猪圆环病毒2型自然感染条件下的高致病猪蓝耳病免疫效果调查

王克才，李祝田，郑洪玲，于长泳，杨国丽，张 俪，安鹏威，李红魁

（1.辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁 沈阳 110164；2.辽宁省瓦房店市动物卫生监督所，辽宁 瓦房店 116300；3.辽宁省铁岭市畜产品安全检测站，辽宁 铁岭 112000；4.辽宁省畜牧业经济管理站，辽宁 沈阳 110032）

猪圆环病毒2型自然感染条件下的高致病猪蓝耳病免疫效果调查

王克才1，李祝田2，郑洪玲1，于长泳1，杨国丽1，张 俪3，安鹏威4，李红魁1

（1.辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁 沈阳 110164；2.辽宁省瓦房店市动物卫生监督所，辽宁 瓦房店 116300；3.辽宁省铁岭市畜产品安全检测站，辽宁 铁岭 112000；4.辽宁省畜牧业经济管理站，辽宁 沈阳 110032）

田间状态下对可能遭受猪圆环病毒2型自然感染的10窝99头仔猪，于断奶后30日龄进行高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫，并分别于免疫前的28日龄、免疫后的56日龄和94日龄采血，进行猪圆环病毒2型和高致病性猪蓝耳病的病毒核酸和抗体检测。结果显示，猪群圆环病毒2型病毒核酸和抗体阳性检出率，3次分别为3.0%和14.1%、13.1%和96.0%、98.0%和98.0%；高致病性猪蓝耳病病毒核酸和抗体阳性检出率，3次分别为0和97.0%、10.1%和61.6%、30.3%和94.9%。结果显示，断奶仔猪群在受到猪圆环病毒2型自然感染状态下，进行高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫后26 d时，抗体合格率未达到国家规定的70%标准，免疫后64 d时，抗体合格率明显高于70%。

猪圆环病毒2型；自然感染；高致病性猪蓝耳病；免疫；效果

猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV 2）是现代养猪业十分重要的免疫抑制性病原之一。PCV2感染所引起的断奶仔猪多系统衰竭综合症（PMWS）、繁殖障碍（流产）、猪皮炎肾病综合征（PDNS）、呼吸道病综合征（PRDC）、增生性和坏死性肺炎（PNP）和先天性颤抖等，统称为猪圆环病毒病（PVCD）或猪圆环病毒相关性疾病（PVCAD）。由PCV 2感染所引起的断奶仔猪多系统衰竭症（PMWS），流行面广、危害性大，而且可能导致其他疫病免疫失败，严重影响养猪业健康发展。为探究田间状态下猪圆环病毒2型自然感染猪群进行高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫的效果如何，本文开展了本次调查，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验猪 试验选择具有猪圆环病毒2型感染病史的某种猪场进行。由该场确定2013年6月3日～5日出生的10窝105头仔猪群，作为特定的试验调查群体。

1.1.2 免疫用的疫苗 高致病性猪蓝耳病活疫苗（JXA1-R株），购自国内某生物制品公司（批号：1211027-1）。

1.1.3 主要检测试剂 猪圆环病毒2型抗体ELISA检测试剂盒，购自北京世纪元亨生物技术公司（批号：PCV20130508E）。

猪2型圆环病毒核酸荧光PCR检测试剂盒，购自达安基因生物技术公司（批号：2013001、2013002）。

高致病性猪蓝耳病病毒核酸荧光RT-PCR检测试剂盒，购自北京生科尚仪生物技术公司（批号：20130501）。

猪繁殖与呼吸综合征抗体间接ELISA检测试剂盒，购自北京天之泰生物技术公司（法国LSI公司生产，批号：5-VETPRA-026、5-VETPRA-027）。

1.2 试验方法

1.2.1 试验猪处理 选择该场同期分娩的10窝105头仔猪作为试验猪，实行试验前、后对照的方法。为便于试验，出生后分别打上不同颜色的耳标号，与场内同期未参加试验的母猪和仔猪同舍饲养,28日龄断奶。试验猪标记具体情况见表1。

1.2.2 参试猪免疫及采样检测程序

1.2.2.1 免疫程序 试验组仔猪达30日龄时，进行高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫，免疫剂量按疫苗说明书要求，每头仔猪颈部肌肉1 mL（1头份）,共免疫99头。

1.2.2.2 采样程序 所有参试的仔猪分别于28、56和94日龄逐头采血分离血清至少1 mL∕头，送辽宁省动物疫病预防控制中心实验室分别进行猪圆环病毒2型ELISA病毒核酸和抗体、高致病性猪蓝耳病病毒核酸和抗体4项检测。

1.2.3 临床观测指标 试验期间按该场常规要求实施生物安全及饲养管理措施，每日观察猪群精神状态、采食状况是否正常，生长发育状况是否良好，一旦发现临床发病猪，及时隔离、采样检测。

