HPLC测定人血浆中塞克硝唑的浓度

黄露胡长明许明旺王秀萍陈丹

（1华中科技大学同济医学院附属梨园医院，湖北 武汉 430074；2武汉大学药学院，430072）

HPLC测定人血浆中塞克硝唑的浓度

黄露1胡长明1许明旺1王秀萍1陈丹2

（1华中科技大学同济医学院附属梨园医院，湖北 武汉 430074；2武汉大学药学院，430072）

目的：建立高效液相色谱法测定人血浆中塞克硝唑的药物浓度。方法：色谱柱：Thermo ODS-2柱（250 mm ×4.6 mm，5μm），流动相为乙腈-水（20∶80），流速为1.0 m L/min。紫外检测器检测波长为310 nm。结果：人血浆中塞克硝唑线性范围为0.25～ 100 mg/L，r=0.999 6；平均回收率大于90%，低、中、高浓度样品的日内和日间RSD均小于9.00%，各种条件下血浆样品的稳定性良好。结论：本法操作简便快速,灵敏度高,专属性强，适用于塞克硝唑血药浓度测定。

塞克硝唑；高效液相色谱法；血药浓度检测

塞克硝唑是硝基咪唑类化合物，与甲硝唑、替硝唑具有相似的化学结构，药理活性也颇为相似，临床上可用于治疗原虫（阿米巴、贾第虫和阴道毛滴虫）和厌氧菌引起的感染。已有较多文献报道采用高效液相色谱法（HPLC）测定血中塞克硝唑的浓度[1-2]，该法简便、灵敏、准确，更适用于大样本的血浆样本的测定。现对HPLC测定人血浆中塞克硝唑浓度报道如下。

1 仪器与试药

日本岛津 Shimadzu高效液相色谱仪（含LC-20AT泵，SPD-M 20A型紫外检测器，SIL-20A自动进样器，LCsolution工作站）；AUW 220D岛津分析天平（日本岛津公司产品）；XH-C涡旋振荡器（南京东迈光电仪器有限公司）；高速冷冻离心机（北京白洋医用离心机有限责任公司）。

塞克硝唑对照品（纯度≥99.0%，批号：130142-200703，中国食品药品检定研究院）。内标：甲硝唑对照品（纯度≥99.0%，批号：100152-200902，中国食品药品检定研究院）；甲醇、乙腈为色谱纯，水为双蒸水（自制）。

2 方法和结果

2.1色谱条件

固定相为Thermo ODS-2色谱柱（250 mm× 4.6 mm，5μm），流动相为乙腈-水（20∶80），流速为1.0m L/min，柱温为25℃，检测波长：310 nm[3-5]。

2.2 标准储备液和内标液的配制

精密称取塞克硝唑对照品适量，用甲醇溶解并定容，配得1 000 mg/L标准贮备液，临用前以甲醇稀释，得到不同浓度的系列标准溶液。精密称取甲硝唑对照品（内标）适量，用甲醇溶解并定容，配得 600 mg/L标准贮备液，临用前用甲醇稀释至60 mg/L的标准溶液。

2.3 样品处理

精密吸取血浆样本200μL于2 m L的离心管内，精密加入20μL内标标准溶液 （浓度为60 mg/L），涡旋混匀后加入甲醇 0.3 m L，涡旋混匀5 m in，15 000 rpm离心10 m in，取上清液20μL进样，测定塞克硝唑和内标甲硝唑的峰面积。

2.4 方法专属性

按上述色谱条件和血浆处理方法，检测所得色谱图如图1。塞克硝唑和内标甲硝唑的保留时间分别为 5.7 m in，8.5 m in，峰形较好，血浆中杂质不干扰测定。

2.5 标准曲线和最低定量限

吸取空白血浆180μL，加塞克硝唑系列标准溶液20μL，配制成相当于塞克硝唑血药浓度为0.25，0.5，1，5，10，25，50，80，100 mg/L的血浆样品，按“样品处理”项下操作，以待测物与内标物的峰面积比值（Y）对待测物浓度（C）进行回归运算，得标准曲线方程为：

