上皮性卵巢癌中bcl-2/bax比值及CA125半衰期与化疗耐药的关系

王颖欣，李昌英，何胜利

(1．河北省唐山市工人医院分院，河北唐山063000;2．河北省滦县食品药品监督管理局，河北滦县063700;3．河北省滦县人民医院，河北滦县063700)

目前，对于原发性上皮性卵巢癌患者术后给予以铂类为基础的化疗是国际公认推荐的一线化疗方案，但肿瘤对铂类药物耐药是卵巢癌化疗失败的关键原因。卵巢癌耐药机制与细胞凋亡异常有关，bcl－2蛋白和bax蛋白是重要的凋亡调节蛋白。CA125是重要的卵巢癌肿瘤标记物［1］，有研究显示，CA125半衰期对监测卵巢癌化疗耐药具有预测价值。笔者探讨了bcl－2/bax比值及CA125半衰期与卵巢癌患者化疗耐药的关系，预测卵巢癌患者耐药情况，现将结果报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取2003年1月—2007年12月唐山市工人医院收治的有完整病史和随访资料的原发性上皮性卵巢癌患者84例，早期患者(Ⅰ～Ⅱa期)行卵巢癌根治术，晚期患者(Ⅱb～Ⅳ期)行肿瘤细胞减灭术，手术均由高年资医生完成，均经组织病理学确诊，术后给予以铂类为基础的联合化疗4个疗程以上，其中23例术前给予1～2个疗程以铂类为基础的腹腔联合静脉化疗者作为术前化疗组，术前未给予化疗者61例作为未化疗组。将化疗有效者38例列入化疗敏感组，将化疗无效者46例列入化疗耐药组。

1.2 研究方法 ①术前及术后每周用放射免疫法动态监测患者血清CA125水平，CA125半衰期从术后首次使用化疗药物当日算起。②采用SP免疫组化染色方法，按试剂盒说明操作检测bcl－2蛋白和bax蛋白表达情况。bcl－2单克隆抗体、bax多克隆抗体、SP免疫组化染色超敏试剂盒、DAB染色试剂盒均购于福州迈新生物技术开发公司。用已知bcl－2阳性表达、bax阳性表达的淋巴瘤切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 bcl－2蛋白和bax蛋白表达判定标准 请2位有经验的病理学专家阅片，判定染色结果。bcl－2、bax染色均定位于细胞浆，镜下组织细胞结构清晰、细胞浆有棕黄色颗粒沉着且染色明显高于背景为阳性表达。高倍镜下综合染色强度和阳性细胞所占比例用组织学评分(∑Pi)计算。其中i代表细胞染色深浅，不显色或显色不清为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，深褐色为3分;P代表将阳性细胞的百分数值进行半定量分级:＜5%为0分，5%～25%为1分，＞25%～50%为2分，＞50%～75%为3分，＞75%为4分。所得积分在1～3分为弱阳性(+)，4～8分为中度阳性(⧺)，9～12分为强阳性(⧻)。(⧺)及以上为阳性表达，用以计算阳性率。将bcl－2、bax蛋白表达积分相除计数bcl－2/bax比值。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19．0软件进行统计学处理，计数资料采用χ2检验，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 bcl－2/bax比值与化疗敏感性的关系 化疗耐药组中bcl－2/bax比值＞1者36例，bcl－2/bax比值≤1者10例;化疗敏感组中bcl－2/bax＞1者9例，bcl－2/bax比值≤1者29例。化疗耐药组中bcl－2/bax比值＞1者所占比例明显高于化疗敏感组(χ2=24．624，P=0．000)。

2.2 CA125半衰期与化疗敏感性的关系 化疗耐药组中CA125半衰期＞4周者32例，≤4周者14例;化疗敏感组中CA125半衰期＞4周者17例，≤4周者21例。化疗耐药组中CA125半衰期＞4周者所占比例明显高于化疗敏感组(χ2=5．215，P=0．022)。剔除术前化疗因素对 CA125数值的影响，单独分析61例术前未经化疗患者的术前及术后每周CA125水平，化疗耐药者34例，其中CA125半衰期＞4周者26例，≤4周者8例;化疗敏感者27例，其中CA125半衰期＞4周者12例，≤4周者15例。化疗耐药组中CA125半衰期＞4周者所占比例明显高于化疗敏感组(χ2=6．464，P=0．011)。

2.3 bcl－2/bax比值与术前是否化疗的关系 术前未行化疗组中bcl－2/bax比值＞1者38例，≤1者23例;术前化疗组中bcl－2/bax比值＞1者7例，≤1者16例。术前未行化疗组中bcl－2/bax比值＞1者所占比例高于术前化疗组(χ2=6.735，P=0．009)。

