HPLC法测定盐酸丁卡因滴眼液中羟苯乙酯的含量

陈龙浩，王雪荣，孙春玲，陈行愉，陈奕彬，韩丽萍（广州军区广州总医院药学部，广州 510010）

HPLC法测定盐酸丁卡因滴眼液中羟苯乙酯的含量

陈龙浩，王雪荣，孙春玲，陈行愉，陈奕彬，韩丽萍＊（广州军区广州总医院药学部，广州 510010）

目的 采用高效液相色谱法测定盐酸丁卡因滴眼液中抑菌剂羟苯乙酯的含量。方法 色谱柱为Agilent HC－C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为0.005mol·L－1醋酸胺溶液（每1 000mL含三乙胺10mL；冰醋酸调pH5.0）－乙腈（55∶45）；检测波长为256nm；流速1.0mL·min－1。结果 羟苯乙酯质量浓度在14.31～143.12μg·mL－1范围内，与其峰面积呈良好的线性关系（r＝1），平均回收率为99.0%（RSD＝1.36%）。结论 该方法专属性强、测定结果准确、精密度高、线性好，适用于检测盐酸丁卡因滴眼液中羟苯乙酯的含量。

盐酸丁卡因滴眼液；HPLC；羟苯乙酯；含量测定

盐酸丁卡因滴眼液是临床上常见的局部麻醉剂，对黏膜有良好的穿透作用，适用于测量眼压、角膜异物剔除、眼科手术前的表面麻醉等［1］。其主要成分为盐酸丁卡因、羟苯乙酯和氯化钠等。

滴眼液以水为溶媒，易被微生物污染，因此，液体制剂中一般都应添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在贮藏和使用过程被微生物污染。羟苯乙酯为尼泊金类抑菌剂，其在液体、半固体制剂中防止微生物污染与繁殖、保证药品安全性方面起到了十分重要的作用。但羟苯酯类的过量使用对人体有损害，其会产生变态反应，也会与“对氨基族”抗原发生交叉反应，但发生“羟苯酯类悖论”现象，并有类激素作用［2］。钱晓娟［3］及周蕾［4］等曾用紫外分光光度法测定盐酸丁卡因注射液和胶浆的含量，但相比紫外分光光度法，HPLC法更加精确高效。因此，本文采用HPLC法建立了适用于测定盐酸丁卡因滴眼液中抑菌剂羟苯乙酯含量的方法，对滴眼液中抑菌剂进行定量控制具有实际意义。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪（Agilent 1100系列，包括二元泵、自动进样装置、DAD检测器、柱温箱等）；Sartorius BP211D电子分析天平。

1.2 试药 羟苯乙酯对照品（中国药品生物制品检定所，批号100847－201203）；盐酸丁卡因滴眼液（广州军区总医院自制，批号130808）；乙腈和异丙醇为色谱纯；醋酸铵分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 采用Agilent HC－C18色谱柱（250 mm×4.6mm，5μm）；流动相为0.005mol·L－1醋酸胺溶液（每1 000mL含三乙胺10mL；冰醋酸调pH5.0）－乙腈（55∶45）；流速1.0mL·min－1；检测波长为256nm。取供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法（《中国药典》2010年版二部附录ⅤD［5］）测定。见图1。

图1 HPLC图A.羟苯乙酯对照品；B.盐酸丁卡因滴眼液；C.空白样品；1.羟苯乙酯Fig.1 HPLC chromatogramsA.reference substance of ethylparaben；B.Tetracaine Hydrochloride Eye Drops；C.blank sample；1.ethylparaben

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取羟苯乙酯35.78mg，置于100mL量瓶中，用适量水溶解，再用流动相稀释并定容至刻度，摇匀，得357.8μg·mL－1的羟苯乙酯对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 精密量取样品液1mL，置于10mL量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，制成供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 分别精密量取对照品溶液1，2，4，6，8和10mL，置于25mL量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，制成含羟苯乙酯14.31，28.62，57.25，85.87，114.5和143.12μg·mL－1的系列质量浓度溶液，精密量取20μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件分析，记录色谱图，以羟苯乙酯质量浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，结果羟苯乙酯质量浓度在14.31～143.12μg·mL－1范围内，与其峰面积线性关系良好，回归方程：Y＝36 670 X＋4.246，r＝1。

2.3.2 精密度实验 取同一供试品溶液20μL，重复进样6次，以峰面积计算，羟苯乙酯RSD为0.49%，表明仪器精密度良好。

2.3.3 重复性实验 取同一批号样品6份，按供试品溶液制备方法处理后，分别按2.3项下测定，结果6份样品的羟苯乙酯平均质量浓度为0.242 2 mg·mL－1，RSD为1.15%，表明本方法重复性好。2.3.4 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在0，1，2，4，8和12h进样20μL，测定峰面积，以峰面积计算供试品溶液中羟苯乙酯RSD为0.496%。结果表明，供试品溶液在12h内稳定。

