胃癌组织中三磷酸腺苷酶家族蛋白2的表达变化及意义

杨薇，徐梅梅，夏凤宇，姜东春，刘红利

(秦皇岛市第一医院，河北秦皇岛066000)

三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)基因在一些肿瘤中参与调控染色质动力活性、基因组转录活性和细胞凋亡过程［1～3］，其编码蛋白质具有AAA区域和溴区结构域。AAA区域作为分子伴侣，执行装配、操作、分解蛋白复合物的功能;溴区结构域参与基因转录调控、细胞周期调控、信号转导，其表达异常导致恶性肿瘤发生和发展，提示ATAD2极可能为一个肿瘤发生、发展相关基因［4～6］。因此，我们观察了胃癌组织及癌旁正常组织中的ATAD2表达变化，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2005～2009年秦皇岛市第一医院收集的配对胃癌标本和癌旁组织标本129例，均经病理证实，患者均未经术前放疗及化疗。其中，男97例、女32例，年龄26～78岁、中位年龄56岁;高分化15例，中分化47例，低分化67例;TNM分期Ⅰ～Ⅱ期44例，Ⅲ～Ⅳ期85例。

1.2 ATAD2 mRNA检测 采用Real-time PCR法。TRIzol试剂提取癌组织和癌旁组织细胞总RNA，按TRIzol试剂盒说明书进行操作。使用NanoDrop® ND-1000检测RNA浓度和纯度，应用DEPC水将RNA浓度调到500 ng/μL。反转录条件:37℃ 15 min，85℃5 s，4℃保存;30 s 95℃，40个循环;5 s 95℃，30 s 62℃。引物序列:ATAD2和β-actin基因的引物设计均购自沈阳立信生物技术有限公司。ATAD2上游引物为5＇-GGAATCCCAAACCACTGGACA-3＇，下游引物为5＇-GGTAGCGTCGTCGTAAAGCACA-3＇;GAPDH上游引物为5＇-ATAGCACAGCCTGGATAGCAACGTAC-3＇，下游引物为5＇-CACCTTCTACAATGAGCTGCGTGTG-3＇。ATAD2 mRNA相对表达以2-ΔΔCT表示，＞1.0为高表达，＜1.0为低表达。

1.3 ATAD2蛋白检测 所有标本组织经常规甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，片厚4μm。高温抗原修复，PBS冲洗3次，每次5 min。每张切片滴加50μL的鼠抗人ATAD2单克隆抗体一抗，4℃冰箱孵育过夜，PBS冲洗3次，每次5 min;滴加50μL的二抗，室温孵育30min，PBS冲洗3次，每次5min;DAB显色，中性树胶封片。阴性对照采用PBS代替一抗。光镜下每张切片选取癌细胞较多的10个高倍视野，计数100个细胞中的阳性细胞数，无阳性细胞为阴性，阳性细胞数≤5%为弱阳性，6%～20%为阳性，＞20%为强阳性;其中强阳性和阳性为高表达，弱阳性和阴性为低表达。

1.4 随访与资料收集 对患者进行随访，截止时间为2011年12月，记录患者的生存期以及肿瘤浸润深度、肿瘤部位、分化程度、TNM分型、淋巴结转移数、肿瘤大小情况。

1.5 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。计量资料以±s表示，组间比较用配对t检验。ATAD2 mRNA表达与临床病理因素的关系采用χ2检验;生存分析采用Kaplan-Meier法，Log-rank检验判断差异性。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌及癌旁组织ATAD2 mRNA和蛋白表达比较 胃癌组织ATAD2 mRNA相对表达量为7.67± 2.09，癌旁组织为1.00±0.11，P＜0.01。胃癌组织ATAD2蛋白定位在细胞核，其中高表达77例、低表达52例，癌旁组织中未见ATAD2蛋白表达。

2.2 ATAD2 mRNA表达与胃癌患者预后的关系随访时间1～66个月，中位随访时间为36个月;32例失访，随访率75%。胃癌组织ATAD2 mRNA高表达患者生存时间为(22±2)个月，低表达患者为(34±5)个月，P＜0.05。

2.3 ATAD2蛋白表达与胃癌患者临床因素的关系见表1。

表1 ATAD2蛋白表达与胃癌患者临床因素的关系［例(%)］

3 讨论

ATAD2位于染色体8q24上，是新近发现的重要转录因子，多种人类肿瘤在这个区域都有异常。它是c-MYC、雄激素受体和ER-a的辅助因子，并受雌雄激素的控制［7，8］。目前，关于ATAD2影响肿瘤细胞增殖及细胞周期的分子机制还不清楚。有研究表明，ATAD2与c-MYC形成共表达复合物，参与肿瘤的发生、发展，对肿瘤增殖起重要的驱动作用［9］。近年来国内外一些研究显示，ATAD2高表达可能与某些人类实体肿瘤的局部侵润、转移及影响染色体的稳定性有关;ATAD2蛋白的表达与肿瘤患者的预后有关，是判断肿瘤患者总生存率的独立预后指标。在乳腺癌中，ATAD2通过控制B-Myb和EZH2促进细胞的增殖;在结肠癌、胃癌、前列腺癌、宫颈癌、卵巢癌、骨肉瘤和非小细胞肺癌等恶性肿瘤中，ATAD2通过与c-MYC、E2F等转录因子的相互作用，增强了肿瘤与增殖、抗凋亡等相关基因的表达［10～15］。在肝癌中，ATAD2基因发现新的外显子—外显子连接复合体，并呈现过表达。

胃癌是人类实体肿瘤的一种，目前对ATAD2和胃癌关系的研究较少。本研究应用免疫组织化学和Real-time PCR法对胃癌及其癌旁组织中ATAD2表达情况进行检测，结果显示，胃癌组织ATAD2的表达较高，与在乳腺癌的研究中得到的结果相似［15，16］。上述研究结果提示，ATAD2的高表达可能与胃癌的局部浸润和淋巴结转移有关。胃癌的治疗原则是以手术为主，辅助化疗可以提高胃癌患者的生存率。阻断ATAD2的表达能否提高胃癌患者的生存率及生活质量，有待进一步研究。

ATAD2高表达与胃癌患者预后不良有关。本研究对129例胃癌患者用Kaplan-Meier生存分析，Log-rank检验显示，ATAD2高表达患者预后较差。并且，ATAD2表达与胃癌肿瘤浸润深度及淋巴结转移数和肿瘤大小有关。提示ATAD2可以作为判断胃癌预后的独立指标之一，对胃癌患者预后具有指导意义。血清中ATAD2蛋白检测尚未研究，检测血清中ATAD2蛋白有望成为胃癌早期诊断的新方向。

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