失眠模型下女贞子红景天苷制备物药代动力学分析研究

彭平　孙道涵　冯朵　赵丽敏　杨书娟　朱乃亮　张璐　李焕娟　折改梅　石任兵

失眠模型下女贞子红景天苷制备物药代动力学分析研究

彭平孙道涵冯朵赵丽敏杨书娟朱乃亮张璐李焕娟折改梅石任兵

【摘要】目的阐明女贞子红景天苷制备物作为治疗失眠病症药物的药代动力学表征特性。方法采用超高效液相色谱法，PDA检测器，ACQUITY UPLC H-CLASS T3 色谱柱(50 mm×2.1 mm×1.8 μm)；流动相：乙腈—水(3∶97)，流速0.3 mL/min；柱温25 ℃。结果失眠模型下，入血成分红景天苷Cspan20.24 μg/mL、Tspan0.5 h、T1/22.53 h、K0.27，酪醇Cspan0.49 μg/mL、Tspan0.75 h，血药浓度比值(酪醇∶红景天苷)最大值为3.90∶100，为体外含量比值的12.58倍。结论在失眠模型下，女贞子红景天苷制备物体内主要入血成分为红景天苷和酪醇，且表征出药代协同性；与正常状态比较，表现出体内成分生物利用度增加的药物亲和性。

【关键词】红景天苷；酪醇；药代动力学；失眠；亲和性

红景天苷、酪醇为中药红景天的特性功效性成分，现代药理研究表明，红景天苷具有调节睡眠周期，抗失眠的药理活性，可作为失眠病症治疗药物[1-3]。为了解决红景天的资源缺乏状态，本实验组发明并建立了从女贞子药材中提取，并经碱转化后，大孔树脂分离富集制备红景天苷的方法，所得女贞子红景天苷制备物(简称：制备物)以自然药学观为指导，经药物体系研究导向制备而来[4-9]。为探寻其药物自然性、协同性、亲和性[10-11]，本实验组前期研究建立了超高效液相色谱法，PDA检测器同时测定红景天苷和酪醇的体内分析方法(体内红景天苷、酪醇的最低检测浓度分别为0.5 μg/mL、0.25 μg/mL，最低定量浓度分别为1 μg/mL、0.5 μg/mL，平均回收率分别为90.97%、92.33%)，发现了制备物在正常状态大鼠体内可同时检出红景天苷和酪醇两成分，测其在正常大鼠体内药代动力学表征为：红景天苷最大血药浓度值(Cmax)为19.29 μg/mL、最大血药浓度时间(Tmax)0.5 h、半衰期(T1/2) 3.28 h、曲线下面积(AUC0-t)21.00 μg/mL*h、平均滞留时间(MRT)3.43 h清除率K为0.21，酪醇最大血药浓度值(Cmax)为0.32 μg/mL最大血药浓度时间(Tmax)0.75 h，体内同存酪醇与红景天苷血药浓度比值(以红景天苷为参比)最大为2.99∶100，为制备物样品含量比值的9.65倍。在药代动力学-成分相互作用(PK-DI)关联研究中还发现了制备物中以红景天苷与酪醇为主要有效成分的有关药物体系在偏头痛模型下表现出药代协同吸收性。

本文研究在PCPA致大鼠失眠模型下女贞子红景天苷制备物药代动力学表征，并同时与正常状态下的药代表征对比分析结果，以阐明其作为治疗失眠病症药物的药代动力学表征特性，发现药物与病理模型之间的特性表征，为进一步基于本制备物进行抗失眠的药物创新提供科学依据。

1材料

1.1仪器

Waters ACQUITY超高效液相色谱仪，PDA检测器，Empower工作站，自动进样；Waters ACQUITY UPLC H-CLASS T3色谱柱(50 mm×2.1 mm×1.8 μm)，METTLER TOLEDO XS204分析天平(METTLER TOLEDO，瑞士)，METTLER TOLEDO XP26分析天平(METTLER TOLEDO，瑞士)，sigma 1-14小型台式离心机(sigma，德国)，Labconco(r) CentriVap离心浓缩仪(LABCONCO，美国)，涡旋混合器(其林贝尔，中国)，0.22 μm微孔滤器。

1.2药品与试剂

红景天苷对照品(北京方程生物科技有限公司，批号130426；含量99.9%)、水杨苷对照品(北京方程生物科技有限公司，生产批号121118；含量99.9%)、酪醇对照品(北京方程生物科技有限公司，批号120927；含量99.9%)、高氯酸(分析纯，天津市鑫源化工有限公司)、色谱乙腈(色谱纯，Fisher公司)、哇哈哈纯净水、对氯苯丙氨酸(批号：C6506，SIGMA)。

女贞子红景天苷制备物：取女贞子药材(浙江产地)70%乙醇提取，经碱转化后，大孔树脂分离富集制备而得。(批次：20130926，由课题组制备，样品经高效液相色谱法测定，红景天苷含量64.5%，酪醇含量0.2%)。

