高压氧对兔耳增生性瘢痕后期的影响*



高压氧对兔耳增生性瘢痕后期的影响*

张秀云张维娜任纪祯万金娥

青岛大学医学院医学美容中心，山东省青岛市266000

病理性瘢痕的形成机制众多，其中低氧在病理性瘢痕形成的过程中起关键作用[1]。目前瘢痕的修复方法主要有皮瓣修复术和移植术等[2，3]。有研究报道，高压氧对瘢痕增生具有促修复作用[4]，但其作用机制鲜有报道。在之前的研究中，笔者发现高压氧可以显著减少兔耳增生性瘢痕中成纤维细胞的数量，抑制组织中TGFβ1和VEGF水平，提示高压氧的作用机制可能与TGFβ1和VEGF的调控有关[5]。目前的研究多数为瘢痕早期的治疗，本研究旨在考察高压氧对病理性瘢痕后期的治疗效果。

1材料与方法

1.1实验动物健康新西兰大耳白兔20只，体重2.5~3.0kg，兔耳健全，雌雄不拘，由青岛市实验动物中心提供，许可证号SCXK(鲁)2014-0001。

1.2兔耳增生性瘢痕模型的建立[6]20只新西兰大耳白兔适应性喂养48h，水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉，固定于手术台上，兔耳腹侧剪毛，2.5%碘伏消毒兔耳腹侧皮肤，于兔耳腹侧制造直径1cm的圆形缺损，去除皮肤全层及软骨膜，每耳6个创面，创面间距不小于1cm。术后创面暴露，外用红霉素眼膏，避免感染。造模成功后随机分为四组，实验组(A~C组)和对照组(D组)，每组5只。

1.3治疗方法造模4周后，实验组置于DS-Ⅱ型实验动物加压舱，纯氧洗舱5min，升压10min至0.1MPa后稳压，吸纯氧60min，减压10min。实验组A、B和C组高压氧疗程分别为4周、8周和12周，1次/d，每4周间歇1周。对照组置于常压空气环境。

1.4瘢痕指数测定治疗前用游标卡尺测定瘢痕周围正常皮肤的高度(a)及全层瘢痕皮肤的厚度(b)，计算出瘢痕增生指数(Hypertrophic index，HI=b/a)。

1.5HE染色治疗结束后，在同样麻醉条件下统一切取两组瘢痕组织及周围1mm正常组织标本，每组随机选取10个组织标本。10%福尔马林固定标本，常规石蜡包埋，行苏木精-伊红染色，光镜下观察HE染色切片。

1.6统计学处理采用SPSS17.0统计软件进行数据处理和统计分析，以均数±标准差表示计量资料，采用单因素方差分析对各组HI值进行检验；对各组均数采用Bonferroni检验进行两两比较，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1瘢痕组织形态学观察结果造模1周后创面外观比较干燥，造模4周后创面愈合(上皮化)，瘢痕增生明显。愈合区表现为明显高于周围正常皮肤，瘢痕组织不超出原有创伤范围，呈暗红色，触之硬。

实验组经高压氧治疗4周后，瘢痕外观色泽变淡，部分瘢痕较对照组变平，同期对照组较实验组瘢痕色泽淡；治疗8周后，B和C组瘢痕外观色泽明显变淡，质地较软，瘢痕较平坦；同期D组、A组瘢痕色泽较深，质地较硬；治疗12周后，C组外观色泽接近正常皮肤色泽，质软，瘢痕平坦，同期对照组颜色接近实验组，但质地仍较硬，仍比较肥厚。实验组A、B、C相比较，接受高压氧治疗疗程越长，瘢痕退化越明显，B、C两组较A组瘢痕退化明显，C组较B组退化差异性较明显。

2.2HE染色结果HE染色结果，见图1。其中，D组真皮层内瘢痕组织，散在纤维母细胞增生，伴少量炎细胞浸润，毛细血管增生不明显。A组间质内胶原纤维较对照组减少，有毛细血管增生。B组纤维母细胞较对照组减少，间质血管内皮增生。C组皮肤组织基本正常，间质内散在轻度增生的纤维母细胞，毛细血管增生明显。

图1　HE染色结果

注：A:D组HE染色结果(×100)；B:A组HE染色结果(×100)；C:B组HE染色结果(×100)；D:C组HE染色结果(×100)。

2.3瘢痕增生指数结果显示，四组间瘢痕增生指数相比，差异统计学意义(F=59.94,P<0.05)；A、B、C三组瘢痕增生指数均比D组小，差异均具有统计学意义(P<0.05)，实验组A与C，实验组B与C瘢痕指数相比，差异均具有统计学意义(P<0.05)，且C组瘢痕增生指数最小，详见表1。

