氟尿嘧啶微乳原位凝胶的溶出度测定

王璐璐，陈少华，相莉，郑稳生

(中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所、药物传输技术及新型制剂北京市重点实验室，北京 100050)

氟尿嘧啶微乳原位凝胶的溶出度测定

王璐璐，陈少华，相莉，郑稳生

(中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所、药物传输技术及新型制剂北京市重点实验室，北京 100050)

目的 建立氟尿嘧啶微乳原位凝胶体外溶出度的测定方法。方法 采用紫外分光光度法，按照横置旋转渗透池系统，在溶出介质pH7.2磷酸盐缓冲液中，测定氟尿嘧啶微乳原位凝胶体外溶出度。结果 加入处方量80%，100%，120%氟尿嘧啶加样平均回收率分别为98.42%，97.56%，99.34%；RSD分别为1.22%，1.86%，0.49%。氟尿嘧啶在0.5～16.0 μg·mL-1范围内药物浓度和紫外吸光度呈良好的线性关系。使用该实验确定的方法，氟尿嘧啶微乳原位凝胶具有良好的缓释效果。结论 该方法简便易行、准确可靠，且重复性好，可用于氟尿嘧啶微乳原位凝胶体外溶出度的测定。

氟尿嘧啶；微乳原位凝胶；溶出度

结直肠癌发病率日益上升，已高居恶性肿瘤的第三位，并有赶超胃癌的趋势。文献报道结直肠癌患者好发年龄约45岁，<40岁者占35%，<30岁者占12%。氟尿嘧啶(fluorouracil，5-FU)是治疗结直肠癌基本用药，现有给药方式为注射及口服。5-FU用药的安全范围较窄，其主要不良反应为骨髓抑制、口腔炎、消化性溃疡和其他胃肠道反应。口服产生的骨髓抑制作用较静脉注射持久。静脉注射和静脉滴注的给药途径较好，但是注射部位易发生静脉炎，少数患者发生神经系统和心脏毒性，以及维生素B1缺乏症，长期动脉插管给药，会引起动脉血栓[1]。5-FU直肠给药可以降低系统毒性，并且药物直接接触癌症部位，病灶部位浓度高[2-5]。因此，笔者研制了5-FU微乳原位凝胶以增加药物的吸收、减少药物刺激性。本实验建立了测定5-FU微乳原位凝胶溶出度的方法，并采用DIBBERN等[6]提出的横置旋转渗透池系统考察了药物的释放。

1 仪器与试药

1.1 仪器 MA260S型电子分析天平(上海第二天平仪器厂，感量0.01 mg)，HP8453紫外分光光度计(美国惠普公司)，RCZ-8A智能溶出仪(天津大学精密仪器厂)。

1.2 试药 5-FU对照品(USP Rockville.MD.LOT，No.1097658，含量：99.99%)，5-FU微乳原位凝胶(中国医学科学院制备，批号：130514，130515，130516)，磷酸二氢钾、盐酸、氢氧化钠均为分析纯，实验室用纯净水为重蒸去离子水。

2 方法与结果

2.1 5-FU微乳原位凝胶的制备 5-FU微乳制备：将大豆油、司盘80，聚山梨酯80 和1，2-丙二醇按(22：5：1：6)的比例混合，在45 ℃，2 000 r·min-1的条件下持续搅拌，逐滴加入1.5% 5-FU溶液33 mL，继续搅拌10 min，得到白色微乳。5-FU微乳原位凝胶制备：取含有一定量泊洛沙姆407和黏附剂卡波姆的溶液，冰箱中放置过夜，得到澄清溶液，4 ℃，700 r·min-1持续搅拌，与一定量第一步制得的5-FU微乳混合，继续搅拌10 min，缓慢升温至室温，得到白色凝胶。

2.2 分析方法的验证

2.2.1 各组分吸收光谱 5-FU原料：以人工肠液(见《中华人民共和国药典》2010年版，二部附录，pH7.2)为溶剂，所配浓度15 μg·mL-1。

空白微乳原位凝胶：制备不含药物的微乳原位凝胶，方法同5-FU微乳原位凝胶，10 ℃放置成液体，以人工肠液稀释至适宜浓度，取续滤液。将二者同时在波长200～500 nm范围进行扫描。结果表明，微乳原位凝胶辅料在265 nm处吸光度与药物比较可略去不计。