1.3实验动物

健康Sprague-Dawley(SD)，雌性，大鼠，体质量200～220 g，鼠龄6～8周，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号：SCXK(京)2012-0001，批号20131021。

2方法

2.1给药方案与样品采集

SD大鼠随机分为14组(分别为14个取血时间点组)，每组5只，采用腹腔注射PCPA剂量300 mg/kg致大鼠失眠模型，连续注射造模7天，于末次注射PCPA后30分钟灌胃给药女贞子红景天苷制备物。

失眠模型大鼠，采用单次灌胃给药女贞子红景天苷制备物，给药剂量60 mg/kg，于给药后2分钟、5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、1.5小时、2小时、3小时、4小时、8小时、12小时、24小时腹主动脉取血，每次5 mL，10000 r/min离心15分钟，分离血清，即为含药血清，于-80℃保存备用。

2.2血药浓度测定方法

血样处理方法：取300 μL含药血清，置于2 mL离心管内，准确加入50 μL浓度为100 μg/mL的内标水杨苷溶液，涡旋30秒，加0.4 mol/mL高氯酸180 μL，涡旋30秒，静置15分钟，14800 r/min高速离心15分钟，取上清液200 μL加1 μL 50%NaOH调pH到6～7，过0.22 μm微孔滤器，供UPLC-PDA检测分析。

2.3液相色谱分析条件

液相色谱条件Waters ACQUITY超高效液相色谱仪，PDA检测器，Empower工作站，ACQUITY UPLC H-CLASS T3色谱柱(50 mm×2.1 mm×1.8 μm)；流动相：乙腈—水(3∶97)，流速为0.3 mL/min；柱温为25℃；进样体积为10 μL，检测波长276 nm。

3结果

3.1失眠模型下红景天苷制备物药代动力学测定结果

取各给药组血清样品制备测定，计算失眠模型大鼠给药后各时间点体内红景天苷、酪醇的血药浓度，结果见表1。

表1　失眠模型大鼠给药后不同时间点体内

拟合失眠模型大鼠给药红景天苷制备物后体内入血成分药—时曲线见图1。

图1　失眠模型大鼠给药红景天苷制备物后　体内入血成分药-时曲线

采用生物学统计软件PKsolver计算得各给药组体内红景天药代动力学参数，见表2。

3.2药代动力学-成分相互作用(PK-DI)关联分析结果

由表2可知，失眠模型下红景天苷制备物给药后，体内成分红景天苷Tmax为0.5 h，由体内酪醇成分血药浓度值分析可知体内成分酪醇Tmax为0.75 h；在失眠状态下，红景天苷和酪醇两成分的体内Tmax值基本一致，体内酪醇与红景天苷成分有一定共血药时间，可产生相互作用药动学协同吸收特性。

表2　失眠大鼠体内红景天苷成分药代动力学参数

3.3红景天苷及酪醇体内外含量相对比值分析

以红景天苷含量为参比，计算体内外制备物中成分酪醇含量与红景天苷含量比值(体外含量比例为：酪醇含量/红景天苷含量；体内浓度比值为：酪醇血药浓度/红景天苷血药浓度)以表征制备物体内外药物体系组成，结果见表3。

表3　失眠模型大鼠体内外红景天苷与酪醇含量比值

结果显示，以红景天苷含量为参比，酪醇与红景天苷含量比值排序为：制备物体外<体内0.25小时<体内0.5小时<体内0.75小时<体内1小时；在大鼠体内酪醇与红景天苷含量比值较制备物增大了7.13～12.58倍，且从给药后0.25小时到1小时持续了0.75小时的增量动态变化。

4讨论

4.1不同状态下药代动力学-成分(PK-DI)相互作用关联比较分析结果

红景天苷制备物在失眠模型下与正常状态下大鼠体内成分药代动力学参数比较分析，设正常状态下制备物组药代动力学参数为1，计算分别两组体内红景天苷、酪醇成分药代动力学参数比值(失眠模型组∶正常状态组)可知，体内成分红景天苷：Tmax(0.5、0.5)比值为1∶1，即失眠组=正常组，Cmax(20.24、19.29)比值为1.05∶1，即失眠组>正常组，AUC0-t(28.31、21.00)比值为1.35∶1，即失眠组>正常组，清除率K(0.27、0.21)比值为1.29∶1，即失眠组>正常组，T1/2(2.53、3.28)比值为0.77∶1，即失眠组<正常组，MRT(2.80、3.43)比值为0.82∶1，即失眠组<正常组；体内成分酪醇：Tmax(0.75、0.75)比值为1∶1，即失眠组=正常组，Cmax(0.49、0.32)比值为1.53∶1，即失眠组>正常组；分析表明在失眠模型下红景天苷制备物药物体内红景天苷和酪醇成分生物利用度均较正常状态下高，体内代谢速度较快。

