HPLC法测定续断接骨胶囊中川续断皂苷Ⅵ含量

闵济富 高 建

HPLC法测定续断接骨胶囊中川续断皂苷Ⅵ含量

闵济富 高 建

目的采用高效液相色谱法测定续断接骨胶囊中川续断皂苷Ⅵ的含量。方法色谱柱:Amethyst C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相:乙腈－水(28∶72)，检测波长:212 nm，流速:1.0 mL/min。结果川续断皂苷Ⅵ的质量浓度线性范围为0.019～0.612 mg/mL(r=0.999 9)，平均加样回收率为100.89%，RSD=1.10%。结论该方法简便快捷，结果准确可靠，可作为续断接骨胶囊的质量控制手段。

续断接骨胶囊;高效液相色谱法;川续断皂苷Ⅵ

续断接骨胶囊是天长市中医院骨伤科的协定方，经现代提取技术、制备工艺加工制成的医院制剂，由酒续断、炙黄芪、当归等中药组成，具有续筋接骨、补益肝肾的功效，用于骨折中后期的治疗，经过我院老中医十多年的临床验证，疗效可靠。本处方中酒续断为君药，具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏、安胎等功效［1］。续断接骨胶囊的化学成分主要为三萜皂苷类、环烯醚萜苷类、黄酮类、生物碱类、挥发油类等，其中主要的有效成分为川续断皂苷Ⅵ［2］。本文采用HPLC法对续断接骨胶囊中川续断皂苷Ⅵ的含量进行测定，结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 日本岛津LC-10AT高效液相色谱系统;N2000色谱工作站;Mettler Toledo公司ABS135-S型电子天平。

续断接骨胶囊(天长市中医院制剂室，批号:101001、101002、101003);川续断皂苷Ⅵ对照品(南京泽朗医药科技有限公司，标定纯度:97.60%)。

1.2 对照品溶液制备 精密称取川续断皂苷Ⅵ对照品(纯度:97.60%)6.27 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇1 mL溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL含川续断皂苷Ⅵ0.612 0 mg的溶液。

1.3 供试品溶液制备 取本品研细的粉末1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，置水浴加热回流1.5 h，冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.4 阴性对照品溶液制备 按处方比例制备不含酒续断的阴性样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2 结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:Amethyst C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);以乙腈 －水(28 ∶72)为流动相;检测波长:212 nm;柱温:25℃;流速:1.0 mL/min;进样量:20 μL。理论塔板数按川续断皂苷Ⅵ峰计算应不低于3 000，色谱图见图1～图3。

2.2 线性关系考察 取“1.2”项下的对照品溶液，分别用流动相稀释 0、2、4、8、16、32 倍，精密吸取上述溶液各20 μL注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，以对照品浓度为横坐标(X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，回归方程为Y=7 534 952 X+3 508，r=0.999 9。川续断皂苷Ⅵ在0.019～0.612 mg/mL范围内，峰面积有良好的线性关系。

2.3 精密度试验 取同一浓度对照品溶液，连续进样6次，结果得川续断皂苷Ⅵ峰面积的RSD为2.04%(n=6)，表明进样精密度良好。

2.4 稳定性试验 取同一供试品溶液20 μL，于0、2、4、6、8、10 h进样测定，结果川续断皂苷Ⅵ含量的RSD为2.28%(n=6)，表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.5 重复性试验 取同一批样品6份，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定川续断皂苷Ⅵ含量，RSD为1.25%(n=6)，表明重复性良好。

2.6 加样回收率试验 精密称取已知川续断皂苷Ⅵ含量的样品9份(含量:6.67 mg/g)，分别精密加入1.5、2.5和3.5 mL浓度为1.33 mg/mL的川续断皂苷Ⅵ对照品，按供试品溶液的制备方法制备溶液，测定含量并计算回收率得平均回收率为100.89%，RSD=1.10%(n=9)。见表1。

表1 川续断皂苷Ⅵ加样回收率实验结果(n=9)

2.7 样品含量测定 取不同批号样品(批号为101001、101002、101003)，按“1.3”制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件进行HPLC分析，测定其中川续断皂苷Ⅵ的含量，见表2。

