鸡新城疫免疫抗体的实验室检测

李雁萍

(山西省畜牧兽医学校,山西太原 030024)

鸡新城疫免疫抗体的实验室检测

李雁萍

(山西省畜牧兽医学校,山西太原 030024)

雏鸡体内母源抗体水平是不同的，统一接种新城疫免疫疫苗后，对接种疫苗可产生不同程度的干扰因素。尤其雏鸡母源抗体水平偏高时，将严重干扰免疫接种的抗体效力，使其发挥不出应有的免疫作用，导致整个鸡免疫水平参差不齐。本着科学测定鸡新城疫免疫抗体水平的原则，文章经试验测定结果分析，提出首免日龄应综合考虑，尽量避开雏鸡体母源抗体水平的高峰值，但是又不能迟于母源抗体保护的临界值，最佳时间安排在10日龄左右为最佳。

抗体检测 免疫 接种

1 前言

免疫接种鸡新城疫疫苗，是激发鸡特异抵抗力的有效手段，更是防治鸡新城疫的重要措施。但是，考虑到雏鸡体内不同的母源抗体水平，统一接种新城疫免疫疫苗后，对接种疫苗可产生不同程度的干扰因素。尤其雏鸡母源抗体水平偏高时，将严重干扰免疫接种的抗体效力，使其发挥不出应有的免疫作用，导致整个鸡免疫水平参差不齐。临床实践中，不少接种未产生抗体效力的实例，导致鸡群感染野毒，诱发鸡新城疫感染病例。为有效发挥接种疫苗的效力，确保雏鸟获得高价保护能力，雏鸡母源抗体检测应及时进行，并根据检测结果制定合理接种程序。

2 母源抗体概述

新生儿通过母体胎盘、初乳或卵黄等途径从母体所获得的特异性抗体称为母源抗体。获得母源抗体的新生儿母源抗体在出生后几天或者相当长的时间内得到保护，使之免受某些病原体的感染。然而高水平的母源抗体也能与疫苗中的特定抗原发生中和作用，使得某些疫苗免疫后部分或者完全失效，造成免疫失败。因此凡是出生后1-10天内首免某种疫苗的雏鸡均应进行母源抗体的检测，根据母源抗体的消退规律确定初免的时间。

3 鸡新城疫免疫抗体的实验室检测

3.1 试验材料及方法

取山西本地某孵化场提供的蛋鸡用试验材料，蛋鸡要求源自开产90d内的种鸡群，遴选的种鸡群开产前例行有效的免疫接种程序进行多次免疫。接种程序如下：7日首免，用新城疫传染性气管炎（H120）二联弱毒苗，接种经点眼、滴鼻；30日龄二免，用新城疫传染性气管炎（H120）二联弱毒苗，接种经点眼、滴鼻，剂量较首次加倍；60日龄三免，用鸡新城疫I 系疫苗，接种经肌肉注射；110日龄四免，用鸡新城疫灭活油乳苗，接种经肌肉注射，剂量每只1ml。同时，配合注射用I 系疫苗，较三次倍量注射；160日龄五免，用新城疫I 系疫苗，接种经肌肉注射。自上述鸡场自由选择100只鸡，自第一天开始，之后每间隔3d，随机取5只采血，实验室情况下进行新城疫母源抗体的检测，观察血凝抑制试验抗体的动态情况。本次试验时间，自2014年3月10日至2013年4 月10日为止。

3.2 血凝试验（HA）

采用 96 孔 V 型反应板，测定抗原效价。首先用微量移液器向反应板的每孔加生理盐水 50 μl。用微量移液器吸取待测抗原50 μl于第一孔中并挤压多次混合，后吸出 50 μl至第二孔，依次倍比稀释至第 11 孔，弃去 50 μl。微量移液器再吸取 1%红细胞悬液依次加入各孔，每孔 50 μl。置于微量振荡器上振荡 1 min。室温静置 30 min后观察结果。

对结果分析，反应板经45°倾斜，孔底红细胞顺倾斜面流动，呈线性流动为沉淀。由此，可断定红细胞未经或不完全被病毒凝聚。反应板经45°倾斜，孔底红细胞铺平孔底，未呈线性流动，均匀凝聚成薄层。由此，可断定红细胞未完全被病毒凝聚。抗原滴度红细胞凝聚效价的确定，为红细胞完全凝聚抗原的最高稀释倍数。本次试验测定第八孔红细胞为完全凝聚，证实此抗原效价在1：256。

3.3 血凝抑制试验（HI）

用微量移液器先加 50 μl生理盐水于各孔中。用微量移液器吸取待检血清 50μl置于第一孔中，然后倍比稀释至第 11 孔，弃去 50 μl。最后一孔不稀释，为红细胞对照。用微量移液器吸取配制好的抗原，每孔 50 μl。置于微量振荡器上振荡 1 min，混合均匀，室温静置 20 min。用微量移液器吸取 1%鸡红细胞悬液于每孔各加 50 μl。置于微量振荡器上振荡 1min，混合均匀。室温静置 40 min后观察结果。HI 试验时，50 μl抗原稀释液内需含 4 个凝集单位，则应将抗原作 64 倍稀释。即取 0.1 ml抗原，加入 6.3 ml生理盐水。

3.4 试验结果分析

试验鸡群不同日龄的抗体检测，经结果分析：雏鸡1日龄时，母源抗体水平平均值约在7.8log2；雏鸡4日龄时，母源抗体水平开始有所降低。但是，至雏鸡7日龄时，雏鸡H1母源抗体效价水平开始略有上升，逐渐达到峰值。随后，随着鸡群日龄的增加，母源抗体水平开始缓慢下降。约至22日龄，雏鸡H1母源抗体水平下降低至4.2 log2。约在雏鸡28日龄左右，雏鸡中母源抗体水平基本消失。

4 讨论分析

从雏鸡H1母源抗体检测的动态变化来看，此批雏鸡出壳后的1周，母源抗体效价峰值开始出现。此时的抗体效价，至少比1日龄多出1个倍比滴度。而在雏鸡出壳后的数天，雏鸡H1母源抗体才出现峰值。就其原因分析，机体生长吸收卵黄囊的速度增加，机体可获得免疫球蛋白数增加，从而导致雏鸡体内H1抗体效价有所提升。但是，随后的一段时间，随雏鸡日龄的增加，雏鸡体内母源抗体效价有下降趋势。总体情况而言，雏鸡H1母源抗体水平为上升后下降的趋向，约在雏鸡28日龄左右，雏鸡中母源抗体水平基本消失。由此，今后新城疫的免疫，首免日龄应综合考虑，尽量避开雏鸡体母源抗体水平的高峰值，但是又不能迟于母源抗体保护的临界值，最佳时间安排在10日龄左右为最佳。

[1]佟承刚，韦强，鲍国连.兔病毒性出血症母源抗体动态与抗病毒感染的关系和对策[J].畜牧兽医学报，1995，（2）：186-192.

[2]张兰香.鸡新城疫母源抗体与首免时间的确定[J].山东家禽，2002，（12）：47.

[3]王林，刘青.浅谈母源抗体与新生动物的早期抗病作用[J].家禽科学，2007，（7）：26-27.