4－氨基安替比林分光光度法测定苯酚滴耳液中苯酚含量

潘 杰，戴学文，李 晗，房志仲

（1.天津市中心妇产科医院药剂科，天津300100；2.天津医科大学药学院药剂学教研室，天津市临床药物关键技术重点实验室，天津300070）

论著

4－氨基安替比林分光光度法测定苯酚滴耳液中苯酚含量

潘 杰1，戴学文2，李 晗2，房志仲2

（1.天津市中心妇产科医院药剂科，天津300100；2.天津医科大学药学院药剂学教研室，天津市临床药物关键技术重点实验室，天津300070）

目的：探讨一种更为简便、快速的测定苯酚滴耳液中苯酚含量的方法。方法：苯酚与4－氨基安替比林在铁氰化钾的作用下，溶液显橙红色，在520 nm处呈最大吸收，可直接用分光光度法测定苯酚的含量。结果：在520 nm测定波长下，苯酚浓度在1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0和4.5μg/mL范围内呈良好的线性关系。回归方程：Y=0.1408X－4.4762×10－3（r＝0．999 9，n＝3），测定方法的平均回收率为99.72%，平均日内差和日间差RSD分别为0.44%和0.63%；3批样品的含量较为均匀，平均含量为0.196 g/ mL，平均RSD为0.63%。结论：该方法较为简便，灵敏，结果准确可靠。

苯酚；滴耳液；4－氨基安替比林；分光光度法；含量测定

苯酚滴耳液有消炎、止痛作用，临床主要用于中耳炎及外耳道炎的治疗。苯酚滴耳液作为医院制剂收载于《中国医院制剂规范》[1]，该规范和《中国药典》2010年版（二部）[2]均采用溴量滴定法测定其含量，溴量滴定法操作较繁琐，且溴有挥发性及一定的毒性，给分析测定带来不便，不适宜医院制剂快速分析的需要。另据文献报道，也可采用紫外分光光度法[3-5]及高效液相色谱法[6]测定苯酚的含量。苯酚于pH10.0±0.7介质中，在铁氰化钾存在下，与4-氨基安替比林反应，生成橙红色的吲哚酚氨基安替比林染料[7]，其水溶液在520 nm波长处有最大吸收，本文采用4－氨基安替比林分光光度法测定苯酚滴耳液中苯酚含量。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

1.1.1 仪器 紫外可见分光光度计(U3310，日本岛津公司)；紫外可见分光光度计（T6-新世纪，北京普析通用仪器有限公司）；电子分析天平（BP210S，北京赛多利斯天平有限公司）。

1.1.2 试药 苯酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100509200401）；苯酚（江门市恒健药业有限公司，批号：081001）；甘油（北京燕京药业有限公司提供，批号：20090111）；苯酚滴耳液（由天津医科大学药剂学教研室制备，批号：20130916；20130918；20130925）；4－氨基安替比林、铁氰化钾、氯化铵和氨水为市售分析纯，重蒸水自制。

1.2 方法

1.2.1 试剂配制

1.2.1.1 苯酚标准液的配制：称取 1.00 g苯酚（C6H5OH）溶于重蒸水，定量移入1 000mL量瓶中并定容，得到苯酚储备液。精密量取储备液1.0mL，置100mL量瓶中，用重蒸水定容，得到10μg/mL苯酚标准液。

1.2.1.2 缓冲溶液的配制：称取20 g氯化铵(NH4Cl)溶于100mL氨水中，密塞，置冰箱中保存。

1.2.1.3 4-氨基安替比林溶液的配制：称取2 g 4-氨基安替比林（C11H13N3O）溶于水中，稀释至100mL置冰箱中保存。

1.2.1.4 铁氰化钾溶液的配制：称取8 g铁氰化钾（K3[F e（CN）6])溶于重蒸水稀释至100mL。

1.2.2 样品溶液的配制 取苯酚滴耳液至5mL量瓶中定容，将其定量转移至100mL量瓶中，以重蒸水定容；再精密量取该稀释液1.0mL至100mL量瓶中以重蒸水定容，得到待测样品溶液；平行配制空白对照溶液（去除苯酚）。

1.2.3 苯酚滴耳液及空白对照溶液吸收图谱的测定 分别精密量取“1.2.2项下”待测样品溶液5.0 mL置50mL量瓶中，加入2.0mL缓冲溶液，混匀，再依次加入4－氨基安替比林溶液1.0mL，铁氰化钾溶液1.0mL，重蒸水定容。精密量取空白溶液5mL，加入2.0mL缓冲溶液，混匀，再依次加入4－氨基安替比林溶液1.0mL，铁氰化钾溶液1.0mL，重蒸水定容，作空白对照。分别在520 nm波长下测定其吸收度。

1.2.4 标准曲线的制备 分别精密量取“1.2.1.1项下”苯酚标液5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5、20.0mL置50mL量瓶中，分别加入2.0mL缓冲溶液，混匀，以下操作同“1.2.3项下”。在520 nm波长下测定其吸收度。以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标做线性回归，计算回归方程。

1.2.5 稳定性试验 随机抽取苯酚滴耳液样品（批号：20130918），操作同“1.2.3项下”，测定吸光度值，室温下放置，分别在0、1、2、4、6 h测定吸光度，计算RSD。

1.2.6 精密度试验 照“1.2.3项下”操作，分别对3批样品进行测定，计算RSD。

1.2.7 回收率试验 精密量取已知含量的苯酚滴耳液样品（批号：20130918），精密加入不同量的苯酚标准液，照“1.2.2项下”和“1.2.3项下”操作方法制得待测液，测定含量，计算回收率。

