胸腔积液结核感染T细胞斑点试验在结核性胸腔积液中的诊断价值

刘　琳，胡　克

(武汉大学人民医院呼吸内科，武汉 430060)



胸腔积液结核感染T细胞斑点试验在结核性胸腔积液中的诊断价值

刘琳，胡克※

(武汉大学人民医院呼吸内科，武汉 430060)

摘要：目的探讨胸腔积液结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)用于结核性胸腔积液(TBPE)诊断的临床价值。方法选择2012年10月至2013年11月武汉大学人民医院呼吸内科收治的疑似TBPE患者56例，采用胸腔积液、血T-SPOT.TB、结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)试验、胸腔积液腺苷脱氨酶(ADA)检测试验4种方法对两组患者进行检测，并对比4种检测方法的诊断价值。结果56例疑似TBPE患者中，依据实验室检测结果，结合临床症状及随访情况最终确诊TBPE 32例，非TBPE 24例。胸腔积液T-SPOT.TB、血T-SPOT.TB、PPD试验、胸腔积液ADA预测TBPE的灵敏度分别为96.9%、81.3%、37.5%、37.5%，其中胸腔积液T-SPOT.TB预测TBPE的灵敏度显著高于其他3种方法。胸腔积液T-SPOT.TB、血T-SPOT.TB、PPD试验、胸腔积液ADA预测TBPE的特异度分别为83.3%、75.0%、70.59%、100.0%。胸腔积液T-SPOT.TB、血T-SPOT.TB、PPD试验、胸腔积液ADA预测TBPE的阳性预测值分别为83.8%、81.3%、70.6%、100.0%。胸腔积液T-SPOT.TB、血T-SPOT.TB、PPD试验、胸腔积液ADA预测TBPE的阴性预测值分别为95.2%、75.0%、37.5%、51.2%，其中胸腔积液T-SPOT.TB预测TBPE的阴性预测值显著高于其他3种方法。结论胸腔积液T-SPOT.TB用于TBPE的诊断特异度和其他诊断方法相当，但其具有高灵敏度、高阴性预测值等优点。因此，将胸腔积液T-SPOT.TB用于TBPE疑似患者的快速诊断，具有重要临床价值。

关键词：结核病；结核性胸腔积液；结核感染T细胞斑点试验；诊断；疗效

结核性胸膜炎是肺外结核中较为常见的一种疾病，其人群发病率较高，症状也较为严重[1-2]。其中结核性胸腔积液(tuberculous pleural effusion,TBPE)是结核性胸膜炎最常见的临床症状[3-4]。目前诊断TBPE的方法较多，如结核菌素纯蛋白衍生物(purified protein deriva- tive of tuberculin，PPD)试验、胸腔积液腺苷脱氨酶(ascitic fluid adenosine deaminase，ADA)等，但这些方法诊断TBPE存在灵敏度和特异度较低等不足[5-6]。很多研究显示，结核感染T细胞斑点试验(tuberculosis infected T cells spot test，T-SPOT.TB)应用于结核性疾病的临床诊断中具有很高的诊断价值[7-8]。本研究旨在探讨胸腔积液T-SPOT.TB用于TBPE诊断的临床价值。

1资料与方法

1.1一般资料选择2012年10月至2013年11月武汉大学人民医院呼吸内科收治的疑似TBPE患者56例，男35例、女21例，年龄21~82岁，平均(31±6)岁。56例疑似患者根据临床症状、实验室检查结果及随访情况最终确诊。

1.2诊断标准

1.2.1TBPE组

1.2.1.1实验室诊断胸腔积液结核杆菌培养阳性，胸膜病检可见结核典型改变(如干酪样坏死)。

1.2.2非TBP病组随访1~3个月无结核症状；临床排除结核感染。

1.3T-SPOT.TB检测

1.3.1外周血单个核细胞分离根据T-SPOT.TB试验试剂盒的操作说明，采集5 mL外周血，将核细胞分离，无血清培养液重悬细胞，将细胞悬液制备成工作液(浓度2.5×105个/100 μL)。

1.3.2胸腔积液单个核细胞分离采集患者胸腔积液5~10 mL置肝素锂抗凝管即刻混匀，余下步骤同1.3.1。

1.3.3具体检测步骤96微孔板(包被干扰素γ单抗)上阴性对照孔：加入50 μL无血清培养液(从上到下)；A孔：50 μL早期分泌抗原靶6抗原；B孔：50 μL培养滤液蛋白10抗原；阳性对照孔：50 μL植物血凝素；最后在上述4孔中各加入100 μL细胞工作液，然后将孔板置于5% CO2培养箱(37 ℃，孵育10~20 h)，取出后，采取磷酸盐缓冲液洗板4次，后将二抗加入每孔中，再孵育1 h(4~10 ℃)，再洗板4次(采取PBS)，加50 μL/孔底物工作液，后显色7 min(常温避光)，蒸馏水冲洗终止反应，室温晾干培养板(2~3 h)。结果判断：使用斑点计数法判断阴性或阳性。阳性(+)：阴性对照斑点数为0~5个，(A或B孔斑点数-阴性孔斑点数)≥6；阴性对照斑点数≥6，A或B孔斑点数≥2倍阴性孔。阴性(-)：A、B孔斑点数达不到上面标准，且阳性对照反应良好[7]。