4.2不同状态下红景天苷及酪醇体内外含量相对比值分析

结果显示，以红景天苷含量为参比，酪醇与红景天苷含量比值(3.90∶100)，明显大于前期实验研究结果：正常状态下最大比值(2.99∶100)，且从给药后15分钟到1小时持续了45分钟的增量动态变化，失眠模型下体内同存酪醇与红景天苷血药浓度比值可见失眠状态下体内酪醇与红景天苷成分共血药时间较正常状态下延长，两成分的体内协同作用较正常状态下加强。

失眠模型大鼠给药女贞子红景天苷制备物给药后，体内主要以红景天苷、酪醇两种成分入血，其药代动力学特性表征为体内酪醇、红景天苷两成分药动学协同吸收，且在失眠模型下，红景天苷制备物两入血成分生物利用度均较正常状态下高，尤以酪醇与红景天苷血药浓度比值明显增大，体内两成分酪醇与红景天苷共血药时间延长；可见，在失眠模型下红景天苷制备物药物体内成分药动学协同作用增强，表现出药物对失眠病症的亲和性。

基于自然药学观指导思想，自然药物具有自然性、协同性、亲和性三大特性，本研究以药物“三性”为研究导向，着力药物组成成分研究、成分相互作用研究、成分与病理状态关联研究，揭示了女贞子红景天苷制备物药物作为治疗失眠病症药物的药代动力学表征特性，其在失眠模型下显示出红景天苷与酪醇构成药物体系，表征出药代协同性与对失眠病症状态的亲和性，为进一步基于本制备物进行抗失眠的药物创新提供了科学依据。

参考文献

[1]李尔逊，许光辉，李廷利，等.红景天苷对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间影响的实验研究[J].中医药学报，2008，36(1)：25-26.

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[4]周文娟，石任兵.女贞子有效部位制备工艺及其质量控制方法研究[D]．北京：北京中医药大学，2008．

[5]石任兵，周文娟，田恒康，等．一种从女贞子中制备高纯度红景天苷的方法：中国，CN101279992[P]．2008-10-08．

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[8]彭晓敏，石任兵.基于碱转化的女贞子中红景天苷制备工艺及其质量标准研究[D]．北京：北京中医药大学，2012．

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[10]石任兵，王永炎.自然药学观的相关性思考[J].北京中医药大学学报，2012，35(4)：221-225．

[11]石任兵，王永炎，姜艳艳，等.论中药化学发展近况[J].北京中医药大学学报，2012，35(3)：153-159．

(本文编辑：董历华)

·启事·

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·论著·

作者单位：100069 首都医科大学中医药学院[韩虹娟(硕士研究生)、李冬华、张武芳、耿建国]；首都医科大学附属北京妇产医院妇幼保健院(钱睿亚)；首都医科大学附属北京中医医院妇科(许昕、黄玉华、赵文景)；首都医科大学附属复兴医院月坛社区卫生服务中心中医科(倪婧)

Study on the pharmacokinetic characterization of salidroside drugs in the insomnia model rats

PENGPing，SUNDao-han，FENGDuo，etal.KeyUnitofExploringEffectiveSubstancesofClassicalandFamousFormulasofStateAdministrationofTraditionalChineseMedicine，SchoolofChinesePharmacy，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100102，China

【Abstract】ObjectiveTo study the pharmacokinetic characterization of Salidroside drug which was prepared from Fructus Ligustri Lucidi as a drug for insomnia treatment. MethodsThe drug content was measured by UPLC with PDA detector. Analyzes was performed on an ACQUITY UPLC H-CLASS T3(50 mm×2.1 mm, 1.8 μm) column with salicin as the internal standard. The mobile phase was acetonitrile:water solution (3:97, v/v) at a flow rate of 0.3 mL/min. The temperature of column was 25℃. ResultsThe Cmax, Tmax, T1/2, and K of salidroside were 20.24 μg/mL, 0.5 h, 2.53 h, and 0.27 in insomnia rats, respectively; and the Cmax, Tmax of tyrosol were 0.49 μg/mL and 0.75 h respectively in insomnia rats. The maximum content ratio of tyrosol / salidroside was 3.90/100, which was 12.58 times higher than that in vitro. ConclusionSalidroside and tyrosol were the main components of salidroside drug into the blood and they exhibited a synergistic effect for absorption in the insomnia model rats. The bioavailability of drug was increased in insomnia model rats when compared with the health rats.

【Key words】Salidroside； Tyrosol； Pharmacokinetic； Insomnia； Adaptation

通讯作者：李冬华(1972- )，女，博士，教授，硕士生导师。研究方向：中药防治妇科肿瘤机制研究。E-mail:dududoctor@163.com

作者简介：韩虹娟(1987- )，女，2012级硕士研究生。研究方向：中药防治妇科肿瘤机制研究。E-mail:hanhongjuan0508@126.com

基金项目：国家自然科学基金(81373812，81073096)

(收稿日期：2014-09-10)

Corresponding author：SHI Ren-bing，E-mail:shirb@126.com

【中图分类号】R285.5

【文献标识码】A

doi:10.3969/j.issn.1674-1749.2015.03.006