缩泉丸质量标准研究分析

卢海霞 王钧 邵文

缩泉丸质量标准研究分析

卢海霞 王钧 邵文

目的修订完善缩泉丸原标准中鉴别及含量测定方法。方法采用薄层色谱法鉴别益智仁、乌药及高效液相色谱法测定乌药中乌药醚内酯的量。结果益智仁、乌药薄层斑点清晰；乌药醚内酯在0.0791~0.6328 μg(r=0.9999)内线性关系良好, 平均回收率分别为101.7%(RSD为2.6%)。结论实验方法操作简便、结果准确, 可用于本品的质量控制。

缩泉丸；薄层色谱；高效液相色谱；乌药醚内酯

缩泉丸处方来源于《妇人良方》［1］, 由山药、益智仁、乌药三味中药组成。益智仁温肾纳气；乌药温散下焦虚冷,固涩小便；山药健脾补肾。用于肾虚所致小便频数, 夜卧遗尿。缩泉丸现代临床被单独或与其他药物联合使用, 治疗小儿遗尿、老年尿失禁、夜尿症、神经性尿频、慢性肾小球肾炎、肾病综合征、尿道综合征等［2-4］。现代研究表明, 缩泉丸能降低D-半乳糖诱导亚急性衰老模型大鼠与尿液生成相关的水通道蛋白(AQP2)、神经内分泌激素醛固酮(ALD)和抗利尿激素(ADH)的含量, 升高衰老膀胱膀胱漏尿点压(BLPP)、腹压漏尿点压(ALPP)、最大膀胱排尿压(MVP)［5］。提高老年大鼠肾上腺系数及血清中皮质醇(Cort)、血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、血清甲状腺素(T4)含量［6］。缩泉丸原标准中收载了显微鉴别和理化鉴别。为更好控制产品的质量, 以乌药中乌药醚内酯为指标成分, 采用反相高效液相色谱含量测定乌药中乌药醚内酯的含量。并对乌药、益智仁进行了薄层色谱鉴别。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200 高效液相色谱仪, 硅胶G薄层板(青岛海洋化工有限公司, G板批号：20100219);硅胶GF254薄层板(青岛海洋化工有限公司, GF254板批号：20091210)。

1.2 试药 乌药醚内酯对照品(中国药品生物制品检定所,含量测定用, 批号：1568-200201)；乌药对照药材(批号：121096-200803, 供鉴别用)、益智对照药材(中国药品生物制品检定所, 批号：121029-200503, 供鉴别用)；缩泉丸(生产企业A提供, 批号：20080701、20080702、20080703；生产企业B提供, 批号：0809101、0809102、0809103)

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 乌药的鉴别 取本品6 g, 研细, 置具塞锥形瓶中, 加石油醚(30~60℃)30 ml, 密塞, 摇匀, 浸泡过夜, 滤过, 滤液挥发至约1 ml, 作为供试品溶液。按本品的处方、制法制备缺乌药的样品, 同法制备阴性对照溶液。取乌药对照药材1 g,同法制成对照药材溶液［7］。取上述三种溶液各5 μl, 点于同一硅胶G薄层板上, 以甲苯-乙酸乙酯(15：1) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰。

2.1.2 益智仁鉴别 取乌药鉴别项下的供试品溶液作为供试品溶液。另取益智仁对照药材1 g, 同法制成对照药材溶液。取上述两种溶液各5 μl, 分别点于同一用硅胶GF254薄层板上, 以环己烷-乙酸乙酯(9：1)为展开剂［8］, 展开, 取出, 晾干,置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中, 在与对照药材色谱相应的位置上, 显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。

2.2 含量测定［9,10］

2.2.1 色谱条件 色谱柱：phenomenex C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相：乙腈-水(44：56)；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl；检测波长：235 nm；柱温30℃。

2.2.2 溶液制备 对照品溶液取乌药醚内酯对照品适量,加甲醇制成20 μg/ml的溶液, 即得。

供试品溶液精密称取本品约3 g , 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇50 ml, 密塞, 称定重量, 超声处理1 h, 放冷, 再称定重量, 用甲醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。

2.2.3 专属性试验 按本品的处方工艺制成缺乌药阴性样品, 再按供试品溶液制法制备阴性对照溶液。精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液, 依法进行测定, 结果供试品溶液色谱图中在与对照品相同保留时间处有相应色谱峰出现, 而阴性对照液色谱图在与对照品相同保留时间处无色谱峰。

2.2.4 标准曲线 取乌药醚内酯对照品适量, 精密称定, 加甲醇制成20 μg/ml的溶液。分别精密吸取2、4、6、8、10、12、16 μl, 以进样量(μg)、峰面积为横、纵坐标, 绘制标准曲线。结果表明乌药醚内酯在0.0791~0.6328 μg(r=0.9999)内, 线性关系良好。

2.2.5 精密度试验 取供试品溶液(批号0809101), 按拟定的色谱条件, 连续测定5次。结果表明5次测定的乌药醚内酯峰面积平均值为158.97, RSD为0.86%。

2.2.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液(批号0809101),按拟定的色谱条件, 分别于配制后0、4、8、12、16、20、24 h进样测定每隔一定时间测定1次, 结果乌药醚内酯峰面积的RSD为1.91%(n=7)。供试品溶液至少在24 h内稳定。

2.2.7 重复性试验 取样品(批号：0809101), 按拟定的方法平行测定6份, 计算, 结果6份样品测得乌药醚内酯含量的平均值为0.29 mg/g, RSD为1.9%。试验结果表明, 本法的重现性较好。

2.2.8 加样回收率试验 取已知含量样品(批号：0809101,乌药醚内酯含量为0.29 mg/g)适量, 共6份, 精密称定, 具塞锥型瓶中, 每份分别精密加入乌药醚内酯对照品溶液(0.39522 mg/ml)适量, 依法测定。测得乌药醚内酯的平均回收率为101.7%, RSD为2.6% 。结果表明本法回收率较好, 符合定量分析的要求。

2.2.9 样品测定 取5批样品, 按拟定方法测定乌药醚内酯含量, 样品乌药醚内酯含量分别为0.29、0.24、0.25、0.03、0.09 mg/g。

3 小结

对含量测定供试品溶液提取方法分别考察了乙醚回流提取, 甲醇超声提取和氯仿超声提取三种方法, 采用高效液相色谱法测定提取率。

从三种提取方法看乙醚提取杂质少, 但回流时间长, 方法较费时。甲醇超声提取, 方法简单, 样品也能很好的分离,提取率也高于乙醚提取。氯仿提取样品成分复杂, 不好分离。因此, 确定选择甲醇超声提取的方法。

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［5］邱琼华, 吴君, 赖焕玲, 等. 基于尿液生成排泄探讨缩泉丸配伍机制.中国实验方剂学杂志, 2013, 19(10):207-210.

［6］吴君, 韩芸, 黄萍, 等.缩泉丸对自然衰老大鼠皮质醇、T_3、T_4及肾上腺系数的影响.时珍国医国药, 2014(12):2838-2839.

［7］莫肇江. 复方乌芍胶囊中赤药、乌药的鉴别.现代中医药, 2003(1):67.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.21.212

2015-07-03］

130033 吉林省药品检验所