苍辛滴鼻剂的提取工艺实验研究

宫鹏 高建

苍辛滴鼻剂的提取工艺实验研究

宫鹏 高建

目的优选苍辛滴鼻剂的最佳提取工艺。方法水提工艺及醇沉工艺均以绿原酸为考察指标进行正交实验。结果苍辛滴鼻剂的最佳水提工艺为:加水8倍量，煎煮2次，每次1 h。最佳醇沉工艺为:水提液浓缩至相对密度为1.05的清膏，乙醇浓度为70%，静置24 h。结论优选出的苍辛滴鼻剂提取工艺稳定可行。

苍辛滴鼻剂;正交实验;绿原酸

苍辛滴鼻剂由苍耳子、辛夷、白芷三味中药组方而成，主要治疗鼻炎、鼻窦炎及相关并发症［1－3］。本方参照宋代《济生方》中的治疗鼻炎鼻窦炎的经典方(苍耳子散)，原方为苍耳子、薄荷、辛夷、白芷四味中药，本方在原有基础上进行了调整，选取苍耳子、辛夷、白芷这三味，由对治疗鼻炎明确有效的中药提取精制而成［4］。本制剂汲取了传统中医药理论，运用现代的研究精制方法，制备成外用滴鼻制剂，不仅疗效显著且使用方便。本文依据方中君药苍耳子的理化性质，同时结合本制剂的功能主治，以绿原酸为考察指标，采用正交实验法优选苍辛滴鼻剂的提取工艺［5］。

1 材料与方法

1.1 实验材料 Waters 600高效液相色谱仪(美国Waters公司)，BP210S型万分之一电子天平(德国赛多利斯)，AS3120型超声波清洗器(天津奥特赛恩斯公司)。苍耳子、辛夷、白芷均购自合肥和义堂中药饮片厂。绿原酸对照品(批号:753－9205)由中国药品生物制品检定所提供，乙腈(色谱纯)，重蒸水，其他试剂均为分析纯。

1.2 水提工艺的研究

1.2.1 水提正交实验设计 分别称取苍耳子10 g、辛夷10 g、白芷10 g，共9份，按照表1中的L9(3)4正交表进行正交实验，收集水提液，并定容到1 000 mL。

表1 水提实验因素水平

1.2.2 HPLC法测定水提液中绿原酸含量

1.2.2.1 色谱条件 shim-pack ODS柱(250×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 －0.4%磷酸溶液(13 ∶87);检测波长:327 nm;柱温:25℃;流速:1.0 mL/min。

1.2.2.2 绿原酸对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品1.967 mg，置10 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成目标浓度的溶液，即得。

1.2.2.3 供试品溶液的制备 取“1.2.1”项下的水提液适量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.2.2.4 标准曲线制备 精密吸取绿原酸对照品1、2、4、8、12、16 μL，依次注入液相色谱仪，依法测定。得A=1 414 320 C+72 469;R2=0.998 8。结果表明，绿原酸在0.196 7～3.147 2 μg范围内，绿原酸含量与峰面积呈良好线性关系。

1.2.2.5 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，依照水提正交实验设计测定。

1.3 醇沉工艺的研究

1.3.1 醇沉正交实验设计 取水提液，平均分成9份，再按照表2中L9(3)4正交表进行醇沉实验。弃去醇沉后的杂质，得醇液定容至500 mL。

表2 醇沉实验因素水平

1.3.2 HPLC法测定醇沉液中绿原酸含量

1.3.2.1 色谱条件 shim-pack ODS柱(250×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 －0.4%磷酸溶液(10 ∶90);检测波长:327 nm;柱温:25℃;流速:1.0 mL/min。

1.3.2.2 绿原酸对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品1.706 mg，置10 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成目标浓度的溶液，即得。

1.3.2.3 供试品溶液的制备 取“1.3.1”项下的醇液适量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.3.2.4 标准曲线的制备 精密吸取绿原酸对照品0.5、2、4、6、8、10 mL 至 10 mL 量瓶中，加 50%甲醇至刻度，摇匀即得。得 A=34 653 C－4 485.6;R2=0.999 8。结果表明，绿原酸在 8.53 ～136.48 μg/mL 范围内，绿原酸含量与峰面积呈良好线性关系。

1.3.2.5 测定法 分别精密吸取对照品溶液20 μL与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，依照醇沉正交实验设计测定。

2 结果

2.1 水提正交结果 正交实验表结果可知最佳水提工艺为:A3B1C3，见表3。方差分析见表4，B项煎煮时间具有极显著性影响，故煎煮时间1 h即可，符合绿原酸长时间受热会被破坏的理论依据［6］。其他两项加水量为默认误差，煎煮次数的显著性相对于煎煮时间的显著性可忽略，故从降低工业生产成本的角度出发，可得最佳水提工艺为A1B1C1。综合考虑，并参照表3中的绿原酸含量，最后确定最佳水提工艺为A2B1C2，即用8倍量水，提取2次，每次1 h。

