拉米夫定治疗慢性乙型肝炎预后与HLA-DQ基因多态性的分析

刘文宣，高　霞，李保欣，李　涛，刘文聪，张晓琳*(.河北医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室，河北 石家庄 05007；.河北医科大学第一医院传染病科，河北 石家庄 0500；.河北医科大学第一医院超声科，河北 石家庄 0500)



·论著·

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎预后与HLA-DQ基因多态性的分析

刘文宣1，高霞1，李保欣2，李涛1，刘文聪3，张晓琳1*(1.河北医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室，河北 石家庄 050017；2.河北医科大学第一医院传染病科，河北 石家庄 050031；3.河北医科大学第一医院超声科，河北 石家庄 050031)

[摘要]目的探讨HLA-DQ基因rs2856718和rs927557的2个位点突变是否与拉米夫定(lamivudine，LAM)治疗慢性乙型肝炎预后有关。方法采用调查问卷收集283例研究对象的一般资料，同时收集其外周血，提取DNA，用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)实验平台进行DNA的SNPs分型，使用单因素及多因素Logistic回归方法分析HLA-DQ基因多态性与LAM治疗慢性乙型肝炎预后不同结局的关系。结果携带HLA-DQ基因 rs2856718G和rs9275572A的个体ALT应答的可能性增加(OR=1.732,P=0.034;OR=2.846,P<0.001)。另外，携带rs9275572A的个体DNA应答的可能性也增加(OR=2.387,P=0.007)。结论在中国北方汉族人群中，HLA-DQ的2个SNP位点(rs9275572和rs2856718)与LAM治疗慢性乙型肝炎预后有关，rs9275572A和rs2856718G为ALT应答和DNA应答的保护性因素。

[关键词]乙型肝炎，慢性；拉米夫定；多态性，单核苷酸

doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2015.12.002

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是我国常见的传染病，特别是慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)，给患者带来巨大的身心压力和经济负担，目前尚无特效治疗方法。在我国及大部分亚洲地区，CHB是导致肝硬化(liver cirrhosis,LC)和原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的主要原因[1]，肝硬化、高水平HBV DNA及丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)是HCC的重要危险因素[2]。对于HBV感染患者的治疗主要是通过抑制病毒复制，达到限制或逆转病情的目的。有效的治疗措施可显著提高CHB患者的生存率，降低并发症的发生风险[3]。拉米夫定(lamivudine，LAM)是最早用于治疗CHB的核苷类似物，能有效抑制HBV DNA及ALT水平，改善肝脏组织学病变，它抗病毒能力强，价格低廉，不良反应较小，到目前为止，仍被广泛应用，尤其在部分亚洲国家[4]。然而，长期应用LAM治疗可产生严重的耐药性，其机制可能为HBV病毒变异所致，也可能与机体自身的遗传因素有关。有研究表明，HLA基因可影响LAM治疗CHB的预后[5]。本研究前期结果显示，HLA-DQ基因的2个SNP位点(rs9275572和rs2856718)与HBV感染后的不同结局有关，故我们继续探索上述2个位点突变是否与LAM治疗后的不同结局存在关联。

1资料与方法

1.1一般资料本研究的研究对象来源于石家庄市第五医院、河北医科大学第一医院和河北医科大学第四医院，入院时间为2010年1月—2012年1月，经纳入和排除标准筛选，入组研究对象包括CHB和LC患者，患者均首次单独应用LAM治疗，共283例。男性186例，女性97例，年龄39～61岁，平均(50.08±10.73)岁。病例诊断均符合中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会2010年联合修订的“病毒性肝炎防治方案”的诊断标准。

1.2疗效判定对符合纳入条件的LAM治疗组患者治疗6个月后，根据病毒学应答(DNA检测不到或下降>2 log copies /mL)与否分为2组(DNA应答组与DNA非应答组)，根据生化学应答(ALT在正常参考值范围)分为ALT应答组和ALT非应答组，疗效判定标准参照“慢性乙型肝炎防治指南(2010年)”。

