口普雷沃菌引起的术后血流感染一例报道

郭建，支云清，何丽华，吕莉，强素凤，吴文娟

［1.上海市东方医院(南院)检验科，上海200123;2.上海市东方医院(南院)妇产科，上海200123］

口普雷沃菌引起的术后血流感染一例报道

郭建1，支云清2，何丽华1，吕莉1，强素凤2，吴文娟1

［1.上海市东方医院(南院)检验科，上海200123;2.上海市东方医院(南院)妇产科，上海200123］

目的报道一例由口普雷沃菌引起的女性患者生殖道脓肿术后血流感染病例。方法无菌方法采集血样本，使用VersaTREK240-10全自动微生物培养检测系统进行培养。血培养报阳后进行涂片镜检、转种培养，分离致病菌，采用法国生物梅里埃公司VITEK 2 Compact全自动细菌分析仪进行鉴定，同时用16S rRNA测序鉴定致病菌。结果培养至48和72 h，血培养仪分别报告左侧、右侧厌氧血培养阳性。VITEK 2 Compact全自动细菌分析仪和16S rRNA测序鉴定结果均为口普雷沃菌，鉴定率分别为96%和99%。结论从上海市东方医院收治的一例女性患者术后血样本中分离出一株口普雷沃菌。

普雷沃菌;普雷沃菌属;血流感染

普雷沃菌属(Prevotella)是从拟杆菌属(Bacteroides)中分出来的部分菌种组成的一个新菌属，分为产色素和不产色素两大类，其模式菌株为产黑色素普雷沃菌(Prevotella melaninogenica)［1］。该菌属主要寄居在正常人体的口腔、女性生殖道等部位，是这些部位正常菌群的重要组成部分。作为临床上较常见的条件致病菌，可引起多部位的内源性感染［2-3］，尤其以口腔感染和女性生殖道感染较为多见。口普雷沃菌(Prevotella oralis)是一种不产色素的专性厌氧菌，常引起脓肿、伤口和软组织等部位感染［4-5］。

近年来，随着诊断技术的不断进步，厌氧菌能够及时被分离和鉴定，使得厌氧菌感染的报道日益增多，但口普雷沃菌感染的相关报道却较少见，尤其是血流感染。2014年5月我们从上海市东方医院南院收治的“右侧阴道壁肿物”患者术后感染的血液样本中分离了一株口普雷沃菌。

材料和方法

一、病例资料

患者女，50岁，已婚育，无特殊病史。2013年底发现右侧阴道壁有一长条状肿物，无压痛，随访未治疗。2014年5月，患者自觉肿物增大，无破溃、无分泌物流出、无腹痛、无发热等。妇科检查显示，右侧阴道壁近阴道口处触及直径约5 cm包块，波动感，无红肿、无压痛。超声检查显示，子宫后位，62 mm×49 mm×56 mm，内膜厚9 mm，子宫前后壁肌层均见低回声。为求进一步诊治以“右侧阴道壁肿物”于2014年5月12日收入上海市东方医院妇产科，行阴道壁肿物切除术。术前以头孢替安1.0 g/d 2次静推预防感染。术中探查发现右侧阴道壁近阴道口处可触及一5 cm× 4 cm×4 cm囊性包块，边界清楚，表面光滑、质软、活动度可，遂行右侧阴道壁肿瘤剥除术。术中所见肿物为囊状，囊壁光滑、完整，囊液黏稠。手术顺利，术中出血约10 m L，未进行输血。阴道壁肿物切片病理结果显示，阴道壁表皮样囊肿。术后，继续以头孢替安1.5 g/d 2次静滴预防感染。

术后第3天患者体温升高至39.0℃，心率85次/min，律齐，各瓣膜听诊区未及病理性杂音，双肺呼吸音清，未及干湿罗音。患者自述会阴肿痛，伴寒战。查体发现手术切口表面红肿，皮温偏高，直径约4 cm。血常规检查显示，白细胞3.4× 109/L、中性粒细胞百分比85.1%，快速C反应蛋白63.0 mg/L。结合相关检查诊断为术后感染。

