血根碱在不同畜禽机体内残留量评定的研究

■岳 龙 易孟霞 贺 朝 邱 磊 贺 喜 张石蕊

（湖南农业大学饲料安全与高效利用教育部工程研究中心动物营养研究所，湖南长沙 410128）

血根碱是存在于自然界中的一类含氮的碱性有机化合物，系罂粟科植物博落回中分离出的生物碱，分子式为[C20H14NO4]+，相对分子质量为332.09，橙红色针状结晶，具有抑菌、抗炎的效果。在欧洲，血根碱作为植物源饲料添加剂已使用多年。本研究通过对不同畜禽类型的饲养，评定鸡、鸭及猪主要脏器、肌肉中血根碱残留量，为血根碱预混剂作为植物源饲料添加剂的安全性提供依据与参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

血根碱预混剂：1.5%血根碱（植物源提取）+载体。

1.2 试验动物及分组管理

试验一：选取40日龄健康三黄鸡30只。试验分高剂量组（添加80 mg/kg血根碱预混剂）、低剂量组（添加40 mg/kg血根碱预混剂）、对照组（不添加血根碱预混剂），每组10只。鸡笼养，试验期间自由采食和饮水，其他日常管理按鸡舍常规进行。

试验二：选取60日龄健康攸县麻鸭30只。试验分高剂量组（添加80 mg/kg血根碱预混剂）、低剂量组（添加40 mg/kg血根碱预混剂）、对照组（不添加血根碱预混剂），每组10只。鸭笼养，各组条件一致，试验期间自由采食和饮水，其他日常管理按鸭舍常规开展。

试验三：选取80 kg左右健康“杜长大”杂交猪20头，分试验组（添加80 mg/kg血根碱预混剂）和对照组（不添加血根碱预混剂），每组10头，分栏地面平养，条件一致。饲养试验期间猪自由采食，自由饮水。清洁和消毒工作按常规进行，保持栏舍通风、卫生、干燥。

1.3 试验饲粮

试验一和试验二的基础饲粮参照NRC家禽营养需要(1994)配制，低剂量组在基础饲粮中添加40 mg/kg血根碱预混剂，高剂量组在基础饲粮中添加80 mg/kg血根碱预混剂。

试验三基础饲粮参照NRC猪营养需要(1998)和中国猪饲养标准（2004）配制，试验组在基础饲粮中添加80 mg/kg血根碱预混剂。

1.4 检测指标与方法

1.4.1 样品采集方法

试验一：试验期为30 d，试验结束当天，每组随机选取6只鸡，屠宰后取其肝脏、肾脏、胸肌各10 g，将取得的样品用锡箔纸包好，放入液氮中后取出放入-80℃冰箱保存待测。

试验二：试验期为30 d，试验结束当天，每组随机选取6只鸭，屠宰后取其肝脏、肾脏、胸肌各10 g，将取得的样品用锡箔纸包好，放入液氮中后取出再放入-80℃冰箱保存待测。

试验三：试验期为30 d，试验结束当天，每组随机选取6头猪进行屠宰，取其肝脏、肾脏、眼肌各10 g，将取得的样品用锡箔纸包好，放入液氮中后取出再放入-80℃冰箱保存待测。

1.4.2 样品中血根碱残留检测方法

本研究参照冯宋岗等的方法进行测定。

仪器：岛津 LCMS2010液相色谱-质谱联用仪，LC-10AD VP低压四元梯度泵，CTO-10A VP柱温箱，SCL-10AD VP系统控制器，LC-MSsolution工作站。

试剂：甲酸(质谱级，上海安谱科学仪器有限公司)、甲醇(色谱纯，Merk，Darmstadt，Germany)、盐酸(分析级，国药集团)、乙腈(色谱纯，Merk，Darmstadt，Germany)、水(Milli-Q)、血根碱对照品(批号:201101，中国药品生物制品检定所)。

供试品溶液制备：称取1.0 g的组织，加1 ml蒸馏水，制成匀浆，加1 ml 1%盐酸-甲醇（50∶50），超声萃取30 min，15 000 r/min离心，上清液转入另一管中，沉淀物加1 ml 1%盐酸-甲醇（50∶50）重复超声萃取30 min，离心，上清液合并，50℃水浴氮气挥干，加100 ml流动相，混匀，离心5 min，取上清液5μl进样离心。记录色谱图，外标法以峰面积比定量。

液相色谱-质谱联用测定条件：色谱柱ThermoHypersil-HyPURITYC18（150×2.1 mm，5 μm）；柱温40℃；流动相为甲醇∶0.2%甲酸=65∶35，流速0.20 ml/min。

电喷雾电离源（ESI）：电离源电压4.5 kV，喷雾气氮气（N2）流速为1.5 L/min，干燥气体氮气流速为10 L/min。脱溶剂温度为250℃，检测器电压1.6 kV。选择性正离子监测（SIM）质荷比（m/z）为332.45的带正电荷的分子离子峰。

2 结果与分析

2.1 定量限

按照1.4.2的方法对标准溶液样品进行稀释，并检测稀释样品，经测定，本方法血根碱残留检测的定量限为5 ng/g。

2.2 鸡肝脏、肾脏及肌肉中血根碱残留量结果(见表1)

从表1结果分析可以看出，高剂量组和低剂量组鸡的血根碱残留量均低于定量限5 ng/g，对照组无血根碱残留。

表1 鸡肝脏、肾脏及肌肉中血根碱残留量结果(ng/g)

2.3 鸭肝脏、肾脏及肌肉中血根碱残留量结果（见表2）

表2 鸭肝脏、肾脏及肌肉中血根碱残留量结果(ng/g)

从表2结果表明，试验二高剂量组和低剂量组的血根碱残留量均低于定量限5 ng/g，对照组无血根碱残留。

2.4 猪肝脏、肾脏及肌肉中血根碱残留量结果（见表3）

表3 猪肝脏、肾脏及肌肉中血根碱残留量结果（ng/g）

表3结果显示了猪各器官、组织中血根碱残留的基本情况。试验组猪肝脏、肾脏及肌肉中血根碱残留量均小于5 ng/g，对照组无血根碱残留。

3 讨论

早期血根碱对鸡、鸭方面的深入研究报道较少。在有关鼠的研究中认为，血根碱浓度达到10 mg/kg时增加了鼠肝脏中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活力，同时造成微粒氧化酶细胞色素P450活性丢失，造成鼠肝脏受损，出现腹膜水肿及轻微肝肿大。本研究中，低、高剂量组血根碱实际添加量控制在0.6、1.2 mg/kg，在此剂量持续饲喂30 d后，根据试验结束屠宰后观察，所有试验组鸡、鸭体内均无任何脏器发生水肿，肝肾大小与色泽正常。与对照组相比，试验组动物采食量、毛色、健康状态等也没有异常，因此，鸡、鸭饲料中添加高至1.2 mg/kg血根碱，对动物是安全的。

一般说，大部分生物碱都随粪便排出体外，只有一小部分会被机体吸收。研究报道，猪饲料中博落回生物碱的安全剂量不超过5 mg/kg体重，本研究中，试验组血根碱每天摄入约为0.036 mg/kg体重。此条件下，动物肝肾脏及肌肉中血根碱残量仅为低于5 ng/g的数量级。这些都进一步证明了血根碱的安全性。

4 结论

本试验条件下，血根碱使用后相对鸡、鸭和猪重要脏器与肌肉中的残留量很低，全部低于5 ng/g，说明其安全性高。研究结果为血根碱预混剂作为饲料添加剂的安全性提供了依据及参考。