Netrin-1蛋白在肺腺癌中的表达和临床意义

刘鸿运 张其刚

Netrin-1蛋白在肺腺癌中的表达和临床意义

刘鸿运 张其刚

目的 探讨神经轴突导向分子Netrin-1在肺腺癌组织中的表达及其与临床的关系。方法 应用免疫组织化学SP方法检测60例肺腺癌手术标本癌旁及癌组织中Netrin-1的表达水平。结果 60例肺腺癌组织中Netrin-1蛋白高表达率为：80％（48/60），癌旁肺组织中为16.7％（10/60），组间比较差异有统计学意义（P＜0.05），肺腺癌组织中无淋巴结转移组织中Netrin-1蛋白表达率为65.7％（23/35），有淋巴结转移组中为92％（23/25），组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

肺腺癌；Netrin-1；免疫组化

近年来，肺癌的发病率和病死率均呈明显升高趋势，腺癌是最常见的组织学类型，约占肺癌的半数。由于肺癌患者生存率低，且常发生浸润与转移，预后极差，因此与肺癌浸润转移相关的机制一直都是研究特点[1-3]。神经轴突导向因子Netrin-1是层粘连蛋白相关的分泌蛋白，在调节神经轴突生长、促进肿瘤血管生成、调节白细胞迁移方面发挥重要作用[4-5]。Netrin-1/UNC5B信号通路在乳腺癌、肺癌结直肠癌[6]及神经母细胞瘤[7]起抑制凋亡作用，在细胞凋亡过程中扮演着重要作用。但是在肺腺癌中是否存在Netrin-1的表达及在其发生发展中的作用机制目前尚不明确。基于这一点，本文拟用免疫组化法检测Netrin-1蛋白在肺腺癌组织中的表达并研究其与临床病理的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

收集2007年6月～2010年6月我科手术切除并经术后病理证实为肺腺癌的患者肺腺癌组织标本及癌旁非癌组织标本60例，男24例，女36例，年龄36～75岁，平均年龄（58±16）岁。无淋巴结转移34例，有淋巴结转移26例。所有病例术前均未行化疗、放疗及靶向治疗。所选取的癌旁组织均为癌旁2 cm以内组织。

1.2 主要试剂、仪器和实验方法

兔抗人Netrin-1抗体（一抗，Abcam Inc），兔SP检测试剂盒（sp-9001）（中衫金桥），包括：3％H2O2去离子水，山羊血清工作液，山羊抗兔IgG抗体工作液（二抗），辣根酶标记链霉卵白素工作液。DAB显色试剂盒（中衫金桥），0.01mmol/L（pH 7.4）的磷酸盐缓冲生理盐水（PBS）（福州迈新试剂），多聚赖氨酸处理载玻片，盖玻片，梯度酒精、二甲苯、石蜡，柠檬酸钠缓冲液（pH=6.0）（福州迈新试剂），中性树胶（上海），高压锅、电磁炉，苏木素染色。实验步骤严格按照说明进行。石蜡切片脱蜡，以枸橼酸盐进行抗原修复，DAB显色，苏木精复染、脱水、透明封片，显微镜下观察。

1.3 结果判断

Netrin-1蛋白阳性信号均呈棕黄色颗粒样物质，位于细胞质。高倍镜下选取5个视野（每个视野观察细胞数≥200个），按阳性细胞所占百分比及着色深浅进行结果判断[8]。（1）按切片中细胞着色深浅评分：0分，细胞无染色；1分、浅黄色；2分、棕黄色；3分、棕褐色。（2）按阳性细胞百分比评分，＜30％为1分，30％～70％为2分，＞70％为3分。取2项评分的乘积作为总评分，0～1分为阴性，≥2分为阳性。

1.4 统计学方法

应用SPSS 13.0软件数据进行统计学分析，资料行χ2检验及列表的关联性分析，检验标准α=0.05。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肺腺癌和癌旁组织中Netrin-1的表达