1.4PPD试验、胸腔积液ADA检测PPD试验硬结直径≥5 mm为阳性；TBPE胸腔积液诊断临界值：ADA≥30 U/L；以上几种检测方法均在本院完成。

2结果

2.1确诊情况56例疑似TBPE患者中最终确诊TBPE 32例，非TBPE 24例。TBPE中男20例、女12例，年龄21~78岁，平均(30±4)岁，16例为单纯结核性胸膜炎，15例合并肺结核，1例合并腹腔结核；非TBPE中男15例、女9例，年龄24~82岁，平均(33±6)岁。

2.24种方法检测TBPE的灵敏度分析4种诊断方法中胸腔积液T-SPOT.TB预测TBPE的灵敏度最高，见表1。

表1　不同方法检测TBPE的灵敏度比较

TBPE：结核性胸腔积液； T-SPOT.TB：结核感染T细胞斑点试验； PPD：结核菌素纯蛋白衍生物； ADA：胸腔积液腺苷脱氨酶

2.34种方法检测TBPE的特异度分析胸腔积液T-SPOT.TB、血T-SPOT.TB、PPD试验、胸腔积液ADA预测TBPE的特异度分别为83.3%、75.0%、70.6%、100.0%，见表2。

2.44种方法检测TBPE的阳性预测值分析胸腔积液T-SPOT.TB、血T-SPOT.TB、PPD试验、胸腔积液ADA预测TBPE的阳性预测值分别为83.8%、81.3%、70.6%、100.0%，见表3。

表2　不同方法检测TBPE的特异度比较

TBPE：结核性胸腔积液； T-SPOT.TB：结核感染T细胞斑点试验； PPD：结核菌素纯蛋白衍生物； ADA：胸腔积液腺苷脱氨酶

表3　不同方法检测TBPE的阳性预测值比较

TBPE：结核性胸腔积液； T-SPOT.TB：结核感染T细胞斑点试验； PPD：结核菌素纯蛋白衍生物； ADA：胸腔积液腺苷脱氨酶

2.54种方法检测TBPE的阴性预测值分析4种诊断方法中胸腔积液T-SPOT.TB预测TBPE的阴性预测值最高，见表4。

表4　不同方法检测TBPE的阴性预测值比较

TBPE：结核性胸腔积液； T-SPOT.TB：结核感染T细胞斑点试验； PPD：结核菌素纯蛋白衍生物； ADA：胸腔积液腺苷脱氨酶

3讨论

目前诊断结核的方法较多，如PPD试验、胸腔积液或腹水ADA等均可以对结核感染疾病进行检测[9-15]。但每种检测方法的灵敏度和特异度均有差异。PPD是检测结核类疾病较为常用的方法，其优点是操作方便、检测效率高，但PPD成分中含有的抗原可与空气中非结核杆菌成分发生交叉感染，因此接种过卡介苗的地区假阳性比例较高，影响了检测的准确性。周乐亮等[2]报道，PPD检测结核性腹膜炎灵敏度仅为37.5%，特异度为70.0%，阴性预测值更低，仅为31.8%。张瑛等[5]也证实，PPD检测结核感染疾病灵敏度较低。郑春华等[3]报道，虽然PPD诊断结核感染效率高，但准确性受交叉感染影响，假阳性结果较多，因此准确率低。本研究中PPD检测TBPE的灵敏度为37.5%，特异度、阴性预测值分别为70.6%、37.5%，与相关文献报道一致[1-2]。本研究中PPD灵敏度低的原因是主要受TBPE患者的感染时间、接触环境、免疫力、年龄、营养状况等多重影响；特异度仅为70.0%，主要与我国实行卡介苗接种的整体环境有关。提示PPD试验作为结核类疾病的常用检测方法，对结核诊断的准确率较低，因此单纯仅进行PPD检测存在较大的不足。

近年来胸腔积液ADA不断受到研究界的关注。大部分学者认为ADA用于结核疾病的诊断具有较大的临床价值，相较其他检测方法，其检测特异度较高，很多研究显示可达100.0%[1-2,6]。Keng等[6]研究发现，感染结核性疾病组患者ADA检测水平显著高于未感染结核疾病组。Selek等[1]也报道，ADA诊断结核性感染特异度近100%。周乐亮等[2]研究也证实，ADA诊断特异度为100%。但与其他检测结核的方法相比，ADA诊断灵敏度并不高。两项研究[1,6]均证实，ADA诊断结核感染灵敏度<40%。周乐亮等[2]的研究中ADA检测灵敏度仅为36.4%。本研究显示，胸腔积液ADA诊断TBPE的灵敏度为37.5%，而特异度高达100%，与文献报道一致[1-2,6]。提示胸腔积液ADA诊断TBPE特异度较高，对TBPE诊断具有较高的临床价值，但其灵敏性较差，因而影响了整体检测效果。