2.2.2 线性回归实验 精密称取5-FU标准品适量，用人工肠液(pH7.2)配成0.5，1.0，4.0，8.0，12.0，16.0 μg·mL-1的浓度系列，于265 nm处测定吸光度(A)以浓度(C，μg·mL-1)对吸收度(A)作标准曲线，线性回归方程为A=0.051 3C+0.130 8(r=0.999 6，n=5)。结果表明，5-FU在0.5～16.0 μg·mL-1范围内，浓度与吸光度呈良好的线性关系。

2.2.3 加样回收率实验 按处方比例称取辅料，分别加入该处方量对应的80%，100%，120%5-FU对照品，加溶出介质溶解并分别稀释。结果见表1，表明该方法准确性良好。

2.2.4 精密度实验 取对照品，照“2.2.1”项方法配制对照品溶液，在265 nm波长下测定A，分别连续测定6次，连续测定3 d，按吸光度计算RSD为0.57%，日间精密度RSD为0.71%，结果表明该方法精密度较好。

表1 5-FU加样回收率实验结果

2.2.5 稳定性实验 取对照品溶液，分别于0，2，4，8和16 h在265 nm波长下测定A值，按5-FU吸光度计算得RSD为0.84%。结果表明，5-FU溶液在16 h内稳定。

2.3 5-FU微乳原位凝胶溶出度测定

2.3.1 测定装置 采用德国DIBBERN等[6]提出的横置旋转渗透池系统，整个运动过程相对比较平稳、缓慢，可产生类似于肠蠕动的效果。在渗透池两侧均有一片桨叶与渗透池同步运转，可满足释放出的活性成分能迅速地扩散到整个吸收液中，并使其均匀。

2.3.2 测定方法 采用横置旋转渗透池系统，将渗透池浸入900 mL恒温至(37.0±0.5)℃的人工肠液中(pH7.2)。分别于10，30 min，1，2，4，6，8，12 h精密量取释放液10 mL置试管中(后立即补充同温人工肠液10 mL)，再于试管内精密量取释放液2 mL，置25 mL量瓶，加人工肠液稀释至刻度，于265 nm处测定吸光度(A)，由标准回归曲线方程中求出5-FU浓度，再计算出各个不同时间的累积溶出率(%)，以时间为横坐标，累积溶出率为纵坐标，绘制体外释放曲线[7]。结果见图1，表明5-FU微乳凝胶具有良好的缓释效果，可延缓释放至10 h，经DD Solver(1.0版)软件拟合，药物释放符合 Madoid-Banakar 缓释模型。

3 讨论

本研究将脂溶性差的5-FU制成油包水(W/O)型微乳并进一步将其制成温度敏感原位凝胶，此制剂在室温状态下为固态，稳定性好，使用前10 ℃短时间冷藏可恢复成自由流动的液体状态，使用后，在体温条件下转变成具有一定凝胶强度和生物粘附力的固体凝胶，其中携带的药物微乳增加了药物跨生物膜吸收效率、延缓药物的释放、减少药物对直肠黏膜的刺激性，因此可以提高药物的生物利用度，降低不良反应，提高患者使用的依从性。

图1 5-FU微乳原位凝胶体外溶出曲线

根据《中华人民共国国药典》2010年版二部中5-FU含量测定项目中规定5-FU测定浓度为10 μg·mL-1，故标准曲线制定中5-FU标准品的浓度配制在0.5～16.0 μg·mL-1范围。

本实验中，随着渗透池的转动凝胶几乎平铺在半透膜上，与缓冲液有良好的交换，与直肠给药药物释放状态相似，适合于直肠给药剂型溶出度的测定。

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2014-03-27

2014-07-27

王璐璐(1973-)，女，上海人，副研究员，硕士，从事新剂型及制剂新技术研究。电话：(0)13621284066，E-mail：wanglulu@imm.ac.cn。

R979.1；R944

B

1004-0781(2015)09-1213-02

10.3870/j.issn.1004-0781.2015.09.026