宫颈病变中增殖细胞核抗原、Ki-67抗原表达与HPV感染的相关性

杨晓琴

(湖北省来凤县妇幼保健院, 湖北 来凤, 445700)



宫颈病变中增殖细胞核抗原、Ki-67抗原表达与HPV感染的相关性

杨晓琴

(湖北省来凤县妇幼保健院, 湖北 来凤, 445700)

摘要:目的探讨宫颈病变中增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67的表达及其与HPV感染的相关性。方法回顾性分析90例病变宫颈标本，比较不同宫颈病变组织中的PCNA、Ki-67免疫组化结果，并分析其与HPV结果的关系。结果PCNA、Ki-67在CIN、浸润性鳞癌中的表达率均高于慢性宫颈炎中(P<0.05)，而PCNA、Ki-67在CIN与浸润性鳞癌中的表达率无显著差异(P>0.05); PCNA与Ki-67表达强度呈正相关(r=0.719，P<0.05); PCNA、Ki-67表达强度与HPV感染呈正相关关系(r=0.599、0.521，P<0.05)。结论Ki-67和PCNA的表达强度均与宫颈疾病严重程度呈正相关。

关键词:宫颈病变; 增殖细胞核抗原; Ki-67; HPV感染; 相关性分析

宫颈病变作为一类在妇产科临床上比较常见的妇科疾病，严重威胁着妇女的身体健康。宫颈病变中的宫颈癌，其发生与发展与长时间、连续性的宫颈上皮内瘤变(CIN)以及HPV感染存在紧密的联系，这一观点已经得到了广泛的认同[1-2]。而增殖细胞核抗原(PCNA)可以对细胞增殖的速度和细胞内DNA的合成状况进行有效评价，该抗原生成的场所是在细胞核内，其相对分子质量为29kDa[3]。同时，Ki-67抗原也可以对细胞的增殖活性、肿瘤细胞生长以及细胞周期等生物学行为进行评价，是目前使用最为广泛的增殖细胞标记之一[4]。本研究探究PCNA、Ki-67的表达与宫颈病变及HPV感染之间的相关性，现报告如下。

1资料与方法

经本院伦理委员会批准，回顾性分析2011年6月—2014年6月在湖北省来凤县人民医院妇产科行手术治疗切除的90例病变宫颈标本，年龄23～67岁，平均年龄为(51.2±5.1)岁，术后均经病理切片证实存在宫颈病变；90例病变宫颈标本中，包括21例慢性宫颈炎(23.33%)、45例CIN(50.00%)、24例子宫颈浸润性鳞癌(26.67%); 其中21例慢性宫颈炎组织的来源分别为子宫肌瘤、子宫腺肌瘤以及子宫脱垂行全子宫切除术的患者。上述入组患者均经本研究组成员告知本研究的背景、方法及目的后，同意纳入本研究，并签署知情同意书。

术中选取无坏死、典型的病变区域，将组织切取后，立刻使用PBS液进行漂洗至血液等杂志完全被漂洗干净，立即送本院病理科，将组织的HPV-DNA提取出来，用10%的中性福尔马林将余下的组织进行固定，并用石蜡包埋后进行连续切片，切片的层厚为5 μm，进行免疫组化检测与病理诊断。

HPV检测试剂盒(上海星耀医学科技发展有限公司)；Ki-67兔抗人单克隆抗体(上海沪峰科技发展有限公司); PCNA鼠抗人单克隆抗体(上海新肽生物科技有限公司); DAB显色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)。

将本院病理科做好的石蜡切片进行常规HE染色，并运用SP法进行Ki-67和PCNA免疫组化染色，严格依据试剂盒的说明书进行实验的操作，分别使用PBS与宫颈癌组织作为阴性对照和阳性对照。标本HPV的检测采用导流杂交法，严格依据HPV检测试剂盒的说明操作，该试剂盒可以对5种低危HPV亚型、13种中高危HPV亚型、3种中国人常见的HPV亚型进行检测。

