发酵饲料对断奶仔猪血液部分免疫指标的影响

李旋亮，张 伟2，芦 刚，李晓峰，张 武，霍 洋

（1.辽宁省盘锦市双台子区动物卫生监督所，辽宁 盘锦 124000；2.辽宁省盘锦市双台子区动物疫病预防控制中心，辽宁 盘锦 124000；3.辽宁省盘锦市双台子区畜牧兽医局，辽宁 盘锦 124000）

发酵饲料对断奶仔猪血液部分免疫指标的影响

李旋亮1，张 伟2，芦 刚1，李晓峰3，张 武1，霍 洋1

（1.辽宁省盘锦市双台子区动物卫生监督所，辽宁 盘锦 124000；2.辽宁省盘锦市双台子区动物疫病预防控制中心，辽宁 盘锦 124000；3.辽宁省盘锦市双台子区畜牧兽医局，辽宁 盘锦 124000）

本试验旨在研究发酵饲料对断奶仔猪肠血液部分指标的影响。将27头平均体重6.83 kg的28日龄断奶仔猪分为3个组。试验I组（正对照组，含基础日粮）、试验Ⅱ组（负对照组，含基础日粮+20%的过夜水）、试验Ⅲ组（负对照组，含基础日粮+菌液+20%过夜水）。试验结果表明，水拌发酵组和菌液发酵组的中期Ⅲ组中IgA的含量分别比Ⅰ组、Ⅱ组提高了30.00%（P＜0.05）、28.13%（P＜0.05）；后期Ⅲ组中IgA的含量分别比Ⅰ组、Ⅱ组提高了24.32%（P＜0.05）、12.20%（P＜0.05）；中期各组间IgG的含量差异显著（P＜0.05），后期Ⅲ组中IgG的含量分别比Ⅰ组、Ⅱ组提高了27.64%（P＜0.05）、21.37%（P＜0.05）；Ⅰ组和Ⅱ组间差异不显著（P＞0.05）。中期和后期各组间IgM的含量差异都不显著（P＞0.05）。在中期Ⅲ组与Ⅰ组的溶菌酶含量差异显著（P＜0.05），而Ⅲ组和Ⅱ组、Ⅱ组和Ⅰ组差异不显著（P＞0.05）；在后期，溶菌酶的含量Ⅲ组与Ⅱ组差异不显著（P＞0.05），分别比Ⅰ组提高了24.95%（P＜0.05）和23.21%（P＜0.05）。中期各组间SOD的含量差异不显著（P＞0.05）；后期SOD的含量Ⅲ组分别比Ⅰ组合Ⅱ组提高了53.79%（P＜0.05），25.35%（P＞0.05）；Ⅱ组和Ⅲ组间差异不显著（P＞0.05）。发酵饲料可改善断奶仔猪血液部分免疫指标，有助于减少仔猪腹泻和增强仔猪对营养物质的消化吸收能力。

发酵饲料；溶菌酶；IGA；断奶仔猪

随着养猪生产集约化程度的不断提高，仔猪早期断奶变得越来越重要。但早期离乳易造成仔猪肠道功能紊乱，各项免疫指标下降，因而造成仔猪消化道消化吸收的面积减少，进而影响生长性能[1]，诱发“仔猪断奶应激综合征”[2]。而发酵饲料以饲料为基础物质，添加有益微生物使其大量繁殖，先进行体外消化，分解饲料中的抗营养物质，当动物采食后，营养物质得到充分吸收，有益微生物又可定植在肠道中，从而改善仔猪的肠道结构，弥补早期断奶带来的缺点。

1 材料与方法

1.1 试验材料 发酵用菌液成分：含有乳酸菌、枯草芽孢杆菌，总均数5×1010CFU/g。菌液和基础日粮均由沈阳爱特杰牧业有限公司提供。

1.2 试验动物和日粮配制 选用28日龄美系大白和长白断奶仔猪27头，按体重相近原则随机分为3个处理，每个处理3个重复，每个重复3头仔猪。试验I组即正对照组（PD），含有基础日粮；试验Ⅱ组即负对照组（ND），含有基础日粮+20%水；试验Ⅲ组为发酵饲料组（ND+P），含基础日粮+20%水+菌液。基础日粮组成见表1。预饲期为7 d，试验期为15 d。仔猪采用分栏饲养，自由采食和饮水。猪舍温度保持在28℃左右。仔猪由沈阳市畜牧兽医科学研究所种猪场提供。

1.3 血样采集 36日龄（中期）、43日龄（末期）时，每个重复选取2头仔猪，用10 mL的一次性注射器，在酒精火焰下无菌操作，前腔静脉采血6～8 mL注射到促凝管中。