表1　四组兔耳瘢痕的HI值变化结果

注：与D组比较，aP<0.05；与A组比较，bP<0.05；与B组比较，cP<0.05。

3讨论

瘢痕是创伤后组织修复自然产物，病理性瘢痕的主要病理性特征就是胶原的大量存在，它的合成和降解直接影响瘢痕的形成及转归。有研究报道，低氧能够促进成纤维细胞的增殖[7，8]。在之前的研究中，笔者发现给予兔耳增生性瘢痕高压氧治疗后，可以促进瘢痕组织的修复，减少成纤维细胞的数量[5]。同时笔者发现造模后4周瘢痕组织不再发生明显的变化，因此笔者将造模后4周作为后期治疗的起始时间。笔者根据临床高压氧治疗方案，治疗4周后间歇1周，在实验中没有观察到研究动物出现氧中毒等不良反应。高压氧能够改善瘢痕组织中的低氧环境，不仅提高了组织内氧分压，而且增加局部组织血供。病理切片结果显示，各实验组毛细血管增生明显，且接近正常组织。

本研究通过构建兔耳瘢痕模型，探讨高压氧在病理性瘢痕形成后期促进病理性瘢痕消退的可行性。结果显示，瘢痕增生指数对照组明显高于各实验组，差异具有统计学意义(P<0.05)，随着疗程的增加瘢痕指数递减(P<0.05)，提示高压氧治疗病理性瘢痕后期的修复效果与治疗周期相关。HE染色结果显示实验组较对照组胶原纤维明显减少，排列疏松；新生毛细血管增生较对照组明显，血供增加。

综上所述，高压氧能够促进瘢痕形成后期的消退，为高压氧的临床应用提供了一定的实验基础。高压氧促进瘢痕消退与成纤维细胞的凋亡等因素的相关性有待进一步研究。

参考文献

[1]李广帅,陈言汤,牛扶幼.病理瘢痕的发病机制〔J〕.郑州大学学报:医学版,2006,41(6):1025-1027.

[2]田枫.皮瓣修复治疗手及前臂皮肤烧伤瘢痕的疗效观察〔J〕.中国现代药物应用,2015,9(4):18-19.

[3]周金武,李鸿明,陈建设,等.MEEK微型皮片植皮技术在成批烧伤救治中的临床应用〔J〕.海南医学, 2015,26(4):569-571.

[4]李永忠,龙小东,李云飞,等.高压氧在深度烧伤植皮治疗中的应用〔J〕.实用医院临床杂志,2007,4(5):94-95.

[5]杨廷,陈振雨,任纪祯,等.高压氧对兔耳增生性瘢痕形成的影响〔J〕.中国美容医学,2013, 22(17):1771-1774.

[6]李荟元.创伤研究动物模型:兔耳瘢痕模型的建立与应用〔M〕.西安:第四军医大学出版社,2005:42-43.

[7]Falanga V,Kirsner RS.Low oxygen stimulates proliferation of fibroblasts seeded as single cells〔J〕. J Cell Physiol,1993,154(3):506-510.

[8]Balin AK,Fisher AJ,Carter DM.Oxygen modulates growth of human cells at physiologic partial pressures〔J〕.J Exp Med,1984,160(1):152-166.

(编辑羽飞)

摘要目的：探讨高压氧对兔耳增生性瘢痕后期转归的影响。方法:选取20只新西兰大耳白兔建立兔耳瘢痕模型，随机分成四组(A组、B组、C组和D组)，每组5只。实验组(A~C)造模4周后接受高压氧治疗，对照组(D)处于常压环境。检测瘢痕形态学变化和瘢痕增生指数。结果:HE染色结果显示，与对照组相比，实验组胶原纤维增生减轻，毛细血管内皮增生明显；实验组瘢痕增生指数明显低于对照组(P<0.05)，瘢痕增生指数随高压氧疗程的增加而减小(P<0.05)。结论:高压氧能够促进增生性瘢痕后期的消退。

关键词高压氧增生性瘢痕瘢痕增生指数HE染色

Effect of Hyperbaric Oxygen on the Late Stage of Rabbit Ears Hyperplastic Scar

ZHANG Xiuyun,ZHANG Weina,REN Jizhen,etal.DepartmentofPlasticSurgery,AffiliatedHospitalofQingdaoUniversityMedicalCollege,QingdaoCity,ShandongProvince266000

ABSTRACTObjective:To investigate the role of hyperbaric oxygen on the late hyperplastic scar of rabbit ears.Methods:20 New Zealand rabbits were used for hypertrophic scar model on the ears.The rabbits were randomly divided into 4 groups(A,B,C and D groups),5 in each group.The experiment groups (A,B and C) were treated with hyperbaric oxygen for 4 weeks after modeling, while the control group (D) was kept in atmospheric environment.The morphological changes and hyperplastic of scars were assessed.Results:Compared with the control group,collagen fiber hyperplasia was reduced, while capillary endothelial hyperplasia was increased in the experiment groups by HE staining.Scar hyperplastic index in the experimental groups was significantly lower than that in the control group(P<0.05).Scar hyperplastic index was decreased with the increase of treatment significantly (P<0.05).Conclusion:Hyperbaric oxygen can repair hyperplastic scar at the late stage.

KEY WORDSHyperbaric oxygenation,Hypertrophic scar,Scar hyperplastic index,HE staining

收稿日期2015-03-24

中图分类号：R-33

文献标识码：A

文章编号：1001-7585(2015)11-1401-02

基金项目：山东省科技发展计划项目(2011YD18036)。通讯作者：张维娜