E-钙黏附蛋白、骨桥蛋白在宫颈鳞癌中的表达及其与预后的关系

周　行, 张文先, 罗　琼, 甘　平

(四川省广元市中心医院 妇产科, 四川 广元, 628000)

E-钙黏附蛋白、骨桥蛋白在宫颈鳞癌中的表达及其与预后的关系

周行, 张文先, 罗琼, 甘平

(四川省广元市中心医院 妇产科, 四川 广元, 628000)

摘要:目的探讨E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、骨桥蛋白(OPN)在宫颈鳞癌中的表达及其与预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测78例宫颈鳞癌、30例正常宫颈组织中E-cadherin、OPN的表达，评价二者与宫颈鳞癌临床病理参数及预后的关系。结果正常宫颈组织、宫颈鳞癌中E-cadherin的阳性表达呈明显下降(P<0.05), E-cadherin阳性表达率与临床分期、组织学分级、淋巴结转移有关(P<0.05)。正常宫颈组织、宫颈鳞癌中OPN的阳性表达呈显著上升(P<0.05), OPN阳性表达率与组织学分级、淋巴结转移有关(P<0.05)。E-cadherin表达阴性、OPN表达阳性的患者的总生存率显著低于E-cadherin表达阳性、OPN表达阴性的患者(P<0.05)。多因素分析表明，淋巴结转移、E-cadherin和OPN的表达与预后不良有关(P<0.05)。E-cadherin、OPN的表达呈负相关(r=0.321,P<0.01)。结论E-cadherin表达降低或缺失和OPN高度表达与宫颈鳞癌的发生、进展及转移密切相关。

关键词:宫颈鳞癌; E-cadherin; 骨桥蛋白; 免疫组化; 预后

宫颈癌发病率近年来呈上升趋势，严重危害女性生命健康，其发生是多种致癌因素长期协调作用的结果。研究[1-2]表明，E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、骨桥蛋白(OPN)在恶性肿瘤中的异常表达与肿瘤浸润、转移及差的预后有关。本研究采用免疫组化技术检测宫颈鳞癌组织中E-cadherin、OPN的表达，探讨其与宫颈鳞癌的临床病理特征及预后的关系。

1资料与方法

1.1　一般资料

选取2003年1月—2011年1月四川广元市中心医院手术切除或活检的子宫颈鳞癌78例，患者年龄30～74岁，中位年龄为49.5岁。根据FIGO分期: Ⅰ期14例，Ⅱ期29例，Ⅲ期20例，Ⅳ期15例；组织分级为G1～G245例, G333例。患者术前均未行化疗、放疗。选择同期的正常宫颈组织30例作为对照。

1.2　试剂与方法

鼠抗人上皮性钙黏附蛋白单克隆抗体(即用型)、鼠抗人骨桥蛋白单克隆抗体(即用型)、免疫组化SP试剂盒、浓缩型DAB试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术公司，实验步骤严格按说明书进行。以已确定的阳性标本切片为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3　结果判断

E-cadherin阳性染色定位于细胞膜，呈连续的细胞膜染色; OPN阳性染色主要定位于细胞质，呈棕黄色或棕褐色。高倍镜下(×400)每张切片随机观察5个视野，每个视野计数100个肿瘤细胞中的阳性细胞数。阳性肿瘤细胞数<10%为阴性(-), ≥10%为阳性(+)。见图1、2。

图1 E-cadherin阳性棕黄色颗粒表达于宫颈癌的细胞膜 SP 400倍

图2 OPN阳性棕黄色颗粒表达于宫颈癌的细胞质 SP 400倍

2结果

2.1　E-cadherin、OPN在不同宫颈组织中的表达

E-cadherin在正常宫颈组织、宫颈鳞癌组织中的阳性表达呈下降趋势，分别为100%、48.7%, 差异有统计学意义(P<0.05)。OPN在正常宫颈组织、宫颈鳞癌组织中的阳性表达呈显著上升趋势，分别为13.3%、83.3%, 差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2　E-cadherin、OPN在宫颈鳞癌组织中的表达与临床病理特征的关系

E-cadherin、OPN在宫颈鳞癌组织中的表达与临床病理特征的关系见表1。

表1　E-cadherin、OPN在宫颈鳞癌组织中的

2.3　子宫颈鳞癌组织中E-cadherin、OPN表达的相关性

采用Spearman等级相关分析, E-cadherin、OPN在宫颈鳞癌中的表达呈负相关(r=0.321,P<0.01)。见表2。

表2　子宫颈鳞癌中E-cadherin、OPN表达的相关性

2.4　子宫颈鳞癌组织中E-cadherin、OPN表达与预后的关系

Kaplan-Meier生存分析显示, E-cadherin表达阳性患者平均生存时间为66.82个月，E-cadherin表达阴性患者为40.92个月，差异有统计学意义(P<0.05)。OPN表达阳性患者平均生存时间为49.86个月，OPN表达阴性患者为为71.53个月，差异有统计学意义(P<0.05)。

选取宫颈鳞癌患者临床分期、病理分级、淋巴结转移、宫颈肌层浸润深度、E-cadherin、OPN进行COX回归模型分析，结果显示淋巴结转移、E-cadherin、OPN与预后有关(P=0.013, 0.017, 0.031)。

