RP-HPLC测定琥珀酸美托洛尔缓释片的含量及有关物质

陈岩蓓,蒋文玉

(1.桂林市第二人民医院药剂科；2.桂林市精神卫生中心药剂科，广西 桂林　541001)



RP-HPLC测定琥珀酸美托洛尔缓释片的含量及有关物质

陈岩蓓1,蒋文玉2

(1.桂林市第二人民医院药剂科；2.桂林市精神卫生中心药剂科，广西 桂林541001)

摘要：目的 建立琥珀酸美托洛尔缓释片含量及有关物质的RP-HPLC方法。 方法以十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙酸铵缓冲液(3.9 g的乙酸铵溶解于810 mL的水中，加入10.0 mL的冰乙酸，2.0 mL的三乙胺，3.0 mL的磷酸)—乙腈=82 ∶18，流速1.0 mL·min-1，检测波长275 nm，进样量10 μL。 结果琥珀酸美托洛尔在20.00～120.02 mg·L-1浓度范围内线性关系良好，检测限为0.4 ng，定量限为1.2 ng，回收率为100.75%(RSD=0.67%)，测定样品含量为99.8%，有关物质均小于0.2%。结论该方法快速，简单，稳定，重现性好，可作为琥珀酸美托洛尔缓释片的含量及有关物质的检测方法。

关键词：琥珀酸美托洛尔；HPLC法；含量；有关物质

美托洛尔是属于β1受体阻断剂，临床用于高血压、心绞痛、心律失常[1-2]及伴有左心室收缩功能异常的症状稳定的慢性心力衰竭。琥珀酸美托洛尔缓释片(商品名：倍他乐克)由瑞典AstraZeneca研发生产，含 47.5 mg和95 mg两个规格，已经在欧盟、北美及我国等多个国家和地区上市多年，临床应用广泛。国内市售主要为酒石酸美托洛尔[3-4]，剂型以注射液、片剂为主，其生物利用率低，不良反应较多[5]，琥珀酸美托洛尔能有效避免上述缺点。缓释片可以有效稳定体内血药浓度，增加了药物的安全性和有效性，减少给药次数，避免药物对胃肠道的刺激。该药的分子式为(C15H25NO3)2·C4H6O6，分子量652.82，化学名为1-异丙氨基-3-[对-(2-甲氧乙基)苯氧基]-2-丙醇琥珀酸盐。但研究发现此方法不能将有关物质的干扰完全排除。本文通过对现有HPLC的条件进行优化，得到快速、准确的测定琥珀酸美托洛尔缓释片含量及有关物质的方法，报道如下。

1仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪，紫外检测器(Agilent)及安捷伦色谱工作站，电子分析天平(AE230S 梅特勒-托利多上海有限公司)，SB5200超声仪(必能信超声上海公司)。色谱纯乙腈(色谱纯，TEDIA公司生产)，纯化水，乙酸铵(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)，三乙胺(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，磷酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，乙酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)。琥珀酸美托洛尔对照品(英国LGC标准品公司，批号140915-01)，琥珀酸美托洛尔缓释片(阿斯利康制药有限公司，批号NI4816，NI4818，NI4822，规格95 mg)。

2方法和结果

2.1色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙酸铵缓冲(3.9 g的乙酸铵溶解于810 mL的水中，加入10.0 mL的乙酸，2.0 mL的三乙胺，3.0 mL的磷酸)—乙腈(82 ∶18)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：275 nm；进样量：10 μL；柱温：30℃。

2.2溶液配制

2.2.1含量测定对照品溶液精密称取琥珀酸美托洛尔对照品80.06 mg，置100 mL容量瓶中，加适量纯化水溶解后，定容至刻度，摇匀，配制成浓度为0.800 6 g·L-1的对照品溶液，备用。

2.2.2含量测定供试品溶液取供试品琥珀酸美托洛尔缓释片20片，研细，取细粉适量(约相当于琥珀酸美托洛尔100 mg)，置于50 mL容量瓶中，加入适量蒸馏水溶解，超声10 min，放冷，补加蒸馏水至刻度，摇匀，取滤液适量，加蒸馏水制成每1 mL中约含0.8 mg的溶液，备用。

2.2.3有关物质测定供试品溶液称取“2.2.2”项中琥珀酸美托洛尔的研细粉末适量，精密称定，置于50 mL的容量瓶中，加入适量蒸馏水溶解，超声10 min，放冷，补加蒸馏水定容，摇匀。配制成每1 mL中含有约100 μg琥珀酸美托洛尔的溶液。

2.2.4有关物质对照溶液精密量取“2.2.3”项中的有关物质供试品溶液1 mL，置于100 mL的量瓶中，加入纯化水定容至刻度，摇匀。

2.2.5阴性对照溶液按照处方比例称取羟丙甲纤维素(hydroxypropyl methyl cellulose，HPMC )、乙基纤维素(ethyl cellulose，EC)、滑石粉、硬脂酸镁适量(相当于一片药物的辅料，不含主药琥珀酸美托洛尔)，置于100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，超声10 min，滤过，取适量，稀释与样品相同倍数，即得。