1.4 血清中IgA、IgM、IgG的测定 试验中期及结束时，分别给仔猪前腔静脉采血6～8 mL，用免疫比浊仪测定血清中IgG、IgA和IgM的含量。

1.4.1 试验结果IgA的计算

IgA（g/L）=Cs×ΔAT/ΔAS（g/L）

式中：ΔAT以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值

ΔAS以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值

CS校准管中IgA的浓度

1.4.2 试验结果IgM的计算

IgM（g/L）=Cs×ΔAT/ΔAS（g/L）

式中：ΔAT以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值

ΔAS以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值

CS校准管中IgM的浓度

1.4.3 试验结果IgG的计算

IgG（g/L）=Cs×ΔAT/ΔAS（g/L）

式中：ΔAT以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值

ΔAS以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值CS校准管中IgG的浓度

1.5 血清中超氧化物歧化酶（SOD）的测定 血清中SOD的测定原理：通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（O2-），后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下形成紫色，用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中的SOD活力。

高等动物细胞内只有两种SOD即铜锌-SOD（CuZn-SOD）与锰-SOD（Mn-SOD），二者相加等于总SOD（T-SOD）。经样本前处理过的样本中Mn-SOD活力丧失，但Cu-SOD活力不变。

总SOD活力（U/mL）=（对照管吸光度-测定管吸光度）/对照管吸光度÷50%×反应体系的稀释倍数×样本测试前的稀释倍数

1.6 血清中溶菌酶的测定 血清中溶菌酶的测定原理：在一定浓度的混浊菌液中，由于溶菌酶能水解细菌细胞壁上肽聚糖使细菌裂解而浓度降低，透光度增强，故可以根据透光度变化来推测溶菌酶的含量。

计算公式：

溶菌酶含量（μg/mL）=（测定管吸光度T15-空白管吸光度T15）/（标准管吸光度T15-空白管吸光度T15）×标准管浓度（10μg/mL）×样本测试前稀释倍数

1.7 数据分析 将试验所测得的各项数据进行处理，数据整理及作图（使用Excel 2003软件），试验结果用SPSS 13.0统计软件进行方差分析和邓肯氏法进行多重比较。试验数据采用平均值±标准误表示。

表1 日粮组成及营养成分Table1 The com position and nutrient level of basal diet

2 结果与分析

2.1 发酵饲料对断奶仔猪血清中免疫球蛋白的影响 见表2～4和图1～3。

表2和图1结果显示，中期Ⅲ组中IgA的含量分别比Ⅰ组、Ⅱ组提高了30.00%（P＜0.05）、28.13%（P＜0.05）；后期Ⅲ组中IgA的含量分别比Ⅰ组、Ⅱ组提高了24.32%（P＜0.05）、12.20%（P＜0.05）。

表2 发酵饲料对断奶仔猪血清中IgA的含量Table2 Effect o f ferm ented feed on serum IgA of weaned piglets g/L

图1 发酵饲料对断奶仔猪血清中IgA的含量Fig.1 Effect o f ferm ented feed on serum IgA of weaned piglets

表3 发酵饲料对断奶仔猪血清中IgG的含量Table3 Effect o f ferm ented feed on serum IgG of weaned piglets g/L

图2 发酵饲料对断奶仔猪血清中IgG的含量Fig.2 Effect of fermented feed on serum IgG of weaned piglets

表3和图2结果显示，中期各组间IgG的含量差异显著（P＜0.05），后期Ⅲ组中IgG的含量分别比Ⅰ组、Ⅱ组提高了27.64%（P＜0.05）、21.37%（P＜0.05）；Ⅰ组和Ⅱ组间差异不显著（P＞0.05）。

表4 发酵饲料对断奶仔猪血清中IgM的含量Tab le4 Effect of ferm ented feed on serum IgM of weaned piglets g/L

图3 发酵饲料对断奶仔猪血清中IgM的含量Fig.3 Effect o f ferm ented feed on serum IgM o f weaned pig lets

表4和图3结果显示，中期和后期各组间IgM的含量差异都不显著（P＞0.05）。2.2 发酵饲料对断奶仔猪血清中溶菌酶的影响 见表5和图4。

表5 发酵饲料对断奶仔猪血清中溶菌酶的含量Table5 Effect of fermented feed on serum lysozym e of weaned piglets μg/mL

图4 发酵饲料对断奶仔猪血清中溶菌酶的含量Fig.4 Effect of fermented feed on serum lysozyme of weaned piglets