1.3研究方法本研究采用自行设计的调查问卷收集相关资料，调查问卷共3个部分：患者基本情况(性别、年龄、吸烟、饮酒、有无乙型肝炎疫苗接种史等)、发病情况(病程、病情、有无其他疾病、有无家族史等)和检查结果(乙型肝炎5项、HBV DNA定量、ALT水平、AFP水平等)。同时，收集其外周血，提取DNA，用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS)实验平台进行DNA的SNPs分型。本研究所采用SNP分析模型为：共显性模型、显性模型、隐性模型。假设某一突变位点的野生碱基为W，突变碱基为V。在共显性模型中定义该位点可能出现的3种基因型WW、WV、VV分别为0、1、2，基因型分析时的比较方式为WV/VV与WW比较；在显性模型中定义该位点可能出现的3种基因型WW、WV、VV分别为0、1、1，基因型分析时的比较方式为WV+VV与WW比较；在隐性模型中定义该位点可能出现的3种基因型WW、WV、VV分别为0、0、1，基因型分析时的比较方式为VV与WW+WV比较。

2结果

2.1研究对象的一般资料

2.1.1DNA应答组与非应答组一般资料比较DNA应答组患者年龄、性别、治疗前HBVDNA、ALT及AST水平差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

2.1.2ALT应答组与非应答组一般资料比较ALT应答组患者年龄、性别、治疗前HBVDNA、ALT及AST水平差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表1　DNA应答组与非应答组一般资料比较

表2　ALT应答组与非应答组一般资料比较

2.2HLA-DQ多态性位点rs2856718与LAM治疗后DNA应答及ALT应答的关系rs2856718与LAM治疗后DNA应答无关联，但与ALT应答有关，rs2856718A等位基因更容易出现ALT应答。在共显性模型下(GGvsAA)，OR值为2.036(95%CI=1.234～3.064，P=0.002)；在显性模型下(GG+AGvsAA)和隐性模型下(GGvsAA+AG)，OR值分别为1.732(95%CI=1.146～3.158，P=0.034)和1.952(95%CI=1.208～4.127，P=0.033)。见表3～6。

2.3HLA-DQ多态性位点rs9275572与LAM治疗后DNA应答及ALT应答的关系rs9275572与LAM治疗后DNA应答相关，rs9275572G等位基因更容易出现DNA应答。在共显性模型下(AGvsGG:OR=1.987,95%CI=1.059～3.046，P=0.011;AAvsGG:OR=3.532,95%CI=1.752～9.546，P=0.004)、在显性模型下(AA +AGvsGG:OR=2.387,95%CI=1.428～5.034，P=0.007)和隐性模型下(AAvsGG+AG:OR=3.841 95%CI=1.368～8.745，P=0.004)均具有相关性。

rs9275572基因多态性与ALT应答具有相关性，rs9275572G等位基因更容易出现ALT应答。在共显性模型下(AGvsGG:OR=2.358,95%CI=1.462～4.258,P=0.002;AAvsGG:OR=3.083,95%CI=1.357～6.289,P=0.004)、在显性模型下(AA +AGvsGG:OR=2.846,95%CI=1.591～5.163,P<0.001)和隐性模型下(AAvsGG+AG:OR=2.306,95%CI=1.247～5.528,P=0.029)均存在此关联。见表3～6。

表3　DNA应答组与非应答组HLA-DQ基因rs2856718和rs9275572位点基因型频率分布

表4　HLA-DQ基因rs2856718和rs9275572位点突变与DNA应答的关系分析

a:经调整年龄、性别、吸烟、饮酒因素的OR和OR95%CI

表5　ALT应答组HLA-DQ基因rs2856718和rs9275572位点基因型频率分布

表6　HLA-DQ基因rs2856718和rs9275572位点突变与ALT应答的关系分析

a:经调整年龄、性别、吸烟、饮酒因素的OR和OR95%CI

3讨论

本研究首次阐明HLA-DQ的2个SNP位点(rs9275572和rs2856718)与LAM治疗后的DNA应答和ALT应答有关。携带rs9275572A碱基的CHB和LC患者，经LAM治疗后出现DNA应答和ALT应答的可能性更高，在LAM治疗后的DNA应答和ALT应答中起到保护作用，而Kumar等[6]报道的该位点的AA碱基为HCV感染的危险碱基，这可能与HBV和HCV的致病机制不同及研究人群不同有关，但我们的前期研究结果显示该位点在HBV易感性和HBV自然清除中也同样起到保护作用，与在LAM治疗预后中结果一致。rs2856718G同样为LAM治疗后ALT应答的保护性因素。从遗传学角度，结合我们的前期研究结果，可以证实无论是HBV易感性、HBV自然清除及感染后不同的结局，还是LAM治疗后的病毒学应答和生化应答，HLA-DQ的SNP位点rs9275572和rs2856718均起到保护作用，携带rs9275572A和rs2856718G等位基因的个体，HBV易感性降低，HBV自然清除能力增高，DNA和ALT应答率增高。另外，Ahn等[7]报道，HLA-DQ基因的另外2个多态性位点rs3077 and rs9277535也与LAM治疗后血清中的HBsAg水平有关。研究发现，LAM治疗的作用靶点为HBV DNA P基因C区内的高度保守序列YMDD，YMDD突变为YVDD或YIDD，从而可导致LAM治疗耐药[8]。从我们的研究结果来看，LAM的抗病毒疗效除了与HBV自身变异有关以外，还与机体自身的遗传因素有关。在接下来的研究中，我们会进一步探索与LAM疗效有关的其他基因位点。

