糖尿病肺组织超微结构病理改变与SPA、AGEs的免疫组织化学检测方法 与分析

郭海燕 吴 巍 王志生 任世义

吉林省肿瘤医院，吉林长春 130012

糖尿病肺组织超微结构病理改变与SPA、AGEs的免疫组织化学检测方法 与分析

郭海燕 吴 巍 王志生 任世义

吉林省肿瘤医院，吉林长春 130012

目的探讨糖尿病肺组织超微结构病理改变，进行SPA、AGEs的免疫组织化学检测及分析。方法选取该院2012年11月—2013年12月收治的成人二型糖尿病合并肺肿瘤患者74例，观察患者肺组织超微结构病理改变。对48只大鼠进行免疫组织化学方法分析AGEs、SPA变化。结果患者肺组织超微结构呈现特征性改变。免疫组织化学检测分析表明AGEs、SP-A表达增强。结论透射电镜可以观察到肺组织超微结构特征病理改变。AGEs表达增加，提示可能为高糖导致非酶糖化作用增强，导致肺组织超微结构改变；SPA增高，提示肺泡Ⅱ型细胞存在损伤，推断其可能为糖尿病肺损害及其表现的病理生理基础之一。

糖尿病；SPA；AGEs；免疫组织化学

糖尿病是由多种致病因素共同作用导致的一种全身代谢性疾病，主要表现为慢性高血糖，并可导致全身多系统损害。肺作为糖尿病全身损害的主要靶器官之一，对其超微结构改变和免疫组织化学改变研究有重要意义。为进一步分析糖尿病肺组织超微结构病理改变及SPA、AGEs的免疫组织化学检测分析，进而提高对糖尿病所致肺病的诊治水平，现将该院2012年11月—2013年12月成人二型糖尿病合并肺肿瘤患者74例的分析并做如下探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院自2012年11月—2013年12月收治的成人二型糖尿病合并肺肿瘤患者74例， 其中男31例，女43例，年龄43～81岁，平均年龄62岁。

1.2 超微病理观察

取远离癌组织的外周肺组织，制成活检标本,2.5%戊二醛固定液前固定。将标本切为1mm^3小块，缓冲液充分浸洗，1%四氧化锇溶液后固定。用上升梯度酒精脱水，环氧丙烷置换Epon812环氧树脂包埋。切成厚度50 mm左右的薄片。醋酸铀-柠檬酸铅双重染色。电镜观察并摄片。

1.3 免疫组织化学染色

①糖尿病动物模型的建立、分组、取材

选择3月龄、体重185～210g的雄性SD大鼠48只，随机分为糖尿病组和对照组，每组24只。分别行60mg/kg STZ 和等量生理盐水尾静脉注射。FBG >16.65mmol/ L表明糖尿病模型建立。实验4、12、20周末，处死每组大鼠各8只，取肺脏固定、脱水、包埋待检。

②免疫组化法

烘烤、脱蜡、水化、清洗、微波热修复抗原、缓冲液平衡。滴加一抗AGEs抗体1:1600、SP-A抗体1:75，对照组滴加TriS缓冲液，室温放置20 min，4℃冰箱中孵育过夜；滴加辣根酶标记的二抗和SABC试剂，室温孵育1h；DAB显色10 min，镜下监视染色效果；复染胞核3～4 min；上升梯度酒精脱水；二甲苯透明；中性树胶封固；光镜下观察。

2 结果

2.1 主要病理改变

肺泡Ⅱ型细胞变圆、变小，表面光滑，微绒毛减少乃至消失；核扭曲变形，可有多个核内陷，偶见不规则空白透亮区；嗜饿性板层小体萎缩成高密度核心团块；胞质内存在长杆状空隙；线粒体基质大部溶解，粗面内质网、线粒体扩张；次级溶酶体增多。肺泡Ⅰ型细胞萎缩，胞质见透明区。微血管狭窄闭塞，内皮细胞中可见自噬泡，泡内含高电子密度自噬体残渣颗粒。基膜呈洋葱样弥漫性增厚，周围蛋白质沉积，可见无定形沉积物、纤维状细丝。胶原原纤维增生。

2.2 免疫组织化学结果

①动物模型 对照组：饮水、尿量未见明显异常，大鼠毛色光滑、柔顺，体重增长，血糖正常；实验组：出现多饮、多食、多尿、体重明显下降，活动减弱，一般状态差。②AGEs对照组：大鼠细胞内可见少量（棕）黄色颗粒。实验组：在4、12、20周，AGEs在表达于肺组织细胞，可见（棕）黄色颗粒。相比于正常组，阳性细胞平均灰度值明显偏低且随时间推移降低。③sp-A：对照组：大鼠肺细胞可见少量胞浆（棕）黄色颗粒。实验组：4周时 SP-A的表达无==明显差异。12、20周SP-A表达于，胞浆可见（棕）黄色颗粒，实验组大鼠平均灰度值较正常对照组偏低，表明SPA表达在增多。

3 结语

糖尿病是由多种致病因素共同作用导致的一种全身代谢性疾病，主要表现为慢性高血糖，并可导致全身多系统损害。肺损害所致的病理改变主要是肺泡Ⅱ型细胞及基板的改变。Ⅱ型细胞是一种分泌性细胞，嗜饿板层小体是富含磷脂、蛋白质、粘多糖的胞浆内特殊分泌颗粒。Ⅱ型细胞受损，嗜饿小体萎缩，分泌肺表面活性蛋白减少，是肺泡腔塌陷、肺不张的原因之一。同时促进胶原聚集，加重非酶糖基化作用，形成AGEs。AGEs作用于IV型胶原，加强其分子共价交联，引起胶原弹性下降和变硬。AGEs沉积于肺毛细血管内皮，合成、分泌多种因子造成肺组织损害，即肺是高血糖损伤的一个靶器官。通过启动级联式反应，促进多种因子表达，参与糖尿病肺组织病变的发生发展。SPA对维持肺泡正常结构有重要的免疫作用。通过调理素作用于病原体，与病原表面特异性碳水化合物结合；配体激活途径；调节表面受体表达途径，利于机体的肺保护，避免病原微生物的侵害。实验组大鼠肺SP-A表达上升，可能是糖尿病肺损害及其表现的病理生理基础之一。

[1] 邓伟吾.糖尿病的肺功能损害和肺部并发症[J].临床肺病杂志，2010，15(7)：903-905.

[2] 穆维新，沈亚欣，崔士杰，等. 2型糖尿病大鼠肺组织基质金属蛋白酶-2、9及其抑制因子-1的表达变化[J]. 河北医药，2010,32(9)：1034-1037.

R587.1

A

1672-4062(2015)04(a)-0143-01

2015-01-03)

郭海燕(1966.1-)，女，长春市人，大专学历，副主任技师，研究方向：免疫组织技术。

任世义（1965.11-），男，长春市人，大专学历，副主任技师，研究方向：放射线技术。