1.2.8 含量测定 照“1.2.2项下”分别配制3批待测样品溶液，以下操作同“1.2.3项下”，遂行空白对照。在520 nm波长下测定其吸光度A值，代入回归方程计算各样品中苯酚的含量。

2 结果

2.1 最大吸收波长确定 在300～700 nm波长范围内分别进行光谱扫描。苯酚滴耳液样品在520.8 nm处有最大吸收，而空白对照溶液在该波长下吸光度＜0.01，故选520 nm为测定波长，见图1。

图1 样品与空白对照液的扫描图Fig 1 Scanning chromatogramsof the sampleand blank

2.2 标准曲线 不同浓度的标准溶液的吸光度值如表1所示，回归方程：Y=0.140 8X－4.476 2×10-3，r= 0．999 9（n＝3）。

表1 不同浓度的标准溶液的吸光度值Tab 1 Absorbancevaluesof different standard concentrations

2.3 稳定性试验 吸光度在6 h内稳定，RSD= 0.44%。

2.4 精密度试验 每批配制3份样品进行测定，平均日内差和日间差RSD分别为0.44%和0.63%。

2.5 回收率试验 按照80%、100%和120%3种添加量，精密量取苯酚标液1.6、2.0和2.4mL（相当于含苯酚 16μg、20μg和24μg），平均回收率为99.72%，RSD为0.33%，见表2。

表2 样品回收率测定结果Tab 2 Recovery testsof samples

2.6 含量测定 3批样品的含量较为均匀，分别为0.197 5 g/mL、0.199 9 g/mL和0.190 6 g/mL，平均RSD为0.63%，结果见表3。

表3 样品含量测定结果Tab 3 Content determ ination of samples

3 讨论

配制样品溶液时，苯酚滴耳液为甘油剂，药液黏稠度较大，无法用移液管量取，且苯酚浓度较大，以5mL量瓶定量量取后转移至100mL量瓶中再稀释，可以消除取样时造成的误差。

文献报道曾在270 nm处测定苯酚的含量[5]，但本试验中苯酚滴耳液中的甘油在270 nm处也有吸收，而甘油+4-氨基安替比林+铁氰化钾反应后，在520 nm处甘油的吸光度＜0.01，以甘油做空白对照，可以消除干扰。

与溴量法测定含量结果比较（3个批号的测定结果分别为0.196 5、0.198 9和0.191 0 g/mL），经t检验（均P＞0.05），两种测定方法一致，无差异，该方法可以作为医院制剂室对该制剂的快速检验方法。

[1]中华人民共和国卫生部药政局.《中国医院制剂规范》[M].北京：中国医药科技出版社,1995：155-155

[2]药典委员会.《中国药典》2010年版（二部）[M].北京：化学工业出版社,2010：325-326

[3] 卢今,程钢,屈建,等.炉甘石洗剂的质量控制[J].中国药师, 2013,16(7)：1012

[4]朱红旗,薛子坤.紫外分光光度法测定苯酚甘油滴耳液中苯酚的含量[J].齐鲁药事,2006,25(6)：344

[5]朱铁梁,杨波,郝素云.紫外分光光度法测定苯酚滴耳液的含量[J].武警医学院学报,2010,19(8)：605

[6]陈晓峰,沈花.高效液相色谱法测定消炎止痒醑中苯酚的含量[J].抗感染药学,2011,8(4)：268

[7]国家环境保护局.水质挥发酚的测定-蒸馏后4-氨基安替比林分光度法[S].《中华人民共和国国家标准》,GB 7409-87,1987：130-138

（2014-05-09收稿）

Determ ination of phenol in phenolear dropsby 4-am ino-antipyrine spectrophotometry

PAN Jie1,DAIXue-wen2,LIHan2,FANGZhi-zhong2
（1．Department of Ph armacy,Tianjin Center Hospital of Obstetrics and Gynecology,Tianjin 300100,China;2.Department of Pharmacy, College of Pharmacy,Tianjin MedicalUniversity,Tianjin Key Laboratory on Technologies Enabling DevelopmentofClinical Therapeutics and Diagnostic s（Theranostics），Tianjin 300070,Chin a）

Objective:To develop a simple,effectivemethod forcontentdetermination ofphenol in phenoleardrops.Methods:Under the effectof potassium ferricyanide,the solution containing phenol and 4-aminoantipyrene showed orange red and themaximum absorption wavelength was 520 nm.The contents was directly determined by spectrophotometric method.Results:With themaximum absorption wavelength being 520 nm,the linear range ofphenolwas1.0～4.5μg/mL (r＝0.999 9,n=3),and the regression equationwas Y=0.1408X－4.4762×10-3.Theaverage recovery ratewas99.72%,and RSD ofintra-day and inter-day precisionwere0.44%and 0.63%,respectively.No significantdifferencewas found in the contentsof thesamplesdetermined byestablishedmethod,with theaverage contentbeing0.196 g/mL and RSD 0.63%.Conclusion:Theestablishedmethod issimple,efficientand accurate.

phenol;ear drops;4-amino-antipyrine;spectrophotometry;contentdetermination

R927.2

A

1006－8147（2015）01-0087-03

潘杰（1969-），男，主管药师，研究方向：临床药学；通信作者，房志仲，E-mail:fangzhizhong@tijmu.edu.cn。