主要临床监测指标：28日龄断奶成活率及个体平均体重，1～3月龄期间发病及死亡数，3月龄时成活率及个体平均体重。

1.2.4 实验室检测程序 依据猪圆环病毒2型荧光PCR试剂盒给出的检测方法，分别对采集的猪血清样品进行荧光PCR检测和结果判定。试验成立条件：阳性对照Ct值≤28，阴性对照Ct值应等于none。样品的荧光PCR扩增的Ct值≤35，判定为核酸阳性，否则，均判为阴性。

依据猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒给出的检测方法，分别对采集的猪血清样品进行ELISA抗体检测和结果判定。试验成立条件：阴性对照平均OD值≤0.15，阳性对照平均OD值≥0.60。计算该次试验的临界OD值=阳性对照平均OD值×0.25，样品OD值≥临界OD值时，样品抗体判为阳性，否则，判为阴性。

依据高致病性猪蓝耳病病毒荧光RT-PCR试剂盒给出的检测方法，分别对采集的猪血清样品进行荧光RT-PCR检测和结果判定。试验成立条件：阳性对照Ct值≤28，阴性对照Ct值应等于none。样品的荧光PCR扩增的Ct值≤30，判定为核酸阳性，否则，均判为阴性。

依据猪繁殖与呼吸综合征抗体间接ELISA抗体检测试剂盒给出的检测方法，分别对采集的猪血清样品进行ELISA抗体检测和结果判定。试验成立条件：样品的IRPC值＞20时，判为抗体阳性，IRPC值≤20时，判为抗体阴性。

2 结果与分析

2.1 临床观测结果

2.1.1 10窝初生仔数共105头，28日龄前死亡6头，采集病料样品进行圆环病毒2型病毒核酸和高致病性猪蓝耳病病毒核酸检测，结果检出圆环病毒2型病毒核酸和高致病性猪蓝耳病病毒核酸均为阳性的1头，高致病性猪蓝耳病病毒核酸阳性的1头，其他均为阴性。

2.1.2 试验猪断奶时99头称重总重量为735 kg，平均个体重为7.42 kg，死亡率为2.86%。

2.1.3 试验猪达3月龄时，称重总重量为4 062 kg，平均个体重为41.03 kg，临床观察有10头猪发病，主要表现为精神及采食不佳，体温升高，生长发育不良，渐进性消瘦，背毛粗乱无光，咳喘、顽固性腹泻、关节肿大等症状，未发生死亡。主要临床监测项目及结果见表2。

表1 试验分组明细表Table1 Experimental grouping list

2.2 实验室检测结果

2.2.1 试验猪28日龄断奶且进行高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫前，猪圆环病毒2型病毒核酸阳性检出率为3.0%，抗体阳性率为14.1%；高致病性猪蓝耳病病毒核酸无阳性检出，抗体阳性率为97.0%。检测结果统计详见表3。

表2 临床观测结果统计表Table2 Statistics o f clinical m onitoring result

表3 实验室检测结果统计表Table3 statistical stable of test result in laboratory

2.2.2 试验猪56日龄且进行高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫26 d后，猪圆环病毒2型病毒核酸阳性检出率为13.0%，猪圆环病毒2型抗体阳性率为96.0%；高致病性猪蓝耳病病毒核酸阳性检出率为10.1%，抗体阳性率为61.6%。检测结果统计详见表3。

2.2.3 试验猪94日龄且进行高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫64 d后，猪圆环病毒2型病毒核酸阳性检出率为98.0%，抗体阳性率为98.0%；高致病性猪蓝耳病病毒核酸阳性检出率为30.3%，抗体阳性率为94.9%。检测结果统计详见表3。

2.3 结果分析

2.3.1 仔猪在28日龄断奶前，一是临床上表现为各种原因导致的死亡率较高（5.71%）,但发生猪圆环病毒2型和高致病性猪蓝耳病感染的比率较低（1.90%）,因此,仔猪的整体生长发育水平基本正常。二是通过28日龄检测发现，2种病毒核酸的阳性检出率很低（3.0%和0）,猪圆环病毒2型母源抗体阳性率较低（14.1%）,高致病性猪蓝耳病抗体阳性率很高（97.0%）,表现为三低一高。说明高致病性猪蓝耳病母源抗体水平较高且在猪体内维持时间较长，猪圆环病毒2型母源抗体在仔猪体内维持时间较短，说明这一时期的仔猪处于猪圆环病毒2型和高致病性猪蓝耳病病毒感染的低风险时期。