表5和图4结果显示，在中期Ⅲ组与Ⅰ组的溶菌酶含量差异显著（P＜0.05），而Ⅲ组和Ⅱ组、Ⅱ组和Ⅰ组差异不显著（P＞0.05）；在后期，溶菌酶的含量Ⅲ组与Ⅱ组差异不显著（P＞0.05），分别比Ⅰ组提高了24.95%（P＜0.05），23.21%（P＜0.05）。

2.3 对仔猪血清中超氧化物歧化酶（SOD）的影响见表6和图5。

表6 发酵饲料对断奶仔猪血清中SOD的含量Table6 Effect o f ferm ented feed on serum SOD of weaned piglets U/m L

图5 发酵饲料对断奶仔猪血清中SOD的含量Fig.5 Effect of fermented feed on serum SOD of weaned piglets

表6和图5结果显示，中期各组间SOD的含量差异不显著（P＞0.05）；后期SOD的含量Ⅲ组分别比Ⅰ组、Ⅱ组提高了53.79%（P＜0.05）、25.35%（P＞0.05）；Ⅱ组和Ⅲ组间差异不显著（P＞0.05）。

3 讨论

3.1 发酵饲料对断奶仔猪血清中免疫球蛋白的影响 断奶仔猪血清中免疫球蛋白水平反映了其抵抗外界病原菌和病毒侵袭的能力。研究表明[3]，免疫球蛋白IgG、IgA和IgM可以给机体提供局部保护、预防肠道疾病发生、抵抗病原菌的侵袭等。研究发现[4]，仔猪最初的IgG、IgA和IgM来源于初乳，但由于饲养管理和个体差异较大，使其获得量和时间有限，在仔猪阶段，由于免疫器官发育的不完善，主动免疫很受限制，B细胞分泌的免疫球蛋白量非常有限，因此，提高仔猪自身免疫球蛋白水平相当关键。现代养殖中，采取的是早期断奶技术，缺少了母源的免疫将导致仔猪主动免疫停止甚至倒退，另外，断奶后食物和环境上的应激直接改变仔猪的免疫状态[5]，因此采取一定的措施来增强断奶仔猪的免疫机能刻不容缓。近年来，发酵饲料对断奶仔猪血清中免疫机能的报道较少。

本次试验结果显示，饲料经过有益菌发酵之后，IgA、IgM、IgG都有增长的趋势，可能存在以下原因：添加有益菌后使肠道内双歧杆菌增殖，杆菌细胞壁和分泌物可产生大量免疫物质如IgA免疫球蛋白，其阻止细菌附着于宿主的肠黏膜组织的能力是其他免疫球蛋白的7～10倍；乳酸杆菌本身还能对肠道免疫细胞产生强烈的刺激，增加抗体细胞数量，激活巨噬细胞的活力，强化机体免疫体系；芽孢杆菌能促进机体免疫器官、组织的成熟，使这些器官、组织处于高度反应准备状态，T、B-淋巴细胞数量增多，提高机体的体液免疫和细胞免疫水平。以上都可以使免疫组织分泌免疫球蛋白。

3.2 发酵饲料对断奶仔猪血清中溶菌酶的影响 溶菌酶（Lysozyme），即N-乙酰胞壁质酶（N-acetylmurmidase），作用于细菌细胞壁N-乙酰胞壁酸（NAM）与N-乙酰葡萄糖胺（NAG）之间的β-1,4-糖苷键，广泛分布于自然界各种生物体中[6]。溶菌酶是一种水解粘多糖的碱性水解酶，它作为一种存在于机体正常体液及组织中的非特异性免疫因素，具有多种药理作用。Imoto报道[7]，它可与各种诱发炎症的酸性物质结合，使其失活，并能增强机体的免疫力，改善组织基质的粘多糖代谢，从而达到消炎、修复组织、改善胃肠道功能的目的。溶菌酶主要作用于细菌的细胞壁，细菌细胞裂解刺激免疫系统，激发机体内吞噬细胞的噬菌作用。溶菌酶对仔猪腹泻有防治作用，与免疫球蛋白的功能紧密联系。溶菌酶主要来自嗜中性白细胞、单核细胞及吞噬细胞溶酶体中，并能增强补体活性，从而杀灭细菌[8]。在邱伟海等[9]的试验中可知，断奶仔猪饲料中不添加任何抗生素或其他抗腹泻的添加剂，腹泻严重，在仔猪日粮中添加溶菌酶500 g/t基本可以控制腹泻，可以替代抗生素。