3讨论

研究[3-4]表明，在结肠直肠癌中, E-cadherin表达下降与肿瘤失分化、浸润、转移及不良预后有关。据报道，85%浸润性乳腺癌中, E-cadherin表达是完全缺失的，其通过细胞增殖、浸润、转移而促进乳腺癌的进展[5]。一项体外实验[6]中, E-cadherin过度表达抑制乳腺癌的侵袭和转移，证实了E-cadherin肿瘤抑制蛋白的作用。E-cadherin在宫颈癌中的作用还未被广泛研究。本研究中, E-cadherin在正常宫颈组织、宫颈鳞癌中的表达呈显著下降趋势，差异有统计学意义(P<0.05), 提示细胞间黏附作用被干扰与宫颈鳞癌的形成和进展有着密切关系。在对E-cadherin表达与宫颈鳞癌临床病理特征之间的关系的研究中发现, E-cadherin表达与临床分期、组织分级、淋巴结转移密切相关，提示E-cadherin表达的改变涉及宫颈鳞癌的浸润和转移过程。Kaplan-Meier生存分析发现，E-cadherin表达阳性患者平均生存时间(66.82个月)显著高于E-cadherin表达阴性者(40.92个月)，差异有统计学意义(P<0.05)。COX多因素分析显示, E-cadherin是影响宫颈鳞癌预后的因素之一。

OPN是分泌型磷酸化糖蛋白，含有甘氨酸-精氨酸-天冬氨酸序列，在正常组织中OPN常是缺乏或低水平表达，然而在许多肿瘤中发现OPN过度表达，包括乳腺癌[7]、肺癌[8]、结肠直肠癌[9]、胃癌[10]、卵巢癌等[11]。OPN同细胞表面αvβ整合素和CD44受体相互作用，促使细胞行为发生改变，介导细胞黏附、迁移、浸润以及诱导肿瘤新生血管形成、促进恶性肿瘤的进展和转移。一项研究[12]分析了OPN在85例胃癌中免疫组化表达，结果显示OPN免疫活性水平与浸润深度、脉管浸润、淋巴结转移及分期有关，浸润了淋巴结的胃癌细胞显示出强的免疫活性、低的凋亡指数和高的增殖指数。本研究分析了OPN在不同宫颈组织中的表达，与正常宫颈组织相比, OPN在宫颈鳞癌中有更高的表达，差异有统计学意义(P<0.05)。本文也探讨了OPN表达与临床病理特征之间的关系，结果显示随着临床分期的增高, OPN表达上升，但差异无统计学意义(P>0.05), 且与宫颈肌层浸润深度无关(P>0.05)。OPN表达显著地与组织学分级、淋巴结转移有关(P<0.05), 表明OPN的过度表达与宫颈鳞癌的发生、浸润转移密切相关。一些研究[13-15]表明, OPN在肿瘤中的过度表达与不同肿瘤差的预后有关，包括肺癌、卵巢癌、乳腺癌等。Rudland PS等[15]研究了333例可行手术的Ⅰ～Ⅱ期原发性乳腺癌患者的OPN的预后意义，随访14～20年后发现, OPN阴性患者的生存率为94%, OPN阳性患者的生存率为26%。以上结果表明，与转移有关的蛋白OPN的表达与预后密切相关。有关OPN在宫颈鳞癌中的预后作用研究较少，本研究Kaplan-Meier生存分析发现, OPN阳性患者的生存时间(49.86个月)显著低于OPN阴性者(71.53个月)(P<0.05); COX多因素分析显示, OPN是预后因素之一，与不利的生存前景有关。

本研究探讨了E-cadherin、OPN在宫颈鳞癌中的异常表达，对二者的相关性分析发现，二者在宫颈鳞癌中的表达呈负相关(r=0.321,P<0.01)。E-cadherin、OPN通过不同机制参与并促进了宫颈鳞癌的发生、浸润和转移，与不良预后密切相关。

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Expressions of E-cadherin and osteopontin in cervical

squamous cancer and their correlations with prognosis

ZHOU Xing, ZHANG Wenxian, LUO Qiong, GAN Ping

(DepartmentofGynecologyandObstetrics,GuangyuanCentralHospital,Guangyuan,Sichuan, 628000)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the expressions of E-cadherin and osteopontin (OPN) in cervical squamous cancers and their correlations with prognosis. MethodsThe expressions of E-cadherin and OPN were detected by immunohistochemistry (SP technique) in 78 cases of squamous cervical carcinoma tissues and 30 cases of normal cervical tissues. The relationships between the expressions of E-cadherin, OPN and clinical pathological features, prognosis were evaluated. ResultsThe positive expressions of E-cadherin decreased significantly in normal cervical tissues and cervical squamous cancer (P<0.05), and positive expression rate of E-cadherin was correlated with clinical stage, histological differentiation and lymph nodes metastasis (P<0.05). The positive expressions of OPN increased significantly in normal cervical tissues and cervical squamous cancer (P<0.05), and positive expression rate of OPN was correlated with histological differentiation and lymph nodes metastasis (P<0.05). The total survival rate of patients with negative expression of E-cadherin and positive expression of OPN was significantly lower than that of patients with positive expression of E-cadherin and negative expression of OPN (P<0.05). Multivariate analysis revealed lymphnodes metastasis and expressions of E-cadherin and OPN were correlated with the poor prognosis (P<0.05). E-cadherin expression was negatively correlated with OPN (r=-0.321,P<0.05). ConclusionThe low or loss expression of E-cadherin and high expression of OPN are correlated with carcinogenesis, development and metastasis of cervical squamous cancer.

KEYWORDS:cervical squamous cancer; E-cadherin; osteopontin; immunohistochemistry; prognosis

收稿日期:2014-12-13

中图分类号:R 737.33

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2015)09-087-04

DOI:10.7619/jcmp.201509025