吴茱萸碱超微粉-F68 固体分散体溶出研究

杨红梅，盛 蓉，宋 英，曹 蕾，唐安玲

1成都中医药大学，成都 610075;2 成都中医药大学附属医院，成都 610072

吴茱萸碱(Evodiamine，EVO)是中药吴茱萸的主要活性成分［1］。研究表明EVO 具有抗炎、镇痛、降血尿酸的作用［2］，但EVO 属于生物药剂学分类系统(BCS)二类的难溶性药物，溶出速率是制约其生物利用度的关键因素［3］。固体分散体是提高难溶性药物的溶出速度，改善难溶性药物生物利用度［4-5］的有效方法之一。本实验制备了吴茱萸碱分散体并对其体外溶出进行了相关研究。

1 仪器与材料

1.1 仪器

HP1100 型高效液相色谱仪(美国惠普)，四元泵，DAD 检测器，HP 化学工作站;色谱柱:依利特C18(150 mm×4.6 mm，5 μm);BP211D 型分析天平(德国赛多利斯);DLXW-S-8 电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂);JB-3 磁力搅拌器(上海雷磁仪器有限公司)。

1.2 材料

EVO 对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号110802-200606);EVO 原料药(西安冠宇生物技术有限公司，批号GY20070603，纯度≥98%);泊洛沙姆188(F68，德国巴斯夫(中国)有限公司)，批号03000242876);十二烷基硫酸钠(SDS，汕头市西陇化工厂，批号090619);辅料均为药用标准。

2 实验方法

2.1 EVO 固体分散体的制备

取F68 过80 目筛90 g 与10 g EVO 超微粉混合均匀，于水浴锅上(80 ℃)研磨搅拌30 min，立即倒入预冷的不锈钢盘上，迅速放置于-20 ℃冰柜中，冷却固化4 h，取出放置干燥器中平衡24～48 h，粉碎过筛(60 目)，并同法制备EVO 原料药-F68 固体分散体备用。另取F68 过80 目筛45 g，与5 g 的EVO超微粉混合均匀，得EVO 超微粉与F681∶9 的物理混合物，于干燥器中备用。

2.2 EVO 不同处理方法水中平衡溶解度的测定

研究表明，吴茱萸碱在不同pH 条件的溶出介质中，溶出度较小且无显著差异［6］，故该试验只考察其在水中的平衡溶解度。取过量的EVO 原料药、EVO 超微粉、EVO 原料药-F68 固体分散体、EVO 超微粉-F68 固体分散体各2 份，均置于250 mL 的具塞锥形瓶中，分别加入100 mL 水，置37±0.5 ℃恒温水浴中，磁力搅拌24 h 后吸取上清液，经微孔滤膜滤过(0.45 μm)，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 EVO 不同处理方法溶出度的测定

分别取EVO 原料药、EVO 超微粉约10 mg，EVO 超微粉-F68 固体分散体、EVO 超微粉-F68 物理混合物约50 mg，精密称定，参照《中国药典》2010年版二部附录XC 溶出度测定法第二法(浆法)项下的有关规定进行测定。以1% SDS 溶液为溶出介质，转速为100 r/min，放入时开始计时，分别于3、5、10、15、30、45、60 min 时，取溶液10 mL(同时补液10 mL)，微孔滤膜(0.45 μm)滤过，精密吸取滤液5 mL，用甲醇定容至10 mL 量瓶，微孔滤膜(0.45 μm)滤过，精密吸取续滤液20 μL 进样，按外标法计算溶出度。

2.4 EVO 超微粉-F68 固体分散体配比考察

分别以EVO 超微粉与F68 按1∶2、1∶4、1∶6、1∶9 按“2.1”项方法制备样品。

供试品溶液的制备 参照《中国药典》2010年版二部附录XC 项下“溶出度测定法”的浆法测定EVO 固体分散物的溶出度。溶出介质为1% SDS，体积为900 mL，温度为37±0.5 ℃，转速为100 rpm。取EVO 固体分散物适量(约相当于EVO10 mg)，精密称定，放入时开始计时，于45 min 定位吸取溶液10 mL，吸取液微孔滤膜(0.45 μm)滤过，精密吸取滤液5 mL，用甲醇定容至10 mL，微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.5 固体分散体含量测定

取EVO 超微粉-F68 固体分散体(1 ∶4)约50 mg，共两份，置100 mL 量瓶中，加甲醇适量，超声处理30 min，放冷，定容至刻度，微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密吸取5 μL，以色谱柱:依利特柱C18(150 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈∶0.1% 磷酸(含2% 的四氢呋喃)(38∶62);柱温:30 ℃，检测波长:225 nm 色谱条件测定EVO 含量［7-9］。

3 结果与讨论

3.1 不同处理方法对EVO 在水中平衡溶解度的影响

EVO 原料药和超微粉在水中几乎不溶，EVO 超微粉-F68 固体分散体对EVO 水中溶解度提高最大，高出EVO 原料药-固体分散体和EVO 超微粉-F68物理混合物约3～5 倍。由此可见，固体分散体能使药物保持高度分散状态，加快药物的溶出;F68 是固体分散体中使EVO 增加溶出的主要因素。测定结果见表1。