本试验结果表明，添加发酵饲料后血清酶浓度增加，分析原因可能是因为：发酵饲料中的乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌有足够的活菌数量和活性[10]，能定植于小肠上皮，调节机体胃肠道微生态平衡，并可促进肠道相关淋巴组织生理活动，使免疫器官发育加快，免疫系统成熟度提高，T和B淋巴细胞数量增加[11]，潘氏细胞的数量也增加了，所以分泌的溶菌酶增多。

以上结果都说明，在添加了乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌发酵后，能明显提高断奶仔猪血清中溶菌酶的含量，饲喂效果优于干粉料。

3.3 发酵饲料对断奶仔猪血清SOD的影响 SOD广泛存在于动植物体内，其主要功能是去除动物体液和组织中代谢所产生的超氧基O2-，O2-具有很强的氧化性，极易破坏细胞核内mRNA，使蛋白质变性；它也可破坏血管内壁细胞，使原本光滑的血管内壁变的粗糙不平，加速胆固醇等脂质沉着等，反应式为：O2-+O2-+H+→H2O+O2。SOD活性提高，可削弱或去除超氧基氧化破坏细胞或细胞内还原性活性成分的作用，保护细胞功能的完整性[12]。

本试验中，乳酸杆菌、芽孢杆菌能刺激动物处于高度“免疫准备状态”，同时刺激免疫器官发育成熟，产生大量生理活性物质，如SOD、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHoPx），刺激机体产生抗体，增强吞噬细胞的作用，从而加强小肠和其他组织对病原物质的抵抗力[13]，从而增强了断奶仔猪的体液免疫功能。另外，乳酸杆菌的添加，降低了肠道的pH，使肠道内的优势菌群双歧杆菌可能大量增殖，增加超氧化物酶的活性，清除自由基。

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Effects of Fermented Feed on Morphology of Small Intestine of Weaned Piglets

Li Xuanl iang1,Zhang Wei2,Lu Gang1,Li Xiaofeng3,Zhang Wu1,Huo Yang1
（1.Bureau of Panjin City Shuangtaizi Dist rict Rural Economy,Liaoning Panj in 124000；2.Panj in City Shuangtaizi animal disease prevention and control center,Liaoning Panjin 124000；3.Panj in City Shuangtaizi Dist rict Animal Husbandry and Veterinary Bureau,Liaoning Panjin 124000）

This experiment was to study fermented feed of weaning piglets intestinal blood part indicators.27 head average weight 6.83 kg of 28 days of age weaning piglets is divided into three processing.Test group I(positive control group,including basic diet),testⅡ group(negative cont rol group,including basal diet+20%overnight water),testⅢ group(negative cont rol group,including basic diet+bacteria l iquid+20%overnight water).Experimental resul ts show that water mixed bacteria fermentation and l iquid fermentation of medium-termⅢ group content of IgA in 30.00%higher than that ofⅠ,Ⅱ group respectively(P＜0.05)and 28.13%(P＜0.05);Content of IgA in the lateⅢ group thanⅠ,Ⅱ group increased by 24.32%(P＜0.05)and 12.20%(P＜0.05);Medium-term IgG levels signi ficant di f ference between groups(P＜0.05),the lateⅢ IgG levels of 27.64%higher than that ofⅠ,Ⅱ group respectively(P＜0.05)and 21.37%(P＜0.05);Ⅰ group andⅡ no signi ficant dif ference between groups(P＞0.05).Middle and late IgM content were not signi ficant di f ference between groups(P＞0.05).In the medium termⅢ andⅠ group of lysozyme content signi ficant di f ference(P＜0.05),whi leⅢ andⅡ group,Ⅱ andⅠ group no signi f icant di f ference (P＞0.05).In the later,the content of lysozymeⅢ andⅡ group no signif icant di f ference(P＞0.05),and 24.95%higher than that ofⅠ group respectively(P＜0.05)and 23.21%(P＜0.05).Mediumterm SOD content di f ferences between groups was not signif icant(P＞0.05).Post the content of SODⅢ group was 53.79%higher than that ofⅠ combinationⅡ group respectively(P＜0.05)and 25.35% (P＞0.05);Ⅱ group andⅢ no signi ficant di f ference between groups(P＞0.05).Fermented feed can improve weaned piglets part blood immune index,help reduce diarrhea piglets and enhance piglets to the digestion and absorption of the abil ity.

Fermented feed;Lysozyme;IGA;Weaned piglets

S828.5

1672-9692(2015)07-0001-07

2015-05-30

李旋亮（1982-），男，硕士研究生，主要从事饲料添加剂对仔猪生产性能影响的研究。