表3 水提正交实验结果

表4 水提方差分析结果

2.2 水提验证实验 称取苍耳子300 g、辛夷300 g、白芷300 g，按照水提正交实验优选后的方案，即用8倍量水，提取2次，每次1 h进行验证实验，水提液定容到9 000 mL，作为供试品溶液。按“1.2.2”项下的色谱条件，运用外标一点法依法进行含量测定。水提后绿原酸得提取率可达80%以上，此验证实验可确定该水提工艺稳定合理，见表5。

表5 水提工艺验证实验结果

2.3 醇沉正交结果 正交实验表结果可知最佳醇提工艺为:A1B3C1，见表6。方差分析见表7，A项相对密度和B项醇沉浓度均具有极显著性，A项相对密度越小，即在水提液浓缩的过程中有效成分绿原酸被杂质包裹的可能性越低［7］，所得绿原酸含量越高;B项醇沉浓度决定在醇沉时浓缩液中绿原酸的溶出，绿原酸在70%乙醇中的溶解度最大［8］，与方差分析结果一致，故可确定最佳醇沉工艺的相对密度为1.05，醇沉浓度为70%乙醇。C项醇沉时间为默认误差，故从缩短工业生产周期的角度出发，选取醇沉时间为24小时，可得最佳水提工艺为 A1B3C1，与表6所得结果一致。最后确定的最佳醇提工艺为A1B3C1，即相对密度1.05，醇沉浓度为70%，醇沉时间24 h。

表6 醇沉正交实验结果

表7 醇沉方差分析结果

2.4 醇沉验证实验 称取苍耳子100 g、辛夷100 g、白芷100 g，水提后按照醇沉正交实验优选后的方案，即相对密度1.05，醇沉浓度为70%，醇沉时间24 h进行验证实验，按“1.3.2”项下的色谱条件，运用外标一点法依法进行含量测定。水提醇沉后绿原酸得提取率可达75%以上，此验证实验可确定该醇沉工艺稳定合理，见表8。

表8 醇沉工艺验证实验

3 讨论

3.1 考察指标选择 本方苍辛滴鼻剂中苍耳子为君药，具有散风除湿，通鼻窍的功能，为历代治疗鼻渊及头痛要药。苍耳子主要含有酚酸类、水溶性苷类、脂肪油、蛋白质等成分［6］。现代研究表明苍耳子主要活性成分为酚酸类化合物，具有抗感染和镇痛等作用［4］，其中绿原酸为主要有效成分。故本文选取绿原酸为指标对提取工艺进行筛选。

3.2 提取方法的选择 在确定苍辛滴鼻剂以绿原酸为考察指标后，考虑到苍耳子中含有大量的蛋白质成分［8］，制成鼻腔给药制剂会对鼻黏膜造成一定的刺激，影响制剂使用的舒适性，故在提取方法的选择方面采用水提醇沉法。先进行水提最大限度的保留有效成分，得水提液后醇沉去除水溶性蛋白杂质。

3.3 流动相筛选 在正交水提过程中，绿原酸的测定方法是参照2010年版药典第一部中测金银花中的绿原酸含量的色谱条件，流动相即乙腈－0.4%磷酸 溶液(13∶87)为流动相，此条件下峰形，柱效均可达到药典标准。但在测定醇沉实验项下的绿原酸时，样品峰分离度不佳，故考虑以增大流动相中的水相比例来增大分离度，最后确定流动相为乙腈－0.4%磷酸溶液(10∶90)，在此条件下峰形，柱效均可达到药典标准。

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Study on extraction process of Cangxin Nasal Drops

Gong Peng，Gao Jian
College of Pharmacy，Anhui Traditional Chinese Medicine University，Hefei 230038，China

ObjectiveTo optimize the extracting technique condition of Cangxin Nasal Drops.MethodsThe total quantity of Cycolohexanecaboxylio acid was used as the index for both the processing for water extraction and alcohol precipitation by the orthogonal design.ResultsThe optimum water extraction conditions of Cangxin Nasal Drops were:8 times of water，extracted 2 times and each time lasted 1 hours.The optimum alcohol precipitation conditions of Cangxin Nasal Drops were:the relative density of water extraction was 1.05，and the concentration of the alcohol for precipitate was 70%，settlement for 24 h.ConclusionThe extraction process of Cangxin Nasal Drops is stable and feasible.

Cangxin Nasal Drops;Orthogonal experiments;Cycolohexanecaboxylio acid

10.3969/j.issn.1000 －0399.2015.03.002

2013年安徽省高等教育振兴计划人才项目;2013年安徽省中医药事业发展专项资金项目

230038 合肥 安徽中医药大学药学院(宫鹏)

230022 合肥 安徽医科大学第一附属医院药学部，国家中医药管理局中药化学三级实验室(高建)

高建，gaojianayfy@163.com

(2014－09－05收稿 2014－11－30修回)