不明原因复发性流产患者外周血及蜕膜组织中Th17细胞相关效应细胞因子的表达及意义

陈　静, 李慕军, 黄千贻, 蔡君英, 万江帆

(广西医科大学第一附属医院 广西生殖医学研究中心, 广西 南宁, 530021)

不明原因复发性流产患者外周血及蜕膜组织中Th17细胞相关效应细胞因子的表达及意义

陈静, 李慕军, 黄千贻, 蔡君英, 万江帆

(广西医科大学第一附属医院 广西生殖医学研究中心, 广西 南宁, 530021)

摘要:目的探讨不明原因复发性自然流产(URSA)患者外周血及蜕膜组织中Th17细胞相关效应细胞因子白细胞介素(IL)-6、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-17、IL-23的表达及意义。方法20例URSA患者，设为URSA组; 20例同期正常早孕要求行人工流产手术孕妇，设为NP组。2组受试者均采集静脉血5 mL及自行排出或人工流产术刮取的蜕膜组织，采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清及蜕膜组织中IL-6、TGF-β、IL-17、IL-23水平。结果URSA组患者血清及蜕膜组织中IL-6、IL-17、IL-23水平显著高于NP组(P<0.01), TGF-β水平显著低于NP组(P<0.01) 。结论Th17细胞相关细胞因子IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β可能参与了URSA患者母胎免疫, IL-23有望成为URSA新的治疗靶标。

关键词:不明原因复发性自然流产; Th17细胞; 白细胞介素-23; 母胎免疫; 蜕膜组织

复发性流产(RSA)是指妊娠20周以前，与同一性伴侣连续发生的2次或2次以上的自然流产[1]。排除染色体异常、解剖结构异常、内分泌紊乱、感染、凝血功能异常、自身免疫异常等病因，仍有50%RSA患者病因未明，称不明原因复发性自然流产(URSA)[2-3]。随着相关研究的不断深入，越来越多的学者认为免疫学异常是URSA的重要病因。Th17细胞是新近发现的不同于Th1、Th2及调节性T细胞(Treg细胞)的具有独立功能的效应性T细胞亚群[4]。本研究通过检测URSA患者外周血及蜕膜组织中Th17细胞相关效应细胞因子白细胞介素(IL)-6、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-17、IL-23的表达，探讨Th17细胞相关效应因子对URSA患者母胎免疫的影响，及其在URSA发生和发展过程中可能的生物学意义，现报告如下。

1资料与方法

1.1　一般资料

选取2014年6月—2015年1月在广西医科大学第一附属医院就诊的URSA患者20例，设为URSA组。年龄(30.56±5.41)岁；月经周期(30.05±3.68) d, 妊娠时间(57.67±8.46) d。“不明原因”标准: ① 骨盆检查及B超检查排除生殖道解剖畸形; ② 宫颈黏液培养排除支原体、衣原体等感染; ③ 夫妻双方及流产胎儿染色体检查排除遗传问题; ④ 排除黄体功能不足、多囊卵巢综合征、高泌乳素血症、高雄激素血症、糖尿病、甲状腺功能亢进综合征、甲状腺功能低下综合征等内分泌疾病; ⑤ 以部分活化凝血酶时间(APTT)作为检测狼疮抗凝物质的筛查实验，排除APTT异常患者; ⑥ 检测抗心脂抗体、抗核抗体正常排除系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病; ⑦ 根据世界卫生组织标准所有RSA患者男伴精液均在正常范围。选取本院就诊正常早孕要求行人工流产手术的孕妇20例，设为NP组。年龄(29.76±5.32)岁；月经周期(30.01±2.58) d, 妊娠时间(56.37±7.91) d。以往无自然流产、死胎、死产史，无生殖道感染以及自身免疫病史。孕期无腹痛和阴道出血，B超提示胚胎发育正常，可见原始心管搏动。2组年龄等一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2　方法

URSA组患者门诊B超动态监测未见原始胎心搏动或胎心搏动停止，即刻住院，予干燥无添加真空采血管采集静脉血5 mL, 并于24 h内服药自行排出胚胎或行人工流产术。NP组孕妇于人流前予干燥无添加真空采血管采集静脉血5 mL。4 ℃下，以1 000 g离心15 min, 取血清分装，于-80 ℃冻存待测。自行排出或人工流产术刮取的蜕膜组织，经磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗去除血液及坏死组织，取500 mg组织，加入1 mL PBS，组织研磨器研磨后，反复冻融2次破坏细胞壁, 4 ℃下，以5 000 g离心5 min, 取上清液分装，于-80 ℃冻存待测。血清及组织匀浆液分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-6、TGF-β、IL-17、IL-23水平，试剂盒均购自上海源叶生物科技有限公司，操作严格参照说明书进行。

1.3　观察指标

观察2组受试者血清及蜕膜组织中IL-6、TGF-β、IL-17、IL-23水平。

2结果

2.1　2组血清中IL-6、TGF-β、IL-17、IL-23水平比较

URSA组患者血清中IL-6、IL-17、IL-23水平显著高于NP组(P<0.01), TGF-β水平显著低于NP组(P<0.01)。见表1。

2.2　2组蜕膜组织中IL-6、TGF-β、IL-17、IL-23水平比较

URSA组患者血清中IL-6、IL-17、IL-23水平显著高于NP组(P<0.01), TGF-β水平显著低于NP组(P<0.01)。见表2。

组别IL-6TGF-βIL-17IL-23URSA组(n=20)39.32±8.2911.09±2.9342.62±6.2525.27±6.25NP组(n=20)15.32±5.17**19.27±4.08**22.26±4.48**12.64±2.63**