表1 不同样品水中的平衡溶解度测定结果(n=2)Table 1 Determination results of equilibrium solubility in water of different samples (n=2)

3.2 不同处理方法对EVO 溶出度的影响

EVO 超微粉-F68 固体分散体与其余三个样品的溶出行为有差异;EVO 超微粉-F68 物理混合物和EVO 原料药溶出行为有差异;EVO 原料药和EVO超微粉溶出行为相似，EVO 超微粉-F68 物理混合物和EVO 超微粉溶出行为相似。F68 的加入能促进原料药EVO 的体外溶出，F68 与EVO 超微粉形成固体分散体之后，溶出度大为改观，在1%SDS 溶液溶出度提高到60%以上。上述四个样品在45 min时溶出已不再变化，EVO 超微粉-F68 固体分散体60 min 累积溶出度为65%，较EVO 原料药提高近60倍。根据溶出度结果绘制溶出曲线，结果如图1。

图1 EVO 不同处理方法的溶出曲线图Fig.1 Dissolution curves of EVO with different processing methods

参考《口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》，采用非模型依赖的f2相似因子法对溶出曲线进行比较。相似因子(f2)是衡量两条溶出曲线相似度的参数，计算公式如下:

n:试验点数;Rt、Tt:t 时刻参比制剂和被试制剂的释放度;f2值得大小可用来表征被试制剂与参比制剂释药之间的近似程度。若两条曲线完全相同，f2值为100;随着两条曲线近似程度的降低，f2值趋近于0。一般认为，50≤f2≤100，制剂具有相似的体外释放度。

分别计算EVO 超微粉-F68 固体分散体、EVO原料药、EVO 超微粉、EVO 超微粉-F68 物理混合物四者的f2值，结果见表2。

表2 f2相似因子比较Table 2 Comparison of similarity factor

3.3 溶出度的测定

精密吸取上述对照品溶液(0.0345 mg/mL)和“2.4”项供试品溶液各20 μL，按色谱条件注入液相色谱仪，按外标法计算溶出度，结果见表3。

表3 固体分散体辅料比例的筛选Table 3 Screening of solid dispersion excipient

结果表明，EVO 与F68 比例为1∶4 的溶出度与1∶9 的溶出度差异不大，因此为减少辅料用量，确定EVO 与F68 按1∶4 的比例，采用熔融法制备固体分散体。

3.4 EVO 超微粉-F68 固体分散体(1∶4)含量测定

实验结果表明，EVO 含量分别为97.695%、98.807%(图2)。固体分散体技术对药物的含量无影响。

3.5 讨论

固体分散体也存在一定的局限性，在固体分散体中，药物可达到高度分散的状态，但其分散状态的稳定性不好，长时间贮存往往会发生老化现象，应考察其在高温强光下的稳定性，为以后的储存条件提供依据。

经X-衍射鉴定显示EVO 原料药在7.760°、8.694°、18.480°、26.107°有的特异性的晶体衍射峰;在19.217°和23.360°有泊洛沙姆188 的特征衍射峰;在固体分散体中仍可见F68 衍射峰和EVO 衍射峰，EVO 特征衍射峰峰强度大大减小，说明制备的载药固体分散体并未改变EVO 的晶体特征，绝大部分药物以微晶形式分散于载体中;红外图谱显示EVO 没有发生太大的变化，可以认为EVO 在F68固体分散体中没有发生化学变化;扫描电镜结果显示已无可见吴茱萸碱晶体存在于载体中，推测吴茱萸碱以微晶或无定形状态存在于载体中。故此固体分散体技术适于吴茱萸碱的工艺成型.

图2 EVO 对照品(A)、EVO 固体分散体阴性样品(B)及EVO 分散体样品(C)的HPLC 色谱图Fig.2 HPLC chromatograms of EVO control (A)，negative control (B)and EVO dispersion sample (C)

考虑到生物碱和酸生成盐能大大增加其溶出度，我们在前期实验中考察了吴茱萸碱和不同酸制备成盐的溶出，实验结果表明:吴茱萸碱溶出度较小且无显著性差异。从结构上分析，吴茱萸碱属于吲哚喹宁类生物碱，氮原子上的孤对电子能接受氢离子而表现碱性，但吸电子基团的诱导效应及邻近苯环p-π 共轭效应均能降低氮原子的电荷密度，碱性降低，这可能是吴茱萸碱成盐溶出依然较小的原因;同时我们也考察了把吴茱萸碱制备成更小粒径的粉末，加入润滑剂等辅料压片及调节不同比例的辅料量压片，结果显示吴茱萸碱的溶出效果依然没有改善;最终选用强亲水性载体聚乙二醇类(PEG)、聚维酮类(PVP)、泊洛沙姆(pluronic F68)制备成分散片，其中以泊洛沙姆最优。

4 结论

试验分别考察了不同处理方法对EVO 在水中平衡溶解度的影响，结果显示以泊洛沙姆188(F68)为载体，熔融法制备吴茱萸碱固体分散体能显著提高吴茱萸碱的溶出，也使用了X-衍射、红外图谱、扫描电镜法测得所制备的分散体不影响EVO 药物的含量和形态，该制备方法稳定可行，为工业化大生产提供依据。

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