本研究首次报道了HLA-DQ基因(rs2856718和rs9275572)与LAM治疗预后的关联，发现了可能影响LAM治疗预后的SNP位点，证实了LAM治疗预后可能受到遗传和环境因素的共同影响，为更好地选择合适的抗病毒药物提供了理论基础。本研究也具有一定的局限性，仅为双向性研究，部分患者资料来自临床病例，可能存在回忆偏倚，有待于扩大样本量，采用前瞻性研究设计进一步证实二者的联系。

[参考文献]

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[5]Jin YJ,Shim JH,Chung YH,et al.HLA-DRB1*010101 allele is closely associated with poor virological response to lamivudine therapy in patients with chronic hepatitis B[J].Digestion,2011,84(Suppl 1):35-42.

[6]Kumar V,Kato N,Urabe Y,et al.Genome-wide association study identifies a susceptibility locus for HCV-induced hepatocellular carcinoma[J].Nat Genet,2011,43:455-458.

[7]Ahn SH,Han KH,Park JY,et al.Association between hepatitis B virus infection and HLA-DR type in Korea[J].Hepatology,2000,31(6):1371-1373.

[8]钱福初,秦基取,李栋立,等.拉米夫定治疗后慢性乙肝患者HBV基因组RT区和S区变异分析[J].病毒学报,2015,4(31):433-438.

(本文编辑：刘斯静)

Association ofHLA-DQpolymorphisms and different prognosis to lamivudine therapy

LIU Wen-xuan1,GAO Xia1,LI Bao-xin2,LI Tao1,LIU Wen-cong3,ZHANG Xiao-lin1*

(1.Department of Epidemiology and Statistics,the School of Public Health,Hebei Medical University,Shijiazhuang 050017,China;2.Department of Infections Diseases,the First Hospital of Hebei

Medical University,Shijiazhuang 050031，China;3.Department of Ultrasound,the First Hospital of Hebei Medical University,Shi Jiazhuang 050031,China)

[Abstract]ObjectiveTo study the relevance of two single-nucleotide polymorphisms (HLA-DQrs28567185 and rs9275572) with different prognosis to lamivudine therapy for chronic hepatitis B.MethodsA total of 283 samples were enrolled,and peripheral blood samples were collected in this study.The single-nucleotide polymorphisms in theHLA-DQregion were genotyped using matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry.Logistic regression was applied to case-control comparisons for the different phenotypic outcomes in co-dominant,dominant and recessive genetic models,adjusted for sex and age.ResultsThe study demonstrated the clear relevance ofHLA-DQrs2856718 and rs9275572 with DNA response and ALT response.HLA-DQrs2856718G and rs9275572A were strongly associated with increased risk of ALT response (OR=1.732;P=0.034;OR=2.846,P<0.001).Moreover,rs9275572A was also associated with increased risk of DNA response (OR=2.387,P=0.007).ConclusionOur study suggested thatHLA-DQloci were associated with the different prognosis to lamivudine therapy in Han Chinese,rs2856718G and rs9275572A were protective factors for ALT response and DNA response.

[Key words]hepatitis B,chronic；lamivudine；polymorphism,single nucleotide

[中图分类号]R512.62

[文献标志码]A

[文章编号]1007-3205(2015)12-1371-04

*通讯作者。E-mail:807210221@qq.com

[作者简介]刘文宣(1983-)，女，河北栾城人，河北医科大学公

[基金项目]河北省科学技术研究与发展计划(132777246)；河北

[收稿日期]2015-10-12；[修回日期]2015-11-20

省医学科学研究重点课题(20150627；20150626；20090048)

共卫生学院讲师，医学博士，从事肝病的致病机制研究。