与URSA组比较，**P<0.01。

组别IL-6TGF-βIL-17IL-23URSA组(n=20)38.03±5.8910.99±3.1548.76±5.1631.73±4.66NP组(n=20)20.78±4.36**19.79±4.46**20.47±2.87**13.87±2.90**

与URSA组比较，**P<0.01。

3讨论

成功妊娠是同种异体移植及免疫学原理的唯一例外，母体对携带父系抗原的胚胎的免疫耐受，有赖于独特的母-胎界面免疫微环境的平衡。平衡一旦失调就可能引起免疫调节异常，导致RSA发生[5]。研究[6-7]发现RSA与器官移植排斥反应有着相类似的发病机制，推测URSA很大程度上与免疫耐受失衡相关。T细胞、巨噬细胞、NK细胞分泌的细胞因子之间的平衡紊乱对URSA发病的影响越来越引起人们关注。2005年Park H首次在小鼠身上发现Th17细胞，因其特异性产生IL-17而命名[8]。Th17细胞参与炎性反应、自身免疫性疾病、肿瘤和移植排斥等的发生和发展，因此检测USRA患者Th17细胞相关细胞因子尤为重要。

IL-17是Th17细胞的主要效应因子，具有促炎症作用，能够诱导促炎性细胞因子、趋化因子和基质金属蛋白酶的表达，诱导中性粒细胞的活化与聚集，引起组织细胞浸润和组织破坏等[9]。IL-23是由P19和P40亚单位以共价二硫键结合组成的异二聚体分子，其与IL-12共用一个亚基单位，主要由树突状细胞分泌。IL-23与Th17细胞有着密切的联系，一方面IL-23能刺激CD4+T细胞增殖，促使Th17细胞分化[10]; 另一方面IL-23能诱导记忆T细胞分泌IL-17[11]。免疫调节因子TGF-β和多效性促炎因子IL-6是诱导幼稚CD4+T淋巴细胞向Th17细胞分化的关键的细胞因子[12], TGF-β和IL-6共存时，能够诱导CD4+T细胞大量增殖分化为Th17细胞；而当IL-6单独作用时, CD4+T细胞增殖分化为Treg细胞，具有免疫抑制及免疫逃逸作用[13-14]。本研究结果显示, URSA组患者外周血和蜕膜组织中IL-17、IL-23、IL-6水平明显高于NP组, TGF-β显著低于NP组。提示URSA组中高浓度的IL-6、IL-23, 低浓度的TGF-β, 能够诱导CD4+T细胞诱导分化为成熟Th17细胞，大量分泌IL-17, 血清及局部蜕膜组织中IL-17水平增高，炎症反应加剧，破坏了胚胎组织细胞的增殖、分化及胎盘血管的形成。

综上所述, IL-6、TGF-β、IL-17、IL-23可能直接参与了URSA患者的母胎免疫，但这些细胞因子在URSA中的具体发病机制及与其他细胞因子的相互作用有待进一步研究探讨。另有研究[15]表明, TGF-β和IL-6诱导产生的Th17细胞清除病原体的能力非常弱，只有进一步在IL-23的影响下才能发育为高致病性的Th17细胞。IL-23在URSA的发病机制中可能处于关键地位，并有望成为免疫治疗URSA的新靶点。

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Expression of certain cytokines by Th17 cells in

peripheral blood and decidual tissues of patients

with unexplained recurrent spontaneous abortion

CHEN Jing, LI Mujun, HUANG Qianyi, CAI Junying, WAN Jiangfan

(GuangxiReproductiveMedicineResearchCenter,TheFirstAffiliatedHospitalof

GuangxiMedicalUniversity,Nanning,Guangxi, 530021)

ABSTRACT:ObjectiveTo investigate the expression of certain cytokines by Th17 cells [including interleukin-6 (IL-6), transforming growth factor-β (TGF-β), IL-17 and IL-23] in peripheral blood and decidual tissues of patients with unexplained recurrent spontaneous abortion (URSA). MethodsTwenty URSA patients (URSA group) and 20 early pregnancy women with induced abortion (NP group) were included. The expressions of IL-6, TGF-β, IL-17 and IL-23 in peripheral blood and decidual tissues in both groups were detected by ELISA. Resultsthe expression level of IL-6、IL-17 and IL-23 in peripheral blood and decidual tissues in URSA group were significantly higher than those in NP group (P<0.01). Compared with NP group, URSA Group had lower level of TGF-β in both peripheral blood and decidual tissues (P<0.01). Conclusion L-6, IL-17, IL-23 and TGF-β may participate in maternal-fetal immune, and IL-23 is a potential therapeutic target for URSA.

KEYWORDS:unexplained recurrent spontaneous abortion; Th17; IL-23; maternal-fetal immune; decidual tissues

通信作者:李慕军, E-mail: limujun12@126.com

收稿日期:2015-02-20

中图分类号:R 714.21

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2015)09-091-03

DOI:10.7619/jcmp.201509026