高功率多普勒血流探测仪结合血流成像仪观察氯吡格雷对高血压大鼠微循环的影响*

刘晓庆 仉红刚 张秋菊 李乾豪 修瑞娟

高功率多普勒血流探测仪结合血流成像仪观察氯吡格雷对高血压大鼠微循环的影响*

刘晓庆 仉红刚#张秋菊 李乾豪 修瑞娟

目的：观察抗血小板药物氯吡格雷对高血压大鼠微循环的影响。方法：SPF级雄性13周龄自发性高血压大鼠(SHR)，随机分为溶剂对照组和氯吡格雷组，每组5只,分别灌胃1ml 0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)和氯吡格雷溶液(10mg/kg)，每日一次。连续四周后，用高功率激光多普勒血流探测仪(LDF)检测大鼠脑皮质、耳廓及趾血流量、血细胞聚集度和血流速度，用血流成像仪(LDPI)观察脑血流分布状态。统计学分析检测指标的组间差异。结果：除血细胞聚集度和脑皮质血流速度外，氯吡格雷组大鼠上述LDF检测指标值均高于溶剂对照组(P<0.05或P<0.01)，LDPI检测脑皮质血流分布曲线整体右移，脑皮质高血流量(800-1500PU)面积百分比较溶剂对照组明显增加(P<0.01)。结论：氯吡格雷可明显改善SHR微循环障碍。

氯吡格雷；微循环；激光多普勒；自发性高血压大鼠

有研究[1]表明我国高血压发病率已达29.6%，约每3个成人中就有1人是高血压患者。不同个体高血压的病因和机制不尽相同，目前研究主要集中在交感神经系统活性亢进、肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)激活及胰岛素抵抗等环节，微循环障碍也备受关注。临床治疗高血压除降压药物外，抗血小板治疗已成为改善高血压预后的重要内容[2]。本文采用高功率激光多普勒血流探测仪(LDF)和成像仪(LDPI)观察分析抗血小板药物氯吡格雷(Clopidogrel)对自发性高血压大鼠(SHR)微循环障碍的影响，为临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物和分组

SPF级13周龄雄性SHR 10只，购自北京维通利华公司[生产许可号:SCXK(京)2012-0001]，体重270±10g。适应性饲养3天后，按随机数字表法分为溶剂对照组和氯吡格雷组(n均=5)。两组大鼠分笼饲养，自由摄食、进水，保持环境安静，12h周期光照，室温24±2℃。实验及实验后处理均符合中国医学科学院北京协和医学院伦理委员会要求。

1.2 试剂和药物

0.5% 羧甲基纤维素钠(CMC-Na，美国Sigma公司)；氯吡格雷片(法国赛诺菲制药有限公司，批号：4A686)，实验时碾压成粉末溶于0.5%CMC-Na中，避光保存。

1.3 仪器及分析软件

LDF和LDPI均来自英国Moor公司，型号分别为moor VMS-LDF1-HP和moor LDI-HIR；数据分析软件分别为moor VMS-PC Version 3.1 for Vascular Monitor System和moor LDI Image Review Version 5.3。

1.4 实验动物给药

溶剂对照组大鼠给予0.5% CMC-Na 1ml灌胃，氯吡格雷组给予氯吡格雷溶液(剂量为10mg/kg，参考相关文献[3]中人和大鼠药物剂量换算关系确定)。1次/天，持续4周。

1.5 微循环观察方法和指标

治疗结束后，3%戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。在室温(23℃)中将大鼠左侧卧位，分别于大鼠右耳耳廓边缘近心端5mm处、右后肢中趾背侧向心端5mm处放置LDF探头，连续测量其血流量、血细胞聚集度和血流速度2min。再将大鼠俯卧位，头部备皮，矢状位剪开额顶部皮肤2cm，暴露颅骨前囟及左侧颅骨，标定前囟左5mm、后3mm处放置LDF探头，连续测量其血流量、血细胞聚集度和血流速度2min。最后将此暴露部位置于LDPI下，进行脑血流成像监测。数据分析软件可直接输出监测2min内的各项指标数值，在其平稳时段内选取5个时点的数值进行统计学分析。