表2 不同批号样品含量测定(n=3)

3 讨论

本文采用HPLC对续断接骨胶囊中川续断皂苷Ⅵ的含量进行测定，续断皂苷Ⅵ的质量浓度线性范围为0.019～0.612 mg/mL(r=0.999 9)，平均加样回收率为100.89%，RSD=1.10%，3批样品中川续断皂苷Ⅵ的平均含量分别为 2.684 mg/粒、2.610 mg/粒和2.677 mg/粒。实验中通过紫外分光光度法扫描，川续断皂苷Ⅵ在212 nm处有最大吸收，以及参考相关研究［3，4］，本实验采用 212 nm 作为检测波长。

本文供试品溶液的制备方法在参照文献［1，3］的基础上进行优化，依次对提取溶剂(甲醇∶乙醇∶水饱和正丁醇)、提取方法和时间(加热回流1.5、3 h和超声处理 30、60 min)、溶剂用量(50、100、200 mL)进行考察，结果显示以甲醇50 mL加热回流1.5 h时所测川续断皂苷Ⅵ含量最高，最终确定了供试品溶液的制备方法。

文献报道的HPLC法测定川续断皂苷Ⅵ的方法中，使用的流动相主要有乙腈 －水(31∶69)［5］，乙腈－水(30 ∶70)［3］，乙腈 －水(28 ∶72)［4］，甲醇 － 水(梯度洗脱)［6］，实验中比较了不同比例的乙腈－水系统和甲醇－水系统，其中以乙腈－水(28∶72)为流动相，基线较平，分离度好。

HPLC对续断接骨胶囊中川续断皂苷Ⅵ进行定量分析，具有较好的准确度和灵敏度，实验的重复性高。本方法可用于续断接骨胶囊中川续断皂苷Ⅵ的定性及定量研究，为续断接骨胶囊的质量控制提供参考。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:309.

［2］刘二伟，吴帅，樊官伟.川续断化学成分及药理作用研究进展［J］.中华中医药学刊，2010，7(12):1421 － 1423.

［3］谭洪根，林生，张启伟，等.高效液相色谱法测定续断药材中川续断皂苷Ⅵ的含量［J］.中国中药杂志，2006，31(9):726－727.

［4］李大庆，王曼宁，梁晓丽，等.祛风止痛胶囊中川续断皂苷Ⅵ的含量测定［J］.医药导报，2012，31(6):791 － 792.

［5］董文桑，瞿发林，蒋燕.HPLC法测定舒筋活络酒中川续断皂苷Ⅵ含量［J］.中国药师，2008，11(3):284 －286.

［6］胥秀英，郑一敏，傅善权，等.道地药材川续断指纹图谱模糊模式识别研究［J］.中国药业，2008，17(5):8－9.

Determination of asperosaponinⅥin Xuduanjiegu capsule by HPLC

Min Jifu，Gao Jian
School of Pharmacy，Anhui University of Chinese Medicine，Hefei 230038，China

ObjectiveTo determine asperosaponinⅥ in Xuduanjegu capsule by HPLC.MethodsThe chromatography procedure was carried out using Amethyst C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)as an analytic column and acetonitrile－ water(28 ∶72，v/v)as a mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was set at 212 nm.ResultsThe linear range of asperosaponinⅥ was between 0.019 mg/mL and 0.612 mg/mL(r=0.999 9).The average recovery rate of asperosaponin Ⅵ was 100.89%，with the RSD of 1.10%.ConclusionThe method is simple，accurate and reliable and can be used for the quality control of Xuduanjiegu capsule.

Xuduanjiegu capsule;HPLC;AsperosaponinⅥ

10.3969/j.issn.1000 －0399.2015.03.001

2013年安徽省高等教育振兴计划人才项目，安徽省学术和技术带头人后备人选培养资助

230038 合肥 安徽中医药大学药学院(闵济富，高建)

230022 合肥 安徽医科大学第一附属医院药剂科(高建)

高建，gaojianayfy@163.com

(2014－10－23收稿 2014－12－27修回)