2.3方法学考察

2.3.1专属性试验取“2.2.1”项下琥珀酸美托洛尔对照品溶液1 mL，于10 mL的容量瓶中，加入纯化水水定容至刻度，充分振摇溶解，精密量取 10 μL进色谱仪，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。按照上述方法分别取“2.2.2”项下含量供试品溶液、 “2.2.3”项有关物质供试、“2.2.4”项有关物质对照及“2.2.5”辅料溶液各1 mL，稀释至同等浓度，进色谱仪测定，记录色谱图，结果辅料峰未干扰测定,见图1。

分别取琥珀酸美托洛尔缓释片适量，研细，精密称量粉末(约相当于主药100 mg)进行如下测试：(1)酸破坏：将精密称定后的粉末置具塞试管中，加入0.1 mol·L-1盐酸溶液25 mL，摇匀，置于100℃水浴锅中4 h，放冷。加入0.1 mol·L-1氢氧化钠中和并转移至100 mL的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，配制成浓度为0.1 g·L-1的溶液，摇匀，过滤;(2)碱破坏：将精密称定后的粉末置具塞试管中，用0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液25 mL溶解，摇匀，置于100℃水浴锅中4 h，放冷。加入0.1 mol·L-1盐酸中和并转移至100 mL的容量瓶中，用流动相稀释，配制成浓度为0.1 g·L-1的溶液，摇匀，过滤;(3)氧化破坏：将精密称定后的粉末置具塞试管中，加入30%过氧化氢溶液10 mL，摇匀，放置12 h，加水稀释至刻度，配制成浓度为0.1 g·L-1的溶液，摇匀，过滤;(4)加热破坏：将精密称定后的粉末置具塞试管中，加水稀释，配制成浓度0.1 g·L-1的溶液25 mL，置于100℃水浴锅中4 h，放冷，过滤;(5)光破坏：将精密成定后的粉末置具塞试管中，加水稀释，配置成0.1 g·L-1溶液25 mL，置于强光(5 000 Lx)下照射12 h后，放冷。按照上述色谱条件进行测定，记录色谱图。结果显示样品在经过酸、碱、氧化、加热、光照破坏后主成分与各降解产物可以达到很好的分离,图2。

2.3.2系统适用性试验分别精密量取“2.2.1”项中琥珀酸美托洛尔对照品溶液、“2.2.2”琥珀酸美托洛尔缓释片供试品溶液及“2.2.5”项阴性对照溶液10 μL，按照上述色谱条件进样，色谱柱的理论塔板数按照美托洛尔计算不得少于4 000，美托洛尔与相邻杂质峰的分离度不低于2.0。

2.3.3检测限及定量限测定取“2.2.1”项中配制的琥珀酸美托洛尔的对照品溶液，稀释至50 mg·L-1，按照上述色谱条件进样，根据信噪比法进行试验，得到的结果：检测限为0.4 ng(S/N=3)，定量限为1.2 ng(S/N=10)。

2.3.4线性试验精密称量琥珀酸美托洛尔对照品100.02 mg，置于50 mL的容量瓶制备成浓度为2.00 g·L-1的溶液，精密量取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL置于100 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，得到浓度依次为20.00，40.01，60.01，80.02，100.02，120.02 mg·L-1浓度的溶液，按照上述色谱条件取10 μL依次进样，记录色谱图。以琥珀酸美托洛尔峰面积Y为纵坐标，以进样浓度X为横坐标，得到线性回归方程为：Y=10 104X+3 281，结果表明琥珀酸美托洛尔在20.00～120.02 mg·L-1浓度范围内呈现良好的线性关系。

2.3.5精密度及重复性试验取“2.2.1”项下琥珀酸美托洛尔对照品溶液，按照上述色谱条件进样，重复测定6次，记录美托洛尔的峰面积，计算相标准偏差RSD=0.29%，说明仪器精密度良好。

取NI4816批次的琥珀酸美托洛尔缓释片6片，分别研细，精密称量适量的粉末(相当于主药50 mg)，加水配制成浓度为10 g·L-1供试品溶液6份，按照上述色谱条件在同一高效液相色谱仪上分别进样，记录琥珀酸美托洛尔面积，其含量平均值为99.82%，相对标准偏差RSD=0.41%，显示重现性良好。

2.3.6回收率试验按照处方比例称量适量的辅料(相当于1片制剂的辅料量)，分别加入处方量的80%，100%，120%的琥珀酸美托洛尔的对照品，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，每个含量的溶液分别取3份1 mL加流动相稀释至5 mL作为供试品溶液。精密量取10 μL溶液，按照上述色谱条件进液相仪，记录图谱，结果见表1。计算得平均回收率为100.75%，RSD=0.67%。

