项下对照品溶液2.0、6.0、10.0、14.0、16.0、20.0 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以进样量（x，μg）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮回归方程为y＝6 988.436 10x+63.950 60（r＝0.999 9）。结果表明，1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮进样量在0.102～1.02 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取“2.2.1”项下对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样6 次，记录峰面积。结果，1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮峰面积的RSD 为0.50%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取样品（编号1）5.0 g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于放置0、2、4、6、8、10、12、24 h 时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮峰面积的RSD 为0.05%（n＝8），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取本品（编号1）6 份，各5.0 g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮的平均含量为3.421 3%，RSD 为1.52%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

称取已恒质量的干燥药材粉末（编号1）6份，各2.5 g，精密称定，分别加入一定量的1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进行测定，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Table 1Results of recovery tests（n＝6）

2.9 样品含量测定

取4 批样品各适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果4 批样品的含量分别为3.421 3%、3.128 5%、2.848 5%、3.369 5%。

3 讨论

3.1 待测成分的选择

自1885年至今已发现并确立结构的天然线性二苯基庚烷类化合物共有67 个[5]。1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮为二芳基庚烷类化合物，主要存在于姜科植物中，是一类结构比较特殊的化合物。蒙药复方述达格-4中主要药材高良姜为姜科植物，文献报道其主要成分有黄酮类、二芳基庚烷类及挥发油等[6]。有报道对二芳基庚烷类及其单体进行了相关的药理研究[7]，发现1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮具有温胃散寒和消食止痛的作用。本课题从复方整体出发，采用现代化手段，对复方的化学成分进行研究，以确定与复方主治功能相一致的主要活性成分，并对其质量控制方法进行探讨。

3.2 检测波长的选择

采用二极管阵列检测器，以本研究所用的流动相为溶剂，在200～400 nm 波长范围内对1-苯基-7-（3-甲氧基-4-羟基）苯基-5-醇-3-庚酮进行扫描。结果发现，该成分在200～210 nm波长范围内有吸收，但在200 nm波长末端吸收处信号干扰大，基线不平，故选取210 nm为检测波长。

3.3 流动相的选择

在流动相系统的选择中，笔者比较了甲醇-水、甲醇-0.5%磷酸水、乙腈-水、乙腈-0.5%磷酸水等为流动相时的分离情况和出峰时间。结果发现，以乙腈-0.5%磷酸水溶液为流动相，采用梯度洗脱能使样品峰达到良好分离，峰形对称。

综上所述，本方法准确、简便，重复性好，可用于蒙药复方述达格-4的质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：蒙药分册[S].1998：158.

[2]杨洋，贾鑫，董玉，等.蒙药述达格-4 的化学成分研究[J].内蒙古大学学报：自然科学版，2013，44（4）：392.

[3]贾鑫，武娜，董玉.高效液相色谱法测定蒙药复方述达格-4有效部位中山柰素和高良姜素的含量[J].内蒙古医学院学报，2011，33（3）：225.

[4]马强，贾鑫，董玉.高效液相色谱法同时测定蒙药复方述达格-4中3种黄酮类成分的含量[J].内蒙古大学学报：自然科学版，2010，41（6）：665.

[5]罗京超，冯毅凡，吉星.天然线性二苯基庚烷类化合物的研究进展[J].中草药，2008，39（12）：1 912.

[6]郭晓玲，孟青，冯毅凡，等.GC法测定高良姜醇提物中两个二苯基庚烷类化合物[J].中草药，2011，42（8）：1 554.

[7]李洪福，李永辉，王勇，等.高良姜化学成分及药理活性的研究[J].中国实验方剂学杂志，2014，20（7）：236.