脂肪细胞因子Chemerin对冠心病的预警作用

吴心语，张朝明，王 刚，葛一漫，谢国丽

(1.成都中医药大学附属医院检验科，四川 成都 610075；2.四川省人民医院检验科，四川 成都 610072)

脂肪细胞因子Chemerin对冠心病的预警作用

吴心语1，张朝明1，王 刚2，葛一漫1，谢国丽1

(1.成都中医药大学附属医院检验科，四川 成都 610075；2.四川省人民医院检验科，四川 成都 610072)

目的：探讨脂肪细胞因子Chemerin在冠心病(CHD)发生与发展中的临床价值。方法：将20只健康雄性apoE-/-小鼠随机分为普食喂养组(NF组)10只和高脂喂养组(HF组)10只,实时荧光定量PCR(QPCR)检测2组小鼠腹主动脉旁脂肪中Chemerin mRNA相对表达水平；ELISA方法检测2组小鼠血清中Chemerin的含量；采用ELISA方法检测45例正常人及150例疑似CHD患者血清中Chemerin，其中疑似CHD患者经临床相关检测确诊为心绞痛25例，心肌梗死115例，心肌损伤非冠心病10例。结果：(1)小鼠腹主动脉旁脂肪组织中Chemerin mRNA相对表达水平HF组较NF组明显升高(P<0.01)。(2)小鼠血清中Chemerin含量HF组较NF组也明显升高(P<0.05)。(3)人血清中Chemerin含量冠心病患者(最终确诊为心绞痛及心肌梗死)较正常人群明显升高(P<0.05)，其中心肌梗死患者较心绞痛患者Chemerin水平明显增加(P<0.05)。结论：在小鼠动脉粥样硬化斑块形成过程中Chemerin水平的升高提示其可能参与了促动脉粥样硬化斑块的形成。在正常人及冠心病患者尤其是心肌梗死患者的血清中Chemerin水平的改变表明其可能参与了冠心病尤其是心肌梗死的发生与发展，具有一定的预警作用。

Chemerin；冠心病；实时荧光定量PCR；ELISA

冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease，CHD)简称冠心病，已成为威胁人类生命健康的主要疾病之一，脂肪细胞因子所产生的大量生物活性因子可破坏机体稳态，激活全身炎症反应，从而启动和推进动脉粥样硬化等疾病的发展，使心脑血管事件风险显著提高[1]。有研究报道，Chemerin可作用于内皮细胞上相应受体，诱导内皮细胞增殖和新生血管的形成，在缺血性心脏病早期起代偿作用[2]。本研究采用高脂喂养apoE-/-小鼠，观察Chemerin在小鼠腹主动脉旁脂肪中Chemerin mRNA相对表达水平，旨在阐明Chemerin在动脉粥样硬化斑块形成中可能的作用；收集健康人群与CHD患者血清，并检测Chemerin在这两种人群中的含量，旨在探讨Chemerin在CHD检测中可能的临床意义，为CHD的治疗提供新的策略及可能的治疗靶点。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 apoE-/-雄性小鼠20只，适应性喂养1周后，随机分为普食喂养组(NF组，n=10)、高脂喂养组(HF组，n=10)，共喂养36周。

1.1.2 一般资料 收集成都中医药大学附属医院2012年10月至2013年10月150例疑似CHD患者，其中最终经临床确诊为CHD心绞痛25例(平均年龄52±6岁)，心肌梗死115例(平均年龄53±4岁)，心肌损伤非CHD10例(平均年龄55±6岁)。排除诊断：急性创伤、自身免疫性疾病或结缔组织疾病患者、恶性肿瘤患者、合并感染、严重肝肾功能异常患者。对照组为同期体检中心健康者45例，各组在年龄、性别比例等方面无显著性差异(P<0.05)，组间均衡性好，具有可比性。所有研究对象均知情同意。

1.1.3 试剂 小鼠、人血清Chemerin ELISA试剂盒购自北京爱迪博公司；RNA抽提试剂盒、RT-QPCR试剂盒购自大连宝生物TAKARA公司。

1.1.4 仪器 Beckman Coulter AU5400全自动生化分析仪，罗氏lightcycle荧光定量PCR仪，美国Thermo公司DNA质量分数测定仪，TECNA Austria公司safire荧光酶标仪。

1.2 方法 (1)各组小鼠腹主动脉旁脂肪组织Chemerin mRNA表达水平的检测。提取小鼠腹主动脉旁脂肪组织总RNA，根据NCBI公布的Chemerin序列(NM27852.2)，采用Premier5.0软件设计QPCR所有引物，产物片段大小控制在100～300 bp之间。冰上配置RT反应液，逆转录合成cDNA 37 ℃15 min，85 ℃5 s，即得cDNA立即用于real-time PCR或置于-20 ℃保存。在冰上配置Real time-PCR反应液(25 μL体系)，上机、加样，用罗氏lightcycle荧光定量PCR仪检测各组腹主动脉旁脂肪组织中Chemerin mRNA的水平。(2)采用ELISA法检测小鼠NF组和HF组血清Chemerin水平。(3)采用ELISA法检测健康人群、疑似CHD患者血清Chemerin水平。

1.3 统计学方法 用SPSS13.0进行统计学分析，计量资料比较采用t检验或单因素方差分析。

2 结 果

2.1 小鼠腹主动脉旁脂肪组织Chemerin mRNA的相对表达水平 实验结果分析采用依据熔解曲线判读扩增产物的稳定性和特异性，用2-△△CT表示基因的相对表达量。小鼠腹主动脉旁脂肪组织Chemerin mRNA表达水平HF组为11.23±0.76，NF组为15.67±0.46，HF组较NF组明显增加(P<0.01)。