运用半定量方法对每个切片独立的3个的视野进行观察，以分析免疫组化结果[5]。对每一个视野中的1 000个细胞进行连续观察，分别取观察到的阳性细胞数量的平均值，并计算其百分率以进行统计学分析。细胞核中有棕黄色的颗粒出现则表示PCNA和Ki-67表达阳性，可以使用增殖指数(PI)来反映阳性率的大小，PI就是阳性细胞占据细胞总数的比例，可以划分为四个不同的等级，PI在0%～10%、10%～25%、25%～50%、50%以上可以依次计为(-)、(+)、(2+)、(3+)，其中(2+)、(3+)属于强阳性。

2结果

2.1　不同宫颈病变中PCNA的表达比较

由表1可知，PCNA在慢性宫颈炎中的阳性表达率仅为52.83%，而在CIN中的阳性表达率为90.00%、浸润性鳞癌中的阳性表达率为100.00%。统计发现，PCNA在CIN、浸润性鳞癌中的表达率均高于慢性宫颈炎中(P<0.05); 而PCNA在CIN与浸润性鳞癌中的表达率相比，差异无统计学意义(P>0.05)。

表1　不同宫颈病变中PCNA的表达

与慢性宫颈炎比较，*P<0.05。

2.2　不同宫颈病变中Ki-67的表达比较

由表2可知，Ki-67在慢性宫颈炎中的阳性表达率仅为38.09%，而在CIN中的阳性表达率为84.44%、浸润性鳞癌中的阳性表达率为100.00%。统计发现，PCNA在CIN、浸润性鳞癌中的表达率均高于慢性宫颈炎中(P<0.05); 而Ki-67在CIN与浸润性鳞癌中的表达率相比，差异无统计学意义(P>0.05)。

表2　不同宫颈病变中Ki-67的表达比较

与慢性宫颈炎比较，*P<0.05。

2.3　PCNA和Ki-67的相关性

经Spearman等级相关分析显示, PCNA与Ki-67表达强度呈正相关关系(r=0.719，P<0.05)。

2.4　PCNA的表达和HPV感染的关系

在90例患者中，HPV感染阳性54例、阴性36例，经Spearman等级相关分析，PCNA表达强度与HPV感染呈正相关关系(r=0.599，P<0.05)。PCNA表达与HPV感染关系比较见表3。

表3　PCNA表达与HPV感染之间关系

2.5　Ki-67的表达和HPV感染的关系

经Spearman等级相关分析, Ki-67表达强度与HPV感染呈正相关关系(r=0.521,P<0.05)。见表4。

3讨论

宫颈病变是一系列宫颈疾病的总称，是女性宫颈常发的病理性变化，广义上包括所有宫颈区域内定的疾病，狭义上是指和宫颈癌的发生具有密切关系的疾病，比如宫颈癌前病变、宫颈癌、HPV亚临床感染[6]。现如今许多学者[7-8]普遍认为HPV感染和宫颈癌的发生与发展具有密切的关系，但是并不是所有HPV感染均能诱发宫颈癌，长时间、连续性的HPV感染才会有发展为宫颈癌的可能性。有研究资料[9]表明，单纯一过性的HPV感染自然消退的平均时间为8个月，并不能够诱发宫颈上皮癌变的发生，并且一过性HPV感染占据了所有HPV感染患者总数的4/5左右。目前已经发现并确定的HPV亚型约有110种，可以诱发生殖道感染的亚型有35种，众多HPV亚型可以分为高危型和低危型两类，其主要是依据和宫颈癌之间的关系进行分类。据WHO[10]报道，HPV感染所诱发的宫颈癌占据宫颈癌患者总数的95%以上。此外，还有研究[11]表明，宫颈癌患者伴有HPV感染的比例在99%以上，只是感染的严重程度有差异。

