HPLC法测定冠心宁软胶囊中丹参素的含量

李芸荟

(天津市河西医院，天津 300202)



HPLC法测定冠心宁软胶囊中丹参素的含量

李芸荟

(天津市河西医院，天津 300202)

目的：建立高效液相色谱法(HPLC)测定冠心宁软胶囊中丹参素的含量。方法：色谱柱为Irregular C18柱(250 mm×4.6 mm，10 μm)；流动相为甲醇-水-磷酸(10∶70∶0.3)；检测波长为280 nm。结果：丹参素在0.003 6～0.032 4 mg/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9)，平均回收率98.68%，RSD为1.92%(n=6)。结论：本法简便、准确、重现性好，可作为冠心宁软胶囊的质量控制方法。

高效液相色谱法，冠心宁软胶囊，丹参素，含量测定

冠心宁软胶囊系保心宁胶囊改为软胶囊制剂而得，组方为丹参、当归、枳壳、三七和生姜，功效活血化瘀、行气止痛，临床上用于心绞痛、心律失常、改善冠心病症状等[1]。保心宁胶囊(《卫生部药品标准中药成方制剂》WS3-B-2198-96)仅有化学反应和紫外光谱作为定性鉴别，专属性差，难以控制其内在质量。有文献报道对保心宁中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1进行含量测定[2],亦有文献对丹参酮ⅡA进行了含量测定[3]。本实验参考文献方法采用HPLC法对冠心宁软胶囊中丹参素进行含量测定，该方法简便、准确、重现性好，可作为冠心宁软胶囊的质量控制方法。

1 仪器与试药

UV2000高效液相色谱仪(tsp thermo separation prodicts);SP8800 ternary HPLC pump(Spectra-Physics)。丹参素钠对照品(中国药品生物制品检定所，批号110855-200809，供含量测定用)，冠心宁软胶囊(天津市河西医院自制，批号140416、140417、140418)，甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为去离子水。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 Irregular C18(250 mm×4.6 mm，10 μm)色谱柱，流动相为甲醇-水-磷酸(10∶70∶0.3)，流速0.8 ml/min，柱温35 ℃，检测波长280 nm，进样量20 μl，理论塔板数以丹参素计不低于2 500。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取丹参素钠对照品约10 mg到250 ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声10 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，配成0.04 mg/ml的对照品储备液(相当于每1 ml含丹参素0.036 mg)。

2.2.2 供试品溶液 取5粒本品，倾出内容物，充分混匀，精密称定约0.4 g于称量瓶中，加入精密称定约1.5 g的硅藻土，拌样均匀，转移至烧瓶中，加入50%甲醇80 ml，热回流1 h，放冷，滤过至100 ml量瓶中，用50%甲醇15 ml洗涤容器、残渣、滤纸，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液 精密称取除丹参外的阴性对照样品约0.4 g于称量瓶中，加入精密称定约1.5 g的硅藻土，加入50%甲醇80 ml，热回流1 h，放冷，滤过至100 ml量瓶中，用50%甲醇15 ml洗涤容器、残渣、滤纸，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。

2.3 阴性对照试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各20 μl，注入液相色谱仪，阴性对照样品在丹参素峰相应的位置无峰出现，说明阴性对照样品无干扰，见图1。

2.4 线性关系考查 精密称取对照品储备液1、3、5、7和9 ml于10 ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，取不同浓度的对照品溶液20 μl进样，按照“2.1”项下色谱条件分别测定其峰面积。回归方程为Y=19 599 625X-1 500.45(r=0.999 9)。结果表明，丹参素在0.003 6～0.032 4 mg/ml范围内和峰面积呈良好线性关系。

2.5 精密度试验 精密称取丹参素对照品储备液，加50%甲醇稀释成丹参素浓度为0.018 mg/ml的溶液，依“2.1”项下色谱条件进样20 μl，重复6次，记录其峰面积，得RSD为1.26%(n=6)。

2.6 稳定性试验 取同一批号供试品，依“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，依次于0、1、2、4、6、8和24 h进样，测定RSD为0.47%，表明样品在24 h内稳定性良好。

1.丹参素

2.7 重现性试验 取同一批号样品6份，精密称定，依“2.2.2”项下方法制备6份供试品溶液，分别注入液相色谱仪，测得RSD为1.7%，重现性好。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知丹参素含量的内容物200 mg，精密称定6份，分别加丹参素1 ml(0.866 mg/ml)，照“2.2.2”项下方法制备溶液，测定并计算回收率。结果平均回收率为98.68%，RSD为1.92%，见表1。

表1 回收率试验结果(n=6)

2.9 样品测定 取3批样品(每批平行3份)，按“2.2.2”项下方法制备供试液，依“2.1”项下色谱条件进样测定，结果见表2。

表2 样品测定结果

3 讨论

3.1 样品处理方法 使用参考文献方法[4]，本实验探讨了冷浸24 h、超声1 h、热回流1 h、索氏提取1 h(已无色，近提取完全)各两个平行样品。测定结果表明，热回流和索氏提取方法所提丹参素含量相差不多，均可作为样品处理方法，本实验采用热回流作为提取方法。

3.2 溶媒的选择 采用文献报道[5]以甲醇提取并作为溶媒的方法，结果分离效果并不理想，后经查阅文献[6]，分别采用25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇提取并作为溶媒的方法,并比较结果，在相同条件下提取，50%甲醇分离效果最佳,故采用50%甲醇为溶媒。

3.3 回流时间的考查 本实验比较了不同热回流时间(0.5、1和1.5 h)对提取效率的影响，3种提取时间测得的量与时间成正比，但1 h和1.5 h相差不大，故采用热回流1 h提取，以节省时间。

3.4 溶剂量的选择 本实验比较了不同溶剂量对提取结果的影响，分别采用50%甲醇40、80和160 ml提取，并分别稀释至50、100和200 ml并测定含量，结果40 ml提取结果含量较小，另两种测定结果基本一致，故采用80 ml提取并稀释至100 ml的方法。

1 陈晓丽,陈建宗,吕召学.保心宁片治疗冠心病心绞痛的临床研究[J].广东药学院学报,2002,18(3):33

2 李海泉.高效液相色谱梯度洗脱法同时测定保心宁片中3种皂苷含量[J].中国药业,2011,20(1):34

3 李晓曲,汪霞.反相HPLC法测定保心宁胶囊中丹参酮ⅡA的含量[J].中国现代药物应用,2008,17(2):44

4 罗兴平,张彩霞,王峰,等.高效液相色谱法测定强力救心滴丸中丹参素钠的含量[J].中国药品标准,2002,3(4):61

5 黄兰芷,付超美,胡慧玲,等.HPLC法测定抗癌颗粒中丹参素纳的含量[J].成都中医药大学学报,2006,29(2):53

6 郑奇,林琳,覃伟.丹参水溶性成分的提取与纯化[J].内蒙古中医药,2008,28(5)：45

2015-01-28

R927.2

A

1006-5687(2015)03-0016-02