2.3.2 仔猪断奶后并于30日龄进行高致病性猪蓝耳病免疫之后的2个月内，通过临床观测和实验室4个项目的检测，所有指标均显示上升态势。一是临床上表现为虽然整体生长水平良好，但群体疑似多系统衰竭综合征（PMWS）发病率较高（10.10%）。二是检测的2种病毒核酸阳性检出率和2种病毒抗体均呈明显上升态势，圆环病毒2型病毒核酸阳性检出率3次分别为3.0%、13.1%和98.0%，与此同期，高致病性猪蓝耳病病毒核酸阳性检出率分别为0.0%、10.1%和30.3%，猪圆环病毒2型抗体阳性率分别为14.1%、96.0%和98.0%，猪繁殖与呼吸综合征抗体阳性率分别为97.0%（母源抗体）、61.6%和94.9%。说明猪群进行高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫后，进入猪圆环病毒2型感染活跃期时，高致病性猪蓝耳病疫苗毒的阳性检出率呈上升态势，相应的抗体阳转率也从61.6%上升至94.9%。

3 讨论与小结

3.1 讨论 猪圆环病毒2型（PCV-2）是现阶段养猪业普遍关注的免疫抑制性疫病。该病的发生及流行具有普遍性、顽固性和严重性。关于猪圆环病毒2型感染后引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、呼吸道病综合征（PRDC）等免疫抑制性综合征的报道文献资料很多[1-2]。其中，有报道证实引起此类综合征的主要元凶是猪圆环病毒2型与猪蓝耳病病毒的混合或协同感染[3]；有报道证实猪关于圆环病毒2型和高致病性猪蓝耳病病毒在猪体内均存在病毒抗原与抗体共存现象[4-5]；还有报道关于高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫后检测疫苗毒持续期一般为6周[6]。本次田间调查高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫后2个月还能检测到30%的病毒核酸，说明检出的病毒核酸主要是疫苗毒，如果如此，那么是否可以断定在猪圆环病毒2型自然感染条件下，进行高致病性猪蓝耳病免疫后，其持续带毒现象会明显延长。至于猪圆环病毒2型感染后对高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫产生何种影响以及程度如何，将有待于进一步开展试验研究验证。

3.2 小结 本次调查初步结论是：断奶仔猪在受到猪圆环病毒2型自然感染条件下，进行高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫后26 d时，抗体合格率未达到国家规定的70%标准，免疫后64 d时，抗体合格率明显高于70%。

[1][美]斯特劳（Barbara E.St raw）等主编；赵德明等主译.猪病学（第9版）[M].北京：中国农业大学出版社，2008.2：313-318，423-446.

[2]李树根,孙颖杰.猪繁殖与呼吸综合症（PRRS）[M].北京：中国农业大学出版社，1999.

[3]任静柏，郜博.引种导致猪圆环病毒和蓝耳病混合感染的诊断与防制[J].农业科学，2009（10）：137-138.

[4]王克才,段亚良,王军等.猪圆环病毒2型灭活苗免疫效果试验[J].现代畜牧兽医，2014（9）：31-36.

[5]丁静,王克才.高致病性猪蓝耳病感染与免疫特性研究初报[J].现代畜牧兽医，2010（6）：77-79.

[6]杨本勇,曹东，姜凤华等.高致病性猪繁殖与呼吸综合症活疫苗（JXA1-R）免疫后在血清中存在时间的报告[J].现代畜牧兽医，2014（9）：1-4.

Investigation immunity effective of the porcine circovirus type 2 of the highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome in natural infection

Wang Kecai1,Li Zhutian2,Zheng Hongl ing1,Yu Changyong,Yang Guol i1, Zhang Li3,An Pengwei4,Li Hongkui1
(1.Animal Epidemic Diseases Control and Prevention Center of Liaoning Province,Liaoning Shenyang 110164; 2.Animal Sanitary cont rol station of Wafangdian City,Liaoning Wafangdian 116300; 3.security detection station of livestock products of Tieling City,Liaoning Tiel ing 112000; 4.Animal husbandry economic management stations in l iaoning province，Liaoning Shenyang 110032)

99 piglets f rom 10 l itters which were probably infected with porcine cirvirus type 2 were immunized with the pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome activated vaccine on the 30th day af ter bir th.Blood were col lected at the 28th,56thand the 94thdays af ter bir th to detects antibody and viral nucleic acid of PCV2 and PRRS2.The test resul ts that,the viral nucleic acid and antibody positive detection rate di f ference were 3.0%and 14.1%、13.1%and 96.0%、98.0% and 98.0%of PCV2,0 and 97.0%、10.1%and 61.6%、30.3%and 94.9%of HP-PRRS.The resul ts suggested that the antibody qual i fied rate didn’t achieve 70%that was formulary count ry af ter immunity HPPRRS S l ive vaccine 26 days,it obviously top 70%af ter immunity HP-PRRS l ive vaccine 64 days when the weaning swinery was ef fected porcine cirvirus type 2 in natural to under take,

Porcine circovirus type 2;Natural ef fective;HP-PRRS;Immunity;Ef fect

S852.65

1672-9692(2015)07-0035-05

2015-04-26

王克才（1965-），男，汉族，专科，高级兽医师，主要从事动物疫病防控等工作。