2.4 CA125半衰期与术前是否化疗的关系 术前未行化疗组中CA125半衰期＞4周者38例，≤4周者23例;术前化疗组中CA125半衰期＞4周者11例，≤4周者12例。2组相比差异无统计学意义(χ2=1．422，P=0．233)。

2.5 bcl－2/bax比值与CA125半衰期的关系 84例上皮性卵巢癌患者中CA125半衰期＞4周者49例，其中bcl－2/bax比值＞1者35例，≤1者14例;CA125半衰期≤4周者35例，其中bcl－2/bax比值＞1者10例，≤1者25例。CA125半衰期＞4周者中bcl－2/bax比值＞1者所占比例高于半衰期≤4周者(χ2=14．897，P=0．000);bcl－2/bax比值与 CA125 半衰期之间呈正相关(r=0．424)。

3 讨 论

CA125是一种不均一的高分子黏蛋白样糖蛋白，兼有膜结合型与游离型2种形态。CA125被认为是判断预后的一个重要指标［2－3］，对血清 CA125进行动态监测，发现完全缓解和部分缓解的上皮性卵巢癌患者CA125水平均明显下降，而病情进展者均上升。由于血清CA125水平降至一半所需时间比较全面地反映了术后血清CA125水平的变化速率，也可说明卵巢癌组织对化疗的反应性，所以可以认为血清CA125水平降至一半所需时间有助于判断卵巢癌的耐药情况。目前血清CA125水平的监测方法简单，已成为卵巢癌治疗中的一项常规检查，在临床中也可以通过观察化疗过程中血清CA125水平的变化对卵巢癌患者的耐药及预后作出及时正确的判断，进而改变治疗策略，以期改善患者的预后。Boivin等［4］研究认为，肿瘤细胞CA125的表达可能与患者对铂类化疗耐药相关;贾美群等［5］研究发现，耐药组患者血清CA125半衰期明显长于敏感组(P=0．000 1)。本研究结果与之相似，即化疗耐药组中CA125半衰期＞4周者所占比例高于化疗敏感组，说明在术后的化疗过程中如果血清CA125半衰期＞4周，可能提示耐药。

bcl－2蛋白和bax蛋白是重要的凋亡调节蛋白，bcl－2蛋白抑制凋亡，而bax蛋白促进凋亡，二者的比例调控着细胞的凋亡［6］。抗癌药物可以通过降低bcl－2/bax比值引起凋亡的发生［7］。本研究发现，术前未化疗组中bcl－2/bax比值＞1者所占比例高于术前化疗组，提示化疗药物可以调节bcl－2蛋白和bax蛋白表达，且朝向bcl－2蛋白低表达及bax蛋白高表达方向调节，使bcl－2/bax比值下降，诱导细胞凋亡，发挥抗肿瘤作用。但术前化疗并不能使患者术后CA125水平下降更快，推测可能与术前化疗患者手术病理期别较晚以及更易产生化疗耐药有关。

大量研究证实，肿瘤化疗耐药性的产生是肿瘤细胞凋亡受抑或凋亡易感性降低的结果。张洁等［8］检测了顺铂作用下卵巢癌敏感细胞A2780与耐药细胞A2780/DDP凋亡水平的变化，结果证实卵巢癌敏感细胞和耐药细胞发生凋亡是顺铂发挥细胞毒效应的主要作用机制。耐药细胞A2780/DDP的耐药系数RI=5，说明与亲代敏感细胞相比，顺铂诱导卵巢癌细胞发生凋亡的能力显著下降。Pepper等［9］在对慢性淋巴细胞白血病患者的研究中，发现bcl－2/bax比值与细胞凋亡及药物敏感性有关，体外实验发现bcl－2/bax比值高的细胞可以抑制化疗药物引起的细胞凋亡，在临床上表现为化疗耐药。另有研究发现，急性髓内淋巴瘤、B细胞非何杰金淋巴瘤、卵巢癌中bcl－2/bax相对比例增高者对化疗不敏感，并可作为预后不良的指标［10－12］。本研究发现，bcl－2/bax比值＞1的患者耐药发生率高于bcl－2/bax≤1者，提示bcl－2高表达和bax低表达(bcl－2/bax＞1)与上皮性卵巢癌化疗耐药有关。本研究还发现，bcl－2/bax比值与CA125半衰期呈正相关，即CA125半衰期越长，bcl－2/bax比值越大。

综上所述，检测bcl－2蛋白及bax蛋白表达并计算其比值，联合CA125半衰期可以预测上皮性卵巢癌对铂类药物化疗的敏感性，从而及早筛选耐药者，调整治疗方案，以期取得更好的预后。

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