二、方法

1.血培养及细菌鉴定患者术后第3天高热39.0℃。左右侧肘正中静脉无菌采集静脉血各20 mL，分别注入需氧血培养瓶和厌氧血培养瓶(美国赛默飞世尔科技公司)各2瓶，置VersaTREK240-10全自动微生物培养检测系统(美国赛默飞世尔科技公司)。培养约48～72 h，仪器分别报告左侧、右侧厌氧血培养阳性。在生物安全柜内，取血培养液转种于羊血平板、巧克力平板和麦康凯平板，放置于厌氧袋内于35℃恒温培养箱内培养，并在含有5%CO2的35℃恒温培养箱做耐氧试验。同时取血培养液做革兰染色涂片。

将转种后纯培养细菌调整至2.7～3.3麦氏单位菌液，使用法国生物梅里埃公司VITEK 2 Compact全自动细菌分析仪及其配套的厌氧菌及棒状杆菌鉴定卡(ANC)进行鉴定。使用头孢硝噻吩纸片检测该菌是否产β-内酰胺酶。

2.16S rRNA测序煮沸法制备细菌的基因组DNA，使用16S rRNA测序通用引物16S-F(5＇-AGGAGGTGATCCAACCGCA-3＇)和16S-R(5＇-AACTGGAGGAAGGTGGGGAT-3＇)，经过聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)扩增得到1 392 bp的扩增产物，送上海生工生物工程有限公司进行测序后比对分析。

三、诊治过程

患者术后会阴伤口逐渐红肿，挤压后见多量脓性分泌物流出，同时出现39.0℃高热、寒战，以头孢替安联合甲硝唑进行经验性抗感染治疗。因会阴伤口较深，予以扩创、甲硝唑及碘伏冲洗，用凡士林纱条引流，高锰酸钾坐浴。患者抗感染治疗后第3天查体显示，神清，体温37℃，心率75次/min;外阴伤口表面依然红肿，少许渗出。血培养48 h报危急值:左侧厌氧、右侧厌氧血培养阳性，直接涂片革兰染色查见阴性杆菌，血培养一级报告至临床医生，继续以头孢替安联合甲硝唑进行抗感染治疗。经过抗感染治疗，患者体温逐渐恢复正常，抗感染治疗第5天停止抗感染治疗，继续会阴伤口换药。5月27日患者病情较前明显好转，予出院。嘱门诊会阴伤口换药，不适随诊。

结果

一、实验室检查

白细胞3.4×109/L，中性粒细胞百分比85.1%，C反应蛋白63.0 mg/L，血红蛋白126 g/L，血小板计数177×109/L;梅毒螺旋体特异性抗体阴性;人类免疫缺陷病毒阴性;乳酸脱氢酶235 U/L;人附睾蛋白测定42.49 pmol/L;糖化血红蛋白5.7%。

二、细菌培养与鉴定

报阳的血培养液做革兰染色涂片，显微镜下查见革兰阴性杆菌，两端圆、中间似有空泡，呈多形性。转种平板培养24 h后，厌氧培养血平板上生长菌落为圆形凸起、不透明、灰白色、略干燥，有轻微狭窄的β溶血环，菌落直径约0.5～3.0 mm，需氧培养不生长，为专性厌氧菌。触酶试验阴性、吲哚阴性、β-内酰胺酶检测试验阳性。血培养至第5天，左侧、右侧需氧血培养分别报告阴性结果。厌氧血培养液直接涂片和转种后纯培养菌落的涂片革兰染色均为革兰阴性杆菌，菌体略弯曲，呈多形性，见图1。

图1 革兰染色镜检口普雷沃菌形态(×1 000)

鉴定的生化反应如下:丙氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸芳胺酶(0.038 mg)、β-半乳糖吡喃糖苷酶(0.006 mg)、α-阿拉伯糖苷酶(0.032 4 mg)、七叶苷水解酶(0.022 5 mg)、α-L-岩藻糖苷酶(0.034 2 mg)、磷酸酶(0.05 mg)均为阳性;D-半乳糖(0.3 mg)、亮氨酸芳胺酶(0.023 mg)、ELLMAN(0.03 mg)、苯丙氨酸芳胺酶(0.026 mg)、L-脯氨酸芳胺酶(0.023 mg)、L-吡咯烷酮芳胺酶(0.018 mg)、D-纤维二糖(0.3 mg)、酪氨酸芳胺酶(0.027 9 mg)、D-葡萄糖(0.3 mg)、D-甘露糖(0.3 mg)、D-麦芽糖(0.3 mg)、蔗糖(0.3 mg)、熊果甙(0.187 5 mg)、N-乙酰-D-氨基葡萄糖(0.3 mg)、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷(0.006 mg)、尿素酶(0.15 mg)、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷酸(0.006 mg)、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷(0.006 mg)、β-甘露糖苷酶(0.036 mg)、精氨酸(0.15 mg)、丙酮酸盐(0.15 mg)、麦芽三糖(0.3 mg)、β-D-岩藻糖苷酶(0.034 2 mg)、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-N-乙酰-葡萄糖胺(0.006 mg)、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-甘露糖苷(0.006 mg)、L-阿拉伯糖(0.3 mg)、d-核糖2(0.3 mg)、苯基磷酸盐(0.024 mg)、α-L-阿拉伯糖苷(0.015 mg)、D-木糖(0.3 mg)均为阴性。生物编码为:0040003024100，鉴定值百分率为96%，鉴定信息置信水平为极好。左侧、右侧厌氧血培养结果报告均为口普雷沃菌。