CIN是宫颈癌前病变，异形增殖细胞浸润宫颈黏膜上皮的下1/3区域内为CINⅠ，异形增殖细胞浸润宫颈黏膜上皮的1/2到2/3之间则为CINⅡ，异形增殖细胞浸润宫颈黏膜上皮的2/3以上者则为CINⅢ，这种CIN分级方式依据了细胞核分裂像的数量和黏膜上皮垂直层次上的病理性核分裂的分布情况[12]，这种分级方式可以反映异形细胞对宫颈黏膜上皮不同层次的侵袭程度，但具有明显的缺陷性，并不能对增殖细胞的性质进行评价，在不同的黏膜上皮层次上均可见到细胞多形性增加、细胞的质量降低、细胞核的体积增大。因而可以认为增殖细胞在黏膜上皮不同层次的浸润有可能只是由增殖细胞的数量变化引起的。如若不能正确的对此进行诊断，可能会引起患者过度的焦虑，并且也有可能使治疗方案的制定不合理[13]。因此，在临床上寻求一种可以准确鉴别CIN病变和良性反应性细胞增生的方法，特别是寻找到检测高度CIN病变的标记物，可以很大程度上降低诊断错误和漏诊的发生率。

本次研究对PCNA、Ki-67的表达与宫颈病变及HPV感染之间的关系进行分析，研究的结果显示, PCNA抗原在宫颈癌组织、慢性宫颈炎和CIN中均为阳性，但是在不同疾病中的表达率不相同，子宫浸润性鳞癌中PCNA抗原的阳性表达率高达100.00%，慢性宫颈炎中其阳性表达率仅为52.83%, CIN中其阳性表达率为90.00%。经统计发现，其在慢性宫颈炎中的阳性表达率均低于在子宫浸润性鳞癌和CIN中的阳性表达率(P<0.05)。通过对HPV感染和PCNA抗原之间的关系分析，PCNA抗原的表达水平和HPV感染呈现出正相关性(r=0.599,P<0.05), 即PCNA抗原的表达水平升高，HPV感染的发生率也随之升高，这与以往学者的观点一致[14]。本次研究对PCNA在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ之间的阳性表达率进行了比较分析，结果显示各组间的差异无统计学意义(P>0.05)，这和徐韶杰等[15]的观点一致,这也说明了PCNA对CIN的分级诊断不具有良好的特异性，不能很好地区别CIN的分级。本研究结果表明，PCNA预测CIN Ⅲ的敏感度很高，可以高达100%, 因此可以作为一种肿瘤标志物并与其他细胞增殖指标一起使用，用于筛查宫颈癌。

本研究结果显示, Ki-67在不同宫颈病变的阳性表达率也不相同，子宫浸润性鳞癌中Ki-67抗原的阳性表达率为100.00%, 慢性宫颈炎中其阳性表达率仅为38.09%, CIN中其阳性表达率为84.44%, 其在慢性宫颈炎中的阳性表达率低于在子宫浸润性鳞癌和CIN中的阳性表达率(P<0.05); 进一步对HPV感染和Ki-67之间的关系分析，显示Ki-67的表达水平和HPV感染呈现出正相关性(r=0.521,P<0.05), 这表明Ki-67可以辅助诊断HPV感染和宫颈癌。本次研究还对Ki-67和PCNA之间的相关性进行了分析，结果显示二者呈现出正相关性。此外，还有学者[16]采用HCⅡ法对CIN石蜡标本的HR-HPV DNA进行测定，结果显示Ki-67的表达水平和CIN的级别具有明显的相关性，并且不同的Ki-67的阳性表达水平和HR-HPV负荷之间的差异性很明显。

参考文献

[1]付玉梅, 张晓坤, 梁惠芬, 等. HC2-HPV-DNA联合TCT筛查宫颈癌早期及癌前病变的临床分析[J]. 实用医学杂志, 2012, 28(11): 1823.

[2]陈蔚, 杨慧娟, 徐军, 等. 宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中LMX1A和PAX1基因甲基化的定量分析[J]. 中国癌症杂志, 2015, (1): 19.

[3]陈仁富, 程伟松, 程乾, 等. 细胞核增殖抗原启动子调控荷载双基因RNA干扰的条件增殖腺病毒的构建[J]. 中华实验外科杂志, 2012, 29(10): 1974.