2.3.5 加样回收率实验 精密量取已知含量的盐酸丁卡因滴眼液2.0mL 9份，每3份平行，置于25mL量瓶中，其中1～3号分别精密加入羟苯乙酯对照品溶液1.0mL，4～6号分别加入上述对照品溶液1.3 mL，7～9号分别加入上述对照品溶液1.6mL，分别加流动相定容至刻度，按2.3项下测定峰面积，计算样品中羟苯乙酯的含量，并计算回收率，结果见表1。羟苯乙酯平均加样回收率为99.0%，RSD为1.36%。

表1 羟苯乙酯加样回收率实验结果Tab.1 Results of recovery experiment of ethylparaben（n＝9）

2.3.6 样品含量测定 取3个批次的盐酸丁卡因滴眼液样品，按上述测定法作3次平行测定，测定羟苯乙酯色谱峰面积，并采用标准法计算，结果盐酸丁卡因滴眼液中羟苯乙酯的质量浓度分别为0.239 1，0.245 4和0.241 6mg·mL－1，即羟苯乙酯为0.023 91%，0.024 54%和0.024 16%，RSD为1.31%。

3 讨论

电光性眼炎是由于大量且强烈的紫外线照射到眼睛的角膜和结膜而被吸收引起的急性炎症，在临床治疗上应先用盐酸丁卡因滴眼液等表面麻醉剂解除眼睑痉挛并进行下一步治疗［6］。液体制剂中添加适宜的抑菌剂能对制剂的贮藏和使用过程中起到防止微生物污染的作用，因此，对盐酸丁卡因滴眼液中的抑菌剂进行定量测定，对滴眼液中抑菌剂进行定量控制具有实际意义。

流动相的考察：以0.005mol·L－1醋酸胺溶液－乙腈［7］进行考察，结果经优化筛选后采用0.005 mol·L－1醋酸胺溶液－乙腈（55∶45），在该流动相比例下羟苯乙酯的出峰时间快，峰形不拖尾且对称性好，无杂峰干扰下色谱重复性好。

检测波长选择256nm［7］是因为在该波长下盐酸丁卡因滴眼液中羟苯乙酯有较强的紫外吸收，其他辅料杂质在该波长处几乎无紫外吸收，故本实验选择256nm作为检测波长。

［1］ 朱迎军，王伟娇，杨汉初.HPLC法测定盐酸丁卡因滴眼液中盐酸丁卡因的含量［J］.中国药品标准，2013，14（5）：356－357.

［2］ 李中东，张云轩，郭燕萍，等.羟苯酯类防腐剂的不良反应［J］.中国药物警戒，2012，9（5）：303－305.

［3］ 钱晓娟.紫外分光光度法测定盐酸丁卡因注射液的含量［J］.西北药学杂志，2003，18（1）：6－7.

［4］ 周蕾，李龙健.紫外分光光度法测定盐酸丁卡因胶浆含量［J］.西北药学杂志，2004，19（4）：155－156.

［5］ 国家药典委员会.中国药典2010年版［S］.二部.北京：中国医药科技出版社，2010：附录ⅤD.

［6］ 张晓英，杨玉珍，陈柳珍.紫外线灯消毒引起电光性眼炎的原因分析与防护［J］.护理实践与研究，2009，6（24）：105－106.

［7］ 罗亚虹，陈莹，乔艳.高效液相色谱法测定盐酸丁卡因滴眼液中两组分含量［J］.中国药业，2009，18（14）：31－32.

Determination of ethylparaben in Tetracaine Hydrochloride Eye Drops by HPLC

CHEN Longhao，WANG Xuerong，SUN Chunling，CHEN Xingyu，CHEN Yibin，HAN Liping＊（Pharmacy of Guangzhou General Hospital of Guangzhou Military Region，Guangzhou 510010，China）

Objective To determine the contents of ethylparaben in Tetracaine Hydrochloride Eye Drops by HPLC.Method TheHPLC column was Agilent HC－C18（250mm×4.6mm，5μm）.The mobile phase was 0.005mol·L－1ammonium acetate（1 000 mL consisted of 10mL triethanolamine，pH adjusted to 5.0with acetic acid）－acetonitrile（55∶45）with a flow rate of 1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 256nm.Results A linearity between ethylparaben concentration and peak area was achieved in the range of 14.31－143.12μg·mL－1（r＝1）.The average recovery was 99.0%with RSD 1.36%.Conclusion The method is reproducible，accurate and precise，which is suitable for the determination of ethylparaben as bacteriostat in Tetracaine Hydrochloride Eye Drops.

Tetracaine Hydrochloride Eye Drops；HPLC；ethylparaben；quantitative analysis

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.02.014

R282

A

1004－2407（2015）02－0149－03

2014－09－11）

军队医疗制剂标准提高科研重大专项课题（编号：13ZJZ24）

陈龙浩，男，主管药师

＊通信作者：韩丽萍，女，硕士，主任药师