三、16S rRNA测序

测序后得到的序列在GenBank网站进行BLAST比对，比对结果为口普雷沃菌［GenBank accession no.gb|GU561353.1|，99%(1 385/ 1 392)］。

四、头孢硝噻吩纸片检测

头孢硝噻吩纸片试验结果为阳性，提示该菌对β-内酰胺类药物有一定的耐药性［6-7］。普雷沃菌属细菌多数对氨基青霉素、头孢菌素、卡那霉素和万古霉素耐药，而对甲硝唑、氯霉素、青霉素、利福平和新霉素敏感。

讨论

厌氧菌是正常人体内主要的正常菌群，定植于上呼吸道、口腔、肠道和女性生殖道，其中拟杆菌属、普雷沃菌属在口腔、肠道、泌尿道、女性生殖道最多。恶性肿瘤、白血病、糖尿病、长期使用免疫抑制剂、手术创伤、组织破坏均易诱发厌氧菌感染。厌氧菌感染所导致的血流感染高达10%～15%，新生儿厌氧菌血流感染的发病率较为常见。BROOK［6］对儿童普雷沃菌感染的研究发现，有12%的感染源于口普雷沃菌，其中97%为混合感染，38%的普雷沃菌属细菌的β-内酰胺酶试验阳性，提示该菌属对β-内酰胺类抗菌药物耐药［7］。

女性生殖道的厌氧菌感染多为内源性感染，常见的致病菌包括消化链球菌、普雷沃菌属等。妇科术后伤口感染是罕见的并发症，患者血流感染极其严重，多为混合感染。由女性生殖道侵入血液的内源性感染更为少见。我们从上海市东方医院南院收治的“右侧阴道壁肿物”患者术后感染的血液样本中成功分离到一株口普雷沃菌。抗菌药物的选择应该根据细菌培养鉴定结果以及规范的药物敏感性试测结果进行选择性用药。但是厌氧菌的培养和药物敏感性试验需一定条件和时间，临床医生经验性用药较为常见。

常用的抗厌氧菌药物主要包括甲硝唑、β-内酰胺类抗菌药物、大环内酯类、万古霉素等。甲硝唑为杀菌剂，对拟杆菌和大多数厌氧球菌具有极强的抗菌活性。在临床应用中，甲硝唑对腹腔内感染和女性盆腔感染等厌氧菌感染常有良好疗效。BOYANOVA等［8］对192株普雷沃菌的耐药性研究发现，常见的致病菌主要是中间普雷沃菌、产黑色素普雷沃菌和口普雷沃菌，其中青霉素、克林霉素和四环素的耐药率分别为43.2%、10.9%和29.1%，对青霉素耐药菌株的β-内酰胺酶试验均为阳性，青霉素的耐药率有不断增长的趋势。莫西沙星也常用于经验性治疗革兰阴性厌氧菌，但近年欧洲统计数据表明其治疗耐药性也在不断增加。有学者对141株普雷沃菌进行药物敏感性试验，结果表明49%的菌株对莫西沙星非敏感，其中有90%口普雷沃菌为非敏感［9］。JAMAL等［10］对2 557株厌氧菌做了耐药性研究，发现口普雷沃菌占分离的普雷沃菌属菌株的8.5%，哌拉西林-他唑巴坦、亚胺培南和甲硝唑的耐药率均低于5%。妇产科厌氧菌感染应首选青霉素类，其次为甲硝唑、克林霉素，与氨基糖苷类联合用药效果更佳。对β-内酰胺酶的快速检测对临床及时更正、合理用药至关重要，可作为药物敏感性试验结果报告之前的重要提示。本研究经验性治疗选择了甲硝唑并予以头孢替安联合用药，治疗效果较好。

