二甲双胍通过激活AMPK和抑制HNF4α而抑制血管紧张素II引起的TGF-β1产生

陈瑞飞，肖　晗，张幼怡(北京大学第三医院血管医学研究所，北京100191)

二甲双胍通过激活AMPK和抑制HNF4α而抑制血管紧张素II引起的TGF-β1产生

陈瑞飞，肖晗，张幼怡△
(北京大学第三医院血管医学研究所，北京100191)

目的:近年来研究发现一线降糖药二甲双胍(metformin)可通过激活AMPK发挥心血管保护作用。本研究旨在探讨metformin能否通过激活AMPK抑制Ang II引起的心脏成纤维细胞TGF-β1产生及其相关机制。方法:10周龄野生型C57BL/6和AMPKα2－/－小鼠，皮下植入微渗泵给予Ang II (3 mg· kg－1·d－1) 7 d，同时皮下注射metformin(200 mg·kg－1·d－1)。原代分离培养成年小鼠心脏成纤维细胞(AMCF)。采用real-time PCR、Western blot、双萤光素酶报告基因实验、染色质免疫沉淀技术(ChIP)等方法进行研究。结果:在野生型C57BL/6小鼠，metformin可抑制Ang II引起的心脏纤维化及TGF-β1的产生，而在AMPKα2－/－小鼠中，metformin则不能抑制Ang II引起的纤维化和TGF-β1产生。在野生型AMCF，metformin抑制Ang II引起的TGF-β1的产生，Compound C(AMPK抑制剂)能够逆转metformin的抑制作用。进一步研究发现，Ang II上调肝细胞核因子4α(HNF4α)蛋白表达，增加HNF4α与TGF-β1基因启动子区的结合，双萤光素酶报告基因实验证实HNF4α作用于TGF-β1基因启动子区，并介导其转录。HNF4α腺病毒过表达可增加AMCF中TGF-β1的产生;相反，通过慢病毒转染HNF4α siRNA后，Ang II引起的TGF-β1生成增加被抑制。这些结果提示HNF4α介导Ang II引起的TGF-β1转录表达。Metformin可抑制Ang II引起的HNF4α蛋白上调，Compound C可以逆转此作用，同时ChIP结果也表明metformin能够抑制Ang II引起的HNF4α 与TGF-β1的结合。结论: Metformin通过激活AMPK抑制HNF4α蛋白表达及其与TGF-β1转录区的结合，进而抑制Ang II引起的TGF-β1转录表达增加。

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