T-SPOT.TB为近年来新兴的用于检测结核感染疾病的一种方法。由于其检测过程中不存在与卡介苗及周围环境发生交叉感染的可能，因此其诊断结核疾病的特异度比较高，可达70%以上。另一方面，T-SPOT.TB用于检测结核类疾病，具有很高的敏感性。Keng等[6]研究发现，感染结核性胸膜炎的患者T-SPOT.TB检测阳性率明显高于未感染者。郑春华等[3]报道，T-SPOT.TB诊断TBPE的特异度可达84.8%，而灵敏度则高达92.5%。周乐亮等[2]报道，T-SPOT.TB诊断结核类疾病特异度为76.5%，灵敏度为91.7%。而刘珍琼等[15]将胸腔积液T-SPOT.TB和血T-SPOT.TB诊断TBPE的功效进行对比发现，胸腔积液T-SPOT.TB诊断TBPE的灵敏度、特异度均高于血T-SPOT.TB(93.75%比81.25%；96.15%比92.30%)。本研究显示，胸腔积液T-SPOT.TB检测TBPE的特异度为83.3%，灵敏度高达96.9%，与其他3种方法比较差异有统计学意义(P<0.05)，与相关文献报道结果接近[1-3,6,15]。这也进一步证实，胸腔积液T-SPOT.TB用于TBPE的诊断拥有很高的特异度和灵敏度。提示胸腔积液T-SPOT.TB用于TBPE的临床诊断具有很高的诊断价值和现实意义。

T-SPOT.TB检测结核类疾病具有较高的阴性预测值。周乐亮等[2]报道T-SPOT.TB诊断结核性疾病阴性预测值高达86.75%，远高于检测结核感染的其他方法。Sultan等[7]报道，多种因素可引起T-SPOT.TB检测过程中出现假阴性结果，如免疫力低下、环境因素等均可引起较高的假阴性病例。刘珍琼等[15]报道，胸腔积液T-SPOT.TB和血T-SPOT.TB诊断TBPE的阳性预测值分别为96.77%和92.86%，阴性预测值分别为92.59%和80.0%，胸腔积液T-SPOT.TB阴性预测值明显高于血T-SPOT.TB检测的结果。本研究显示，胸腔积液T-SPOT.TB检测中出现1例假阴性结果，其阴性预测值为95.2%，与其他相关文献报道一致[2,7,15]。提示胸腔积液T-SPOT.TB诊断TBPE具有较高的阴性预测值。

综上所述，胸腔积液T-SPOT.TB用于TBPE的诊断，特异度和其他诊断方法相当，但其具有高灵敏度、高阴性预测值等优点。因此，将胸腔积液T-SPOT.TB用于TBPE疑似病例的快速诊断，具有重要临床价值。

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Diagnostic Value of Pleural Effusion T-SPOT.TB in Tuberculous Pleural EffusionLIULin，HUKe.(DepartmentofRespiratoryMedicine,People′sHospitalofWuhanUniversity,Wuhan430060，China)

Abstract：ObjectiveTo explore the clinical value of pleural effusion t-spot.tb test (T-SPOT.TB) used for the diagnosis of tuberculous pleural effusion(TBPE).MethodsA total of 56 suspected TBPE cases admitted to People′s Hospital of Wuhan University from Oct. 2012 to Nov. 2013 were included in the study.Four methods,namely pleural effusion and blood T-SPOT.TB,tuberculin purified protein derivative(PPD) test,and pleural effusion adenosine deaminase (ADA) were used to test the two groups,and the diagnostic value of the four detection methods were compared.ResultsAmong the 56 cases of suspected TBPE,according to the results of laboratory tests combined with clinical symptoms,there were 32 TBPE cases and 24 non-TBPE cases.The sensitivity of the four methods predicting TBPE were 96.9%,81.3%,37.5%,37.5% respectively,and sensitivity of pleural effusion T-SPOT.TB was higher than the other three methods.The specificity of the four methods predicting TBPE were 83.3%,75.0%,70.59%,100.0%,respectively.The positive predictive value of the four methods predicting TBPE were 83.8%,81.3%,70.59%,100.0%,respectively.The negative predictive value of the four methods predicting TBPE were 95.2%,75.0%,37.5%,51.22% respectively,and the negative predictive value of pleural effusion T-SPOT.TB was higher than the other three methods.ConclusionThe specificity of pleural effusion T-SPOT.TB diagnosing TBPE is similar to other diagnosis methods, but it has higher sensitivity,and higher negative predictive value. So pleural effusion T-SPOT.TB has important clinical value for rapid diagnosis of suspected TBPE cases.

Key words:Tuberculosis; Tuberculous pleural effusion; Tuberculosis infected T cells spot test; Diagnose; Curative effect

收稿日期：2014-07-08修回日期：2014-11-11编辑：伊姗

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.02.051

中图分类号：R521

文献标识码：A

文章编号：1006-2084(2015)02-0324-03