[4]杜睿, 李月峰, 薛玉, 等. 乳腺浸润性导管癌Ki-67表达与超声造影定量分析的相关性研究[J]. 中华超声影像学杂志, 2014, 23(7): 598.

[5]李绍军, 刘小方. 胆管癌组织中Ezrin蛋白表达水平及其临床价值[J].中国老年学杂志, 2012, 32(14): 2944.

[6]周斌, 左新华, 傅新文, 等.高危型人乳头状瘤病毒16, 18型DNA检测在宫颈病变筛查中的应用价值[J].检验医学, 2012, 27(5): 393.

[7]胡滨, 崔金全, 邓克红, 等. 宫颈癌组织高危型 HPV感染与 HWAPL 蛋白表达的关系[J]. 郑州大学学报: 医学版, 2014, (6): 862.

[8]王又又, 向群英, 佘茜, 等.宫颈癌高发区妇女HPV感染及影响因素分析[J].中国公共卫生, 2011, 27(3): 259.

[9]杨君, 周德平, 陈凤娴, 等.重庆地区2497例妇科就诊患者HPV感染状况分析[J].重庆医科大学学报, 2012, 37(4): 347.

[10]蔡惠芬, 史进方, 顾国浩, 等.宫颈癌组织中B7-H3蛋白的表达变化及其与HPV感染的关系[J].山东医药, 2011, 51(30): 4.

[11]饶卫农. 宫颈疾病妇女HPV感染现状及基因型的分布[J]. 中国现代医学杂志, 2012, 22(19): 50.

[12]曾新, 韩一栩, 吴丽香, 等. HPV在宫颈炎、宫颈癌前病变、宫颈癌中的检测意义分析[J].中国实验诊断学, 2014, 18(1): 127.

[13]陈赛斐. HPV在宫颈炎、宫颈癌前病变、宫颈癌中的检测及意义分析[J].中国妇幼保健, 2011, 26(15): 2392.

[14]王静依, 何剑英, 孟侠, 等. 人乳头瘤病毒感染、增殖细胞核抗原和P53在宫颈鳞状细胞癌中的表达[J]. 中华妇幼临床医学杂志: 电子版, 2011, 07(2): 141.

[15]徐韶杰, 董稚明. PCNA在宫颈鳞癌组织中的表达及意义[J]. 中国妇产科临床杂志, 2011, 12(2): 134.

[16]张观宇, 许立莉, 王建琴, 等. 宫颈液基细胞学检查及上皮内瘤变中Ki-67和PTEN表达的临床意义[J]. 中国医药导报, 2011, 08(28): 89.

Correlation between expressions of proliferating cell nuclear antigen, Ki-67 and HPV infection in cervical lesions

YANG Xiaoqin

(MaternalandChildHealthCareHospitalofLaifengCounty,Laifeng,Hubei, 445700)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the correlation between expressions of proliferating cell nuclear antigen (PCNA), Ki-67 and HPV infection in cervical lesions. MethodsA total of 90 cases of cervical lesions were analyzed retrospectively. Immunohistochemistry results of PCNA and Ki-67 in different cervical lesions were compared, and their correlations with HPV were analyzed.ResultsThe expression rates of PCNA and Ki-67 in CIN and invasive squamous cell carcinoma were significantly higher than those in chronic cervicitis (P<0.05), but there were no significant differences in expression rates of PCNA and Ki-67 between CIN and invasive squamous cell carcinoma (P>0.05). There was a positive correlation between expressions of PCNA and invasive squamous cell carcinoma (r=0.719,P<0.05). There was a positive correlation between the expressions of PCNA, Ki-67 and HPV infection (r=0.599, 0.521,P<0.05).ConclusionExpressions of Ki-67 and PCNA were positively correlated with severity of cervical disease.

KEYWORDS:cervical lesions; proliferating cell nuclear antigen; Ki-67; HPV infection; correlation analysis

收稿日期:2015-04-06

中图分类号:R 711.74

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2015)17-057-04

DOI:10.7619/jcmp.201517018