图1 塞克硝唑专属性HPLC图

Y=0.141C－0.003。

r=0.999 6，线性范围为0.25～ 100 mg/L，定量下限可达0.25 mg/L。

2.6 精密度考察和回收率考察

配制终浓度为 1，10，80 mg/L的低、中、高浓度血浆样本，于同一天内测定5次和每天5次连续测定3天，计算日内、日间精密度及相对回收率。绝对回收率为低、中、高3个浓度的峰面积与对应浓度的标准品进样所得峰面积之比，结果见表1。同时得到在中浓度时内标甲硝唑绝对回收率为（97.41± 2.01）%。

2.7 稳定性

表1 血浆中塞克硝唑的精密度及回收率

配制终浓度为 1，10，80 mg/L的低、中、高浓度血浆样本，分别对室温放置稳定性（室温放置6 h后考察）、冻融稳定性（反复冻融 3次）、长期冷冻稳定性（-70℃冰箱保存4周）以及血浆样品处理后稳定性（室温放置12 h）进行考察。结果见表2，各浓度稳定性考察的 RSD均小于8.0%，表明血浆样品在上述条件下放置稳定。

表2 塞克硝唑稳定性

3 讨论

对于分离塞克硝唑和内标甲硝唑时流动相的选择比较容易[6-7]，在保证分离完全的前提下提高分析效率，因此选择乙腈-水的比例为20∶80，样品在10 min左右完成进样。在沉淀剂的选择上，考察过乙腈和甲醇的沉淀效果。乙腈容易包裹药物导致药物峰面积不稳定，最终选择甲醇作为蛋白沉淀剂。本方法药物峰形良好，基线平稳，定量下限可达到0.25 mg/L，并且出峰时间较短，大大提高了分析效率，适合大样本的分析。

[1] 张锦琳，袁耀佐，钱文，等.HPLC法测定塞克硝唑的含量及有关物质[J].中国药科大学学报，2009，40（6）：527-530.

[2] 孟婷，赵敏，吕韶敏，等.高效液相色谱法测定塞克硝唑中有关物质[J].第四军医大学学报，2007，28（3）：282-283.

[3] 汪凤梅，蒋程，邓淑丽，等.高效液相色谱法测定血液和唾液中的塞克硝唑浓度[J].中国药学杂志，2009，44（22）：1735-1737.

[4] 尚彬如，陈义强，张丽英，等.液相色谱-串联质谱测定饲料中7种硝基咪唑类药物[J].中国畜牧杂志，2011，47（13）：66-70.

[5] 孙亚欣，肇丽梅，朱旭，等.高效液相色谱法测定注射用头孢西酮在健康人血浆和尿中的浓度[J].中国临床药理学杂志，2010，26（5）：372-375.

[6] 陈张好，黄文静，刘小娟，等.高效液相色谱法测定化妆品中4种硝基咪唑类药物[J].理化检验 -化学分册，2014，50（2）：184-186.

[7] 张金安，郭均平，沈惠，等.HPLC法测定塞克硝唑片的有关物质[J].中国药师，2011，14（6）：834-835.

Determ ination of Secnidazole Concentration in Plasma by HPLC

Huang Lu1，Hu Changming1，Xu M ingwang1，Wang Xiuping1，Chen Dan2（1 Liyuan Hospital of Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology，Hubei Wuhan 430074，China；2 School of Pharmaceutical Sciences of Wuhan University，430072）

Objective：To establish a HPLC method for the determination of secnidazole concentration in human plasma.Methods：Liquid chromatography was performed on Thermo ODS-2 column（250 mm×4.6 mm，5μm）. The mobile phase of a mixture of acetonitrile water（20∶80）was used at a flow rate of 1.0 m L/min.The detection wavelength was at 310 nm．Results:A linearity was obtained w ithin the range of secnidazole concentrations from 0.25 to 100 mg/L（r=0.999 6）.The average recovery was more than 90%and the intra-day and inter-day RSDs were less than 9.00%.The stability of plasma samples under different conditions was good.Conclusion：It was proved that the method is easy for operation，it is sensitive and specific for the determ ination of the secnidazole concentrations in plasma．

Secnidazole；HPLC；Plasma Concentration Determ ination

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.06.006

2015-02-14）

黄露，女，药师。研究方向：临床药学。E-mail：282668237@qq.com

王秀萍，女，副主任药师。研究方向：临床药学、医院药学。通讯作者E-mail：meiwang916665@126.com