周春元,王英平,朴向民
(中国农业科学院特产研究所,长春 130112)
云芝多糖(CoriolusversicolorPolysaccharide)具有明显的抗肿瘤、免疫调节、镇痛、消炎保肝、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗氧化以及抗衰老等作用,已经在功能食品和临床上得到了广泛的应用,这使得人们对云芝的开发研究日益活跃,云芝逐渐成为中药开发的研究热点之一。本文对云芝多糖的提取、分离纯化和药理活性等方面的研究现状进行综述,为云芝多糖的开发提供一定的参考依据。
云芝多糖需要经过一定的提取工艺制备。传统提取工艺上采取水醇沉提法,这种提取方法受用水量、提取温度、提取时间、提取次数等因素的影响。为了提高云芝多糖的含量,出现了许多与新技术相结合的提取方法。刘宇文等[1]采用正交试验的方法确定了云芝多糖的超声提取最佳工艺:20倍量的水、超声提取2次、每次15min。雷迎等[2]采用超声波提取法,研究了云芝多糖的最佳提取工艺,在单因素实验和正交实验基础上,以溶剂、超声时间、温度、pH作为提取因素,优化云芝多糖的提取工艺,结果显示,以2%的Na2CO3溶液为提取介质、温度45℃、pH 8.5、超声时间50min,云芝多糖的提取率达到最高。胡成旭等[3]采用响应面法探讨了云芝多糖的最佳提取条件,提取温度85℃、浸提时间105min、液料比27∶1,云芝多糖的提取率最高。这种方法是根据回归分析来确定云芝多糖提取率的影响因子,可减少试验次数,是一种提取云芝多糖最经济的方式。
无论从云芝子实体中提取还是菌丝体中提取的云芝多糖,都含有蛋白质、色素、鞣质、氨基酸、有机酸、酚类、内脂类、低聚糖等各种成分,需要进一步分离纯化才能得到纯度较高的云芝多糖。目前,离子交换柱和H2O22种方法均可以除去多糖中的色素,但H2O2这种氧化剂应在低温、低浓度下进行,否则很容易引起多糖的降解[4~6]。去除多糖中的蛋白质常采用Sevag法、三氟三氯二乙烷法、三氯乙酸法等方法,Sevag法是实验室去除游离蛋白的最常用方法。多糖中同时含有的游离蛋白质和色素,可采用金属络合物的方法,再经过阴离子交换树脂分解生成金属络合物[7],从而达到去除的目的。
云芝多糖具有重要的免疫增强作用,近年来学者们对其进行了深入地研究。牛晓晖等[8]研究发现,云芝多糖体外给药可明显促进小鼠T淋巴细胞、B淋巴细胞的增殖,提高肿瘤坏死因子(TNF)吞噬能力及细胞因子IL-1、IL-2和FN-γ的活性。云芝糖肽可提高红细胞C3b受体花环、T细胞亚群以及NK细胞的活性,降低免疫复合物花环细胞的活性,明显改善胃癌患者手术及化疗时免疫功能的影响[9]。鲁进宇等[10]研究表明,云芝多糖可提高淋巴细胞转化率和脾细胞产生溶血素能力,显著增强了小鼠的免疫功能。
云芝多糖抗肿瘤的最大优点是无毒无副作用,对多种恶性肿瘤的发生、发展、转移都起到良好的预防和治疗效果。陆培新等[11]研究表明,云芝多糖对实验性小鼠肝癌细胞有显著的抑制作用,并且对诱发生癌长期病变也有较好的阻断癌细胞发生的作用。Ikuzawa等[12]研究发现,云芝多糖对小鼠肉瘤S-180和肺癌细胞具有很强的抑制率,抗癌作用明显。曾淑君等[13]研究报道,连续口服云芝糖肽对裸鼠接种的人鼻咽癌和人肺腺癌有明显的抑制作用,其抑制肿瘤的作用机理不通过环核普酸系统而起抗肿瘤作用。刘瑞等[14]研究发现,云芝多糖可显著抑制接种于小鼠皮下的肝癌细胞的生长,抑制小鼠肝内P53和VEGF的表达,提高血清中IgG的含量,促进胸腺T淋巴细胞转移增生。此外,云芝多糖还能够抑制胃癌和乳腺癌等细胞的增殖[15]。
云芝多糖对肝损伤的保护作用主要是通过提高抗氧化酶和谷胱甘肽(GSH)的活性,加速自由基的清除起作用的[16]。腹腔注射四氯化碳引起的实验性肝损伤大鼠,云芝多糖能有效降低谷丙转氨酸合成,提高大鼠体内氨基半乳糖的形成,显著减轻肝细胞中毒现象[17]。胡承江等[18]探讨了云芝多糖对肝损伤的作用机制,结果表明,云芝多糖保护组与模型组比较,云芝多糖保护组小鼠肝体指数降低,胸腺指数增加,并且小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)的活性和肝匀浆中丙二醛(MDA)的含量下降。孙设宗等[19]研究了云芝多糖对化学性肝损伤的作用机制,结果表明,云芝多糖能有效地清除由四氯化碳引起的实验性肝损伤小鼠体内自由基,诱导超氧化物歧化酶(SOD)和GSH的合成,降低一氧化氮合酶(NOS)活性和一氧化氮(NO)的含量,增强机体抗氧化的能力,对肝损伤有很好的保护作用。
云芝多糖具有一定的抗氧化活性。周海华等[20]研究了云芝多糖的体外抗氧化效果,并与Vc的抗氧化作用进行了比较,结果表明,云芝多糖能清除自由基,但清除能力比Vc差。南凤仙等[21]探讨了云芝多糖对小鼠的抗氧化作用及其机制,对小鼠饮用云芝多糖水,测定血红细胞超氧化物歧化酶的活性和羟脯氨酸的含量,确定云芝多糖的抗氧化作用,结果显示,云芝多糖可增强机体清除脂质过氧化物的能力,具有很强的抗氧化作用。
云芝多糖还具有降血脂、益气解毒、镇痛、抗衰老、抗动脉粥样化、抗体外微生物活性等药理作用[22~26]。
云芝是一种重要的药用真菌,近年来,人们在云芝多糖的分离、纯化、组成、结构鉴定以及药理活性等方面进行了大量研究,并取得了一定的成果。但一些实验研究成果仍处在实验室阶段,不能很好地应用于工业生产。云芝多糖具有很多重要的药理作用,但其作用机制还不清楚,还需要进一步深入研究。由于云芝栽培技术还不成熟,目前,云芝多糖大多数是从菌丝体或发酵液中提取,云芝规模化种植技术还需要进一步提高。随着分离、纯化技术的不断创新和完善,云芝多糖会在更多领域具有更广泛的发展前景。特别是科学技术的发展,云芝多糖必将在食品、医药和保健品等领域的开发利用逐步深入。
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