Cella vision DM96血细胞形态自动成像仪在低值血小板计数中的应用＊

贺军涛 张彦平 何娜 张磊 耿燕

（西安交通大学第二附属医院，陕西 西安 710004）

血小板计数的准确性在临床工作中有着重要意义。当血小板计数＜20×109／L 时，可引起较严重的出血，有自发出血倾向；当血小板＜5×109／L 时，可导致严重的出血［1］。SYSMEX－XE2100 血细胞分析仪可以用两种方法计数血小板，即“电阻抗法”和“光散射法”。临床常用的为电阻抗法，但是电阻抗法计数血小板和红细胞在同一通道内，其结果易受干扰。光散射法利用散射光角度对血液成份进行分析，能更准确的分辨红细胞和血小板，但是仍然无法准确识别大血小板和血小板聚集的标本。CellavisionDM96 可以提供清晰的数码照片，形象的反映血小板形态、大小和分布。因此，采集了门诊76 例血小板减少的不同标本，分别采用SYSMEX－XE2100的电阻抗法、光学法和CellavisionDM96分析仪进行检测计数血小板，并就结果进行对比观察。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2014年12月5日至7日门诊患者经sysmex－xe2100血细胞分析仪检测的76例血小板计数＜100×109／L的EDTA－K2抗凝静脉血，76例标本中包括男性31例，女性45例，年龄2～75岁，采血后2h内完成各种检测。采用日本希森美康公司XE－2100血细胞分析仪及其配套试剂，瑞典Cella vision DM96成像仪，日本希森美康公司sp－1000i自动化涂片染色仪及其配套试剂，质控品为希森美康公司提供的e－check。

1.2 方法 日本希森美康公司XE－2100血细胞分析仪经厂方校准后，每天用3个浓度（高、中、低）水平原装质控品平进行室内质控，全部数据在控。其中低浓度质控品血小板计数采用封闭方式用电阻抗和光学法分别检测，CV 值均小于5%，见表1。

对76例标本严格按照操作规程同时进行电阻抗法和光学法对同一标本进行血小板计数。利用sp－1000i自动涂片染色仪对标本进行涂片染色后，将涂片放入CellavisionDM96分析仪中进行检测分析，通过对血小板的计数得出估算值。

1.3 统计学分析 利用SPSS 18.0统计学软件对所测得的原始数据进行配对t检验和相关线性回归分析。

表1 低浓度血小板室内质控结果Table 1 The quality control results of low value platelet laboratory

2 结果

2.1 对76例低值血小板标本采用3种方法计数血小板的结果进行相关分析和线性回归分析，其中血小板计数三种方法分是为电阻抗法（58.1±1.07）×109／L，光学法（60.01±31.06）×109／L，DM96（58.1±32.7）×109／L，电阻抗法和光学法回归方程为y＝0.9454x＋5.3522，光学法和DM96 回归方程为y＝0.9834x－0.9591，电阻抗法和DM96回归方程为y＝0.966x＋2.0889，见图1。

图1 三种方法对血小板计数结果的相关和回归分析Figure.1 The correlation analysis and regression analysis of the three methods of platelet count

2.2 通过Cella vision DM96对76例低值血小板计数，发现一例血小板聚集，造成SYSMEX－XE2100光学法和电阻抗法计数假性减低，见图2。

3 讨论

一般情况下如需判断患者有无出血倾向及其有无止血能力，需要做血小板检查，其中最为常见的是做血小板计数。近期有一些学者提出血小板计数在急性颅脑损伤预后中的意义［2］，血小板计数在肝硬化脾亢中的意义［3］。当血小板低于20×109／L 时，传统上认为必须给予患者输注血小板［4］。所以血小板计数准确性尤为重要，关系到疾病的诊断和必要的治疗。

图2 DM96镜检发现大量血小板聚集Figure 2 Microscopic examination revealed a large group of platelet aggregation by Cella vision DM96