表1　加样回收率数据

2.3.7稳定性取供试品溶液，分别在0、6、12、18、24 h精密吸取10 μL进样，记录色谱图，根据琥珀酸美托洛尔峰面积，计算其相对标准偏差RSD为0.45%，说明琥珀酸美托洛尔在24 h内溶液稳定。

2.4样品测定

2.4.1有关物质测定取上市品琥珀酸美托洛尔缓释片10片，研细，精密称量适量粉末(相当于琥珀酸美托洛尔40 mg)，置于100 mL的容量瓶中，加水振荡溶解，补加水稀释至刻度，摇匀，过滤，滤液作为供试品。取“2.2.1”项中琥珀酸美托洛尔对照品溶液稀释与供试品同等浓度作为对照溶液。精密量取供试品和对照品溶液10 μL进高效液相色谱仪，记录色谱图。根据面积归一化法计算有关主峰及有关物质的峰面积。按照上述方法分别测定3批上市品(批号NI4816，NI4818，NI4822)中有关物质含量分别为0.15%，0.13%，0.16%。

2.4.2含量测定取上市品琥珀酸美托洛尔缓释片10片，研细，精密称量适量粉末(约相当于主药8 mg)，置于100 mL的容量瓶中，加水溶解，补加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品。取“2.2.1”项中琥珀酸美托洛尔对照品溶液稀释与供试品同等浓度作为对照溶液。精密量取10 μL对照品与供试品溶液，进高效液相色谱仪，记录图谱。按照外标法分别测定测定3批上市品(批号NI4816，NI4818，NI4822)中有关物质含量分别为99.8%，99.9%，99.8%。

3讨论

本研究通过调整流动相的比例，尝试使用AlltimaC18、AICHROMEBond C18、HP-35安捷伦 C18柱在分离度、理论塔板数、拖尾因子等方面综合考量， ZORBAX SB--C18柱具有能有效分离美托洛尔的有关物质C,D，出峰时间合理。另外通过专属性研究酸、碱、高温、氧化破坏的杂质及对照品最大的吸收峰均在275 nm，此波长可以将主成分及有关物质较为灵敏的检测出。

通过测定的结果显示在以下条件：乙酸铵缓冲液(3.9 g的乙酸铵溶解于810 mL的水中，加入10.0 mL的乙酸，2.0 mL的三乙胺，3.0 mL的磷酸)—乙腈(82 ∶18)；流速：1 mL·min-1；检测波长：275 nm；进样量：10 μL；柱温：30℃的色谱条件下，主峰和辅料、有关物质达到基线分离要求，色谱峰形对称符合检测要求。

参考文献：

[1]叶长东.美托洛尔治疗冠心病的临床体会[J].中外医学研究,2013,11(21)：183.

[2]张景宝.美托洛儿联合培哚普利对慢性心力衰竭患者心功能的影响[J].安徽医药,2012,16(10):1512-1513.

[3]吴勤英,罗玉寅.国产与进口酒石酸美托洛尔治疗原发性高血压疗效与经济比较[J].中国现代医生,2012,50(22):56-57.

[4]陈军,柳梅,季榕.美托洛尔治疗慢性心力衰竭的疗效观察[J].中国医药指南,2013,11(24):431-433.

[5]党大胜,弓小雪,赵成龙,等.临床药师参与美托洛尔致老年患者幻觉不良反应处理的实例分析[J].中国医院药学杂志,2012,32(13):1044-1047.

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.12.016

(收稿日期：2015-09-14，修回日期：2015-09-30)

RP-HPLC determination of metoprolol succinate sustained-release
tablets and its related substances

CHEN Yan-pei1，JIANG Wen-yu2

(1.DepartmentofPharmacy,TheSecondPeople′sHospital;

2.DepartmentofPharmacy,TheMentalHealthCentre,Guilin541001,China)

Abstract：ObjectiveTo establish an RP-HPLC method for determination of the content of metoprolol succinate sustained-release tablets and its related substances. Methods The chromatographic separation was performed on ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)that was made by alkyl-bonded silica gels, ammonium acetate buffer solution(3.9 g acetic ammonia dissolved in 810 mL water, with an addition of 10.0 mL acetic acid, 2.0 mL triethylamine, 3.0 mL phosphoric acid)- acetonitrile=82 ∶18. The flow rate was 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was 275 nm. The sample size was 10 μL. Results There is good linearity within the range of 20.00～120.02 mg·L-1. The detection limit was 0.4 ng. The limit of quantitation was 1.2 ng. The average recovery was 100.75% (RSD=0.67%). Determination of the sample average content was 99.8%, and the related substance was less than 0.2%. Conclusion The method is quick, simple, stable and repeatable, which could be used to determine the content of metoprolol succinate sustained-release tablets and its related substances.

Key words：metoprolol succinate sustained-release tablet;HPLC;content;related substance