2.2 小鼠NF组和HF组血清Chemerin含量 HF组为98.458±24.3 pg/mL，NF组121.324±36.8 pg/mL，与NF组相比，HF组小鼠血清中Chemerin含量显著增高(P<0.05)。

2.3 健康人群与疑似CHD患者血清中Chemerin含量差异 45例正常人血清Chemerin含量为20.157±3.9 ng/mL，25例心绞痛患者血清Chemerin含量为28.313±3.8 ng/mL，115例心肌梗死患者血清Chemerin含量为33.827±3.5 ng/mL，10例心肌损伤非CHD患者血清Chemerin含量为21.750±2.6 ng/mL。心绞痛患者和心肌梗死患者与正常人比较有显著性差异(P<0.05)，冠心病的Chemerin含量明显升高；心肌梗死患者与心绞痛患者比较有显著性差异(P<0.05)，心肌梗死患者的Chemerin含量明显升高。

3 讨 论

近年来研究发现动脉粥样硬化患者及大鼠血管旁脂肪组织Chemerin表达升高，且增高程度与AS严重程度呈正相关，说明Chemerin可能参与了AS发生及发展[4]。Chemerin可能是CHD的一个新的预测因子，大量的流行病学研究表明，心血管疾病患者一般都有内皮细胞的功能紊乱[5]。有研究者发现Chemerin可以诱导内皮血管再生，而这些新生的血管脆性增加，容易破裂出血，促进了斑块的进展[6]。

在冠状动脉狭窄早期由于心肌血供尚可代偿，患者没有明显的症状。当狭窄度接近70%时，患者在活动后会出现心肌供血不足，则出现为心绞痛的症状；当血管完全堵塞，局部心脏无血供，大面积心肌坏死，患者则会出现为心肌梗死的症状。本研究发现CHD较正常人群明显升高，其中心肌梗死组较心绞痛组Chemerin水平明显增加。而心肌损伤非CHD患者较健康人群无显著差异。这一结果提示：Chemerin水平与CHD具有相关性，可能参与CHD发生与发展且与病情的严重程度相关，这种新的脂肪细胞因子有望为CHD的治疗及死亡率的降低提供新的治疗策略，也有望成为预测CHD独立的检测指标，具有一定的预警检测价值。

[1]EMANUELA B, MINARINI A, TUMIATTI V, et al. Synthetic polyamines as potential amine oxidase inhibitors: a preliminary study[J]. Amino Acids, 2012, 42(2/3): 913-928.

[2]KAUR J, ADYA R, TAN BK, et al. Identification of chemerin receptor (ChemR23) in human endothelial cells: chemerin-induced endothelial angiogenesis[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2010, 391(4): 1762-1768.

[3]SPIROGLOU SG, KOSTOPOULOS CG, VARAKIS JN, et al. Adipokines in periaortic and epicardial adipose tissue: differential expression and relation to atherosclerosis[J]. J Atheroscler Thromb, 2010, 17(2): 115-130.

[4]GAO Xiu-ying, MI Shu-hua, ZHANG Fu-zhuang, et al. Association of chemerin mRNA expression in human epicardial adipose tissue with coronary atherosclerosis[J]. Cardiovasc Diabetol, 2011, 10: 87.

[5]ZHAO Rui-jun, PAN Zhi-yuan, LONG Chao-liang, et al. Stimulation of non-neuronal muscarinic receptors enhances chemerin/ChemR23 system in dysfunctional endothelial cells[J]. Life Sci, 2013, 92(1): 10-16.

[6]OU Zhi-jun, CHANG Feng-jun, LUO Dan, et al. Endothelium-derived microparticles inhibit angiogenesis in the heart and enhance the inhibitory effects of hypercholesterolemia on angiogenesis[J]. Am J Physiol Endocrinol Metab, 2011, 300(4): E661-E668.

Early Warning of Chemerin Level in the Serum of Patients with CHD

WU Xinyu1,ZHANG Chaoming1,WANG Gang2,GE Yiman1，XIE Guoli1

(1.Clinical Laboratory，The Affiliated Hospital of Chengdu University of TCM, Sichuan Chengdu 610075,China;

2.Clinical Laboratory，Sichuan People’s Hospital, Sichuan Chengdu 610072,China)

Objective:To explore the clinical value of Chemerin in the occurrence and development of coronary heart disease (CHD). Methods:Healthy male ApoE-/-mice were randomly divided into normal-chow group (NF group, n=10) and high-fat fed group (HF group, n=10).THE mRNA expression of Chemerin were measured by QPCR in mice hepatic tissue.The level of serum Chemerin were determined by ELISA. The levels of serum Chemerin in 45 cases of normal control group and in 150 cases of CHD suspected group were measured with ELISA.Results:(1)Chemerin mRNA relative expression levels of mice in abdominal aorta adipose tissue:in HF group was compared with in NF group, there was significantly difference (P<0.01).(2)The serum Chemerin levels of mice: in HF group than the in NF group was significantly increased (P<0.05) and Chemerin level of the serum were increased (P<0.05).(3)The levels of serum Chemerin of the normal population and patients with CHD: in CHD group (eventually diagnosed as angina and myocardial infarction) was compared with in the normal population,there was significantly difference (P<0.05), Chemerin levels of myocardial infarction was increased more than angina group(P<0.05).Conclusion:Chemerin level increase in the process of formation of atherosclerotic plaques in mice may be involved in promoting atherosclerotic plaque formation. Changes of Chemerin level may be involved in the occurrence and development of CHD and MI, there is a role in early warning for CHD.

Chemerin；CHD；QPCR；ELISA

张朝明，601587352@qq.com

R541.4

A

10.11851/j.issn.1673-1557.2015.01.011

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1688.R.20150116.1357.001.html

2014-03-31)