世界卫生组织（WHO）推荐的血小板计数方法，容易受到充池，血小板在计数板上的分布，计数人员的主观判断等误差因素影响，重复性较差且费时，已不适用于临床工作的需求［5，6］。血小板计数的参考方法是国际血液学标准委员会（ICSH）推荐的使用抗CD61抗体和抗CD41抗体的流式细胞术［7］。但有些人血小板表面不表达CD61，而表达CD62或CD42b，这种病人就不宜用免疫学方法检测血小板，因免疫学方法很难在常规工作中推广应用。

目前大多数临床实验室对血小板的计数优先采用全自动血细胞分析仪的电阻抗法和光学法。电阻抗法计数红细胞和血小板常常在同一通道内进行，根据二者体积的不同，采用浮动界标技术界定血小板和红细胞，即血细胞分析仪在进行血小板计数时只收集2～20fl的原始数据，利用拟合曲线技术通过对数曲线正态分布的拟合方法计算出0～2fl及20～70fl的极小血小板和大血小板的数量，进而给出血小板的总数量。这种方法对血小板的计数受其它因素干扰较大，而且无法识别血小板聚集的情况，造成血小板的假性减低；易将小红细胞和红细胞碎片等作为血小板而计数，造成血小板的假性增高。

光学法对血小板的计数是通过对血小板核酸染色激光散射法。将稀释、化学染色或核酸染色的球形化细胞悬液注入鞘流中央使单个细胞沿着悬液和鞘流两股液流整齐排列成单行，并以恒定流速定向通过石英毛玻璃，即形成流体力学聚焦技术。当细胞或颗粒通过检测区被激光束照射时因其体积、染色程度、细胞内容物大小及含量、细胞核密度等本身特性，可阻挡或改变激光束方向，产生与其特征相应的不同角度的散射光，低角度散射光测定细胞大小及表面特性，高角度散射光测定细胞内部结构特征信息。这种方法可避免细胞重叠，利用高、低角度散射光提高对血小板的鉴别能力。但对于存在血小板聚集以及大血小板标本，此方法无法准确识别并计数血小板。

血常规仪器提示血小板聚集报警信息后，必须复查血样，推片复检，而传统手工推片受人工和时间限制，在大量样本面前往往没有优势，DM96弥补了这一缺憾，因为CellavisionDM96系统由涂片扫描装置和和装有配套血细胞分析软件的计算机组成。采用与血细胞分析仪的流式细胞术完全不同的技术，是一种结合传统显微镜检查和现代神经网络技术的新型细胞分析技术。血涂片装载到该系统后仪器开始扫描涂片，先在10×物镜下以城垛跟踪方式找到血小板，再于100×物镜下通过自动对焦进行细胞分割和提取，拍摄数码照片。用人工神经网络系统软件进行分析识别血小板。尤其对大血小板和血小板聚集的标本，所提供的清晰的图片，能够使对该标本的血小板减少原因和分布有更加准确的分析。操作人员只需对已分类结果做屏幕检查，客观的完成常规形态学分析，降低了人为介入，实现良好重复性，在实践时间上，大大节省了检验人员花费的时间，提高了工作效率［8－10］。我们通过DM96观察血小板形态上表现出体积不同的增大，可能和病情或药物治疗有关。电阻抗法计数血小板（80～100）×109／L 时并有大血小板的提示时，光学法计数普遍比电阻抗法高。可能与大血小板计数拟合曲线有关，造成电阻抗法血小板计数假性减低。因收集标本有限，可以进一步加大标本量并且验证正常血小板和高值血小板在CellavisionDM96上的临床应用价值。

4 结论

电阻抗法和光学法对血小板计数有较好的一致性，这与其他报道一致［11］。对于血小板减少的标本尤其是SYSMEX－2100检测提示有大血小板及血小板聚集的标本，一定要用CellavisionDM96系统进行分析。以确保结果的准确性，为临床提供更可靠的信息。

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