1.6 统计学处理

2 结 果

2.1 两组大鼠血流量比较及脑皮质血流分布

LDF监测结果显示，氯吡格雷组大鼠脑皮质、耳廓及趾血流量值(PU)均明显高于溶剂对照组(t值分别为2.426、4.851和2.589)，见表1。LDPI监测显示氯吡格雷组大鼠脑血流分布曲线较溶剂对照组整体右移，高血流量(800-1500PU)面积百分比明显大于溶剂对照组(48.40±13.12 vs 17.70±8.64，t=4.358，P<0.01)，见图1。

表1 两组大鼠血流量均=5)

注：与溶剂对照组比较，1)P<0.05，2)P<0.01

2.2 两组大鼠血细胞聚集度比较

LDF监测结果显示，两组大鼠脑皮质、耳廓及趾血细胞聚集度差异无统计学意义(t值分别为1.105、1.130和0.778，P>0.05)，见表2。

表2 两组大鼠血细胞聚集度均=5)

2.3 两组大鼠血流速度比较

LDF监测结果显示，氯吡格雷组大鼠耳廓及趾的血流速度比溶剂对照组明显加快(t值分别为5.388和3.298，P<0.05或P<0.01)，两组间脑皮质血流速度差异无统计学意义(t=1.105，P>0.05),见表3。

表3 两组大鼠血流速度均=5)

注：与溶剂对照组比较，1)P<0.05，2)P<0.01

3 讨 论

微循环功能障碍是高血压等心血管系统疾病的重要病理生理过程，并且对高血压引起的多种终末器官损伤起至关重要的作用[4]。较多研究显示，高血压患者或高血压动物模型均存在微循环血流量降低、血流速度减慢等障碍性表现[5-7]。降压治疗和抗血小板药物对改善高血压患者症状、体征以及预防脑卒中等并发症有非常积极的意义[2]。氯吡格雷是常用的抗血小板药物之一，主要经过肝脏细胞色素P450(CYP450)同工酶CYP3A4、CYP2C19以及CYP3A5氧化成具有活性的硫氢基代谢产物，通过阻断二磷酸腺苷(ADP)与其受体(P2Y12受体)结合而抑制血小板活化[8]。此外，氯吡格雷还具有抑制炎症反应、改善血管功能、提高一氧化氮(NO)生物利用率以及抑制内皮微粒产生等作用[9-12]，故在临床治疗心血管疾病应用较广泛。

图1 两组大鼠脑皮质血流分布曲线(n均=5)

LDF是一种先进激光多普勒技术，通过实时连续监测组织微循环血流灌注、血细胞聚集度以及血液流速，可真实反映体表和组织器官的微循环状态[13]。随着其多种激光探头的出现、灵敏度的提高以及LDPI的运用，使LDF检测更加形象、广泛和灵活。高功率LDF扫描深度可达3mm，不需要打开颅骨即可准确测定颅骨下脑皮质微循环状态，结合LDPI可清晰显示血流分布情况。本文采用该技术观察氯吡格雷对原发性高血压大鼠脑皮质、耳廓及趾的血流量、血流速度、血细胞聚集度和脑皮质血流分布变化的影响，取得的相应结果说明这一技术可为研究药物对微循环的影响提供新的方式和方法。

研究发现，应用氯吡格雷干预可改善微循环，如提高血管舒张程度，从而改善皮肤微血管功能[14]，降低2型糖尿病患者循环内皮细胞水平[15]等。本实验结果表明SHR脑皮质、耳廓及趾血流量和血流速度均明显降低，脑皮质高血流量面积减小，经氯吡格雷干预四周后，SHR上述微循环指标均显著高于溶剂对照组，证实氯吡格雷可以通过提高组织器官血流量和血流速度，改变血流分布，达到改善微循环的目标。这与有关氯吡格雷通过调控微血管舒缩能力，减少异常微血管结构，增加微血管数目从而改善高血压预后并降低心、脑并发症发生[3,4]的报告结果相符合。所以，应用氯吡格雷干预可能有利于防治高血压患者并发心、脑血管疾病。

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本文第一作者简介：

刘晓庆(1988—)，女，汉族，硕士研究生，主要研究方向：内皮细胞损伤与高血压微循环障碍

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2 Lip YH, Felmeden DC, Dwivedi G. Antiplatelet agents and anticoagulants for hypertension[J]. Cochrane Database Syst Rev, 2011, 7(12): CD003186.

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13 刘育英. 微循环研究技术的进展[J]. 微循环学杂志, 2014, 24(2): 1-4.