目前，常规的实验室诊断具有很多的局限性，尤其对厌氧菌的分离鉴定以及药物敏感性试验的规范性。相信随着临床微生物诊断技术的不断进步，基于分子技术或质谱分析的厌氧菌诊断方法将为临床诊治带来更大的帮助。

［1］SHAH HN，COLLINS DM.Prevotella，a new genus to include Bacteroides melaninogenicus and related species formerly classified in the genusBacteroides［J］.Int J Syst Bacteriol，1990，40(2):205-208.

［2］MEHMOOD M，JAFFAR NA，NAZIM M，et al.Bacteremic skin and soft tissue infection caused byPrevotella loescheii［J］.BMC Infect Dis，2014，14: 162.

［3］ZHOU H，SHEN Y，SHEN Q，et al.Thoracic empyema caused by Prevotella spp.diagnosed using 16S rDNA sequence analysis［J］.Clin Respir J，2015，9(1):121-124.

［4］GOYAL H，ARORA S，MISHRA S，et al.Vertebral osteomyelitis and epidural abscesses caused byPrevotella oralis:a case report［J］.Braz J Infect Dis，2012，16(6):594-596.

［5］CAHALAN SD，HICK G，ROSSITER A，et al.FatalPrevotella oralismeningitis［J］.J Small Anim Pract，2013，54(3):153-155.

［6］BROOK I.PrevotellaandPorphyromonasinfections in children［J］.J Med Microbiol，1995，42(5):340-347.

［7］MONTAGNER F，JACINTO RC，CORREA SIGNORETTI FG，et al.Beta-lactamic resistance profiles in Porphyromonas，Prevotella，andParvimonasspecies isolated from acute endodontic infections［J］.J Endod，2014，40(3):339-344.

［8］BOYANOVA L，KOLAROV R，GERGOVA G，et al.Trends in antibiotic resistance inPrevotellaspecies from patients of the University Hospital of Maxillofacial Surgery，Sofia，Bulgaria，in 2003-2009［J］.Anaerobe，2010，16(5):489-492.

［9］PAPAPARASKEVAS J，PANTAZATOU A，KATSANDRI A，et al.Moxifloxacin resistance is prevalent amongBacteroidesandPrevotellaspecies in Greece［J］.J Antimicrob Chemother，2008，62(1): 137-141.

［10］JAMAL W，SHAHIN M，ROTIMI VO.Surveillance and trends of antimicrobial resistance among clinical isolates of anaerobes in Kuwait hospitals from 2002 to 2007［J］.Anaerobe，2010，16(1):1-5.

A case of bloodstream infection caused by Prevotella oralis through operation

GUO Jian1，ZHI Yunqing2，HE Lihua1，LÜ Li1，QIANG Sufeng2，WU Wenjuan1.［1.Department of Clinical Laboratory，East Hospital(South)，Shanghai 200123，China;2.Department of Obstetrics and Gynecology，East Hospital(South)，Shanghai 200123，China］

ObjectiveTo report a bloodstream infection case of a female patient after genital tract abscess operation byPrevotella oralis.MethodsBlood samples were collected by aseptic method，and were detected by VersaTREK240-10 automatic microbial detection system.The positive culture blood samples were smeared，inoculated of plates for pure isolates of pathogenic bacteria，identified by VITEK 2 Compact，and confirmed by 16S rRNA sequencing.ResultsTwo bottles of left side and right side of anaerobic blood culture were positive after 48 and 72 h，respectively.The results of VITEK 2 Compact and 16S rRNA sequencing results were bothPrevotella oralis，and the identification rates were 96%and 99%，respectively.ConclusionsA isolate ofPrevotella oralisis identified from a female patient with bloodstream infection in East Hospital.

Prevotella oralis;Prevotella;Bloodstream infection

1673-8640(2015)09-0958-04

R446.5

A

10.3969/j.issn.1673-8640.2015.09.021

2014-12-22)

(本文编辑:姜敏)

上海市浦东新区卫生系统重点专科建设项目(PWZz2013-03);上海市浦东新区卫生系统学科带头人计划(PWRd2012-09)

郭建，男，1983年生，硕士，技师，主要从事病原微生物的诊断及致病机制研究。

吴文娟，联系电话:021-38804518-21169。