Netrin-1蛋白在细胞质及细胞核都有表达，蛋白阳性信号呈浅黄色至深黄色。60例肺腺癌癌旁组织中Netrin-1低表达50例，高表达10例，肺腺癌组织中Netrin-1低表达14例，高表达46例。组间比较差异有统计学意义（χ2=4.82，P＜0.05），具体见图1和表1。

图1 Netrin-1蛋白在癌旁正常组织中（A）中呈低表达，在肺腺癌组织中（B）呈高表达

表1 肺腺癌及癌旁组织中Netrin-1蛋白的表达[阳性例数（％）]

2.2 Netrin-1表达与肺腺癌病理学特征的关系见表2。

表2 Netrin-1在60例肺腺癌组织中的表达情况

3 讨论

Netrin家族是一类于层粘连蛋白相关的可分泌蛋白，是一类重要的神经突起导向因子，在结构上高度保守。Netrin-1是Netrin家族中研究较多的重要成员之一，近年来研究结果显示，Netrin不仅能在神经导向、神经迁移和神经可塑性中发挥重要作用，还能引导包括血管和腺管在内的所谓管脉系统的生长，甚至可以调节白细胞的迁移。Fitamant等[9]发现Netrin-1与乳腺癌细胞的存活及转移有关，Netrin-1表达有利于转移的乳腺癌细胞存在，乳腺癌组织中Netrin-1高表达，则转移性强。另有研究表明，将人胰腺癌细胞植入鸡绒毛膜建立模型，发现Netrin-1抑制肿瘤细胞核内皮细胞凋亡，促进了肿瘤细胞的侵袭能力，这表明Netrin-1是胰腺癌生长、迁移的重要调节因子[9]。但是目前关于Netrin-1对肺腺癌的作用国内外报道尚少。

本研究通过免疫组化法监测肺腺癌及癌旁组织中Netrin-1蛋白的表达情况结果显示，60例肺腺癌组织中46例（76.7％）呈现Netrin-1高表达，高于癌旁组织10例（16.70％）。进一步分析发现，Netrin-1蛋白的表达与患者年龄、性别无关，统计学分析无统计学意义。与淋巴结转移有关，随有淋巴结转移，Netrin-1蛋白表达增高。

综上所述，Netrin-1在肺腺癌组织中呈阳性表达，在有淋巴结转移的肺腺癌组织中表达强烈，可能在肺腺癌的发生发展中发挥重要作用。Netrin-1很可能成为肺腺癌诊断和预后判断的新的生物标志物。对Netrin-1的进一步研究可能为肺腺癌的诊断和治疗提供理论依据。

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Expression and Clinical Signifcance of Netrin-1 Protein in Lung Adenocarcinoma

LIU Hongyun ZHANG Qigang, Thoracic Surgery, the First Hospital Affliated to China Medical University, Shenyang 110001, China

Objective To investigate the expression of axon guidance molecule Netrin-1 in lung adenocarcinoma and its clinical significance.Methods By immunohistochemical SP method was used to detect 60 cases of adenocarcinoma of lung cancer surgical specimens of adjacent to cancer and cancer tissue of netrin-1 expression levels. Results The expression rate of Netrin-1 protein in 60 cases of lung adenocarcinomawas： 80％ （48/60）, 16.7％ （10/60）, and the expression of Netrin-1 protein in lung adenocarcinoma tissues was 65.7％ （23/ 35）, 92％ （23/25）, and the difference was statistically signifcant （P＜0.05）. Conclusion Netrin-1 protein plays an important role in the development of lung adenocarcinoma, and the expression of Netrin-1 protein in lung adenocarcinoma is related to the metastasis and prognosis of tumor.

Lung adenocarcinoma, Netrin-1, Immunohistochemistry

R734.2

A

1674-9308（2015）30-0042-03

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.30.031

110001 辽宁省沈阳市中国医科大学附属第一医院胸外科

张其刚，E-mail：chaoyanglhy@163.com

结论 Netrin-1蛋白在肺腺癌的发生发展中起重要作用，肺腺癌组织中高表达的Netrin-1蛋白与肿瘤淋巴结转移、预后有关。