14 Dahmus JD, Bruning RS, Kenney WL, et al. Oral clopidogrel improves cutaneous microvascular function through EDHF-dependent mechanisms in middle-aged humans[J]. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol, 2013, 305(4): 26.

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口服头孢克洛发生血清病样反应患儿的肠道通透性变化

本刊编委，武汉市儿童医院向贇教授和张振(共同第一作者)等在《European journal of pediatrics》(2013, 172: 537-543，4区，IF=1.983)发表了题为“Intestinal mucosal permeability of children with cefaclor-associated serum sickness-like reactions”的研究论文，主要内容如下：

1 研究背景和目的：头孢克洛为第5代抗生素，病原微生物感染者在服用过程中会产生药物副作用，如皮疹、血管神经性水肿、荨麻疹、多形性红斑、关节炎、关节痛、发热等血清病样反应(SSLR)，且在儿科患者中较频发。本文通过检测口服头孢克洛患儿尿乳果糖、尿甘露醇及血浆二胺氧化酶(DAO)水平及尿乳果糖/甘露醇(L/M)比值，研究头孢克洛SSLR对患儿肠道通透性的影响及其机制，为合理有效利用头孢克洛、降低副作用提供实验依据。

2 主要方法：82例上呼吸道感染患儿，口服头孢克洛后发生SSLR者为SSLR阳性组(n=42)，未发生SSLR者为SSLR阴性组(n=40)，同时选择30例健康儿童作为对照组。在患儿口服头孢克洛后的第7、9、11、13、15天，利用高效液相色谱法检测尿乳果糖、尿甘露醇含量后计算尿L/M比值，利用酶分光光度法检测血浆DAO水平；对照组儿童不口服头孢克洛，平行检测相同指标。

3 结果：SSLR阳性组患儿尿L/M比值从口服头孢克洛后的第7天至13天逐渐增加，第13天达到峰值，随后开始下降，但均高于同时点的SSLR阴性组和对照组(P<0.05)；SSLR阴性组和对照组儿童尿L/M比值差异无统计学意义(P>0.05)。SSLR阳性组患儿第9、11、13、15天的血浆DAO水平高于同时点的SSLR阴性组和对照组(P<0.05)；SSLR阴性组和对照组血浆DAO差异无统计学意义(P>0.05)。SSLR阳性组患儿尿L/M比值的变化早于血浆DAO。

4 结论：尿L/M比值和血浆DAO水平升高可反映头孢克洛SSLR患儿的肠道通透性变化。

Effects of Clopidogrel on Microcirculation of Spontaneous Hypertensive Rats by High Power Laser Doppler Flowmetry Combined with Laser Doppler Perfusion Imaging

LIU Xiao-qing，ZHANG Hong-gang#，ZHANG Qiu-ju，LI Qian-hao，XIU Rui-juan

Institute of Microcirculation，Peking Union Medical College & Chinese Academy of Medical Sciences，Key Laboratory of Microcirculation，Ministry of Health，Beijing 100005，China；#

Objective: To observe the effect of antiplatelet drug(Clopidogrel) on the microcirculation of Spontaneous Hypertensive Rat(SHR). Method: Two groups of 13-week-old male SHRs were studied with 5 rats in each group: placebo control and clopidogrel (10mg/kg). Drugs therapy was administered by oral perfusion for 4 weeks continuously. The blood flow, blood flow velocity, blood cell aggregation and whole distribution curve of blood flow of SHR's cerebral cortices, auricles and toes were detected by the high power Laser Doppler flowmetry and the Laser Doppler Perfusion Imaging.Results: In SHR treated with clopidogrel, the above indexes were significantly increased comparing with placebo control group(P<0.05 orP<0.01)except blood cell aggregation and blood flow of cerebral cortices. The whole distribution curve of blood flow moved to the right and the high blood flow of cerebral cortices (800-1500PU) was obviously increased comparing with placebo control group(P<0.01).Conclusion: Clopidogrel can improve the SHR’s microcirculation.

Clopidogrel; Microcirculation; Laser doppler; Spontaneous Hypertension Rat

国家自然科学基金(11274046)

北京协和医学院 中国医学科学院微循环研究所，卫生部微循环重点实验室，北京 100005；#

，zhanghg1966126@imc.pumc.edu.cn

本文2014-12-15收到，2015-02-28修回

R331.3+5 R544.1

A

1005-1740(2015)02-0030-04