HPLC法测定活血益肾散中丹参酮ⅡA的含量*

余志刚杨晓茂程培秀周小力李 建张 彬

（1.四川省雅安市人民医院，四川 雅安 625000；2.四川省雅安市食品药品检验所，四川 雅安625000；3.雅安三九药业有限公司，四川 雅安 625000）

·研究报告·

HPLC法测定活血益肾散中丹参酮ⅡA的含量*

余志刚1杨晓茂1程培秀2△周小力2李 建2张 彬3

（1.四川省雅安市人民医院，四川 雅安 625000；2.四川省雅安市食品药品检验所，四川 雅安625000；3.雅安三九药业有限公司，四川 雅安 625000）

目的建立HPLC法测定活血益肾散中丹参酮ⅡA含量。方法采用反相HPLC法，色谱柱为Phenomenex Gamini-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（85∶15），检测波长为 270 nm，流速1.0 mL/min，柱温35℃。结果丹参酮ⅡA进样量在0.09168～1.146 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r= 0.99999），平均加样回收率为97.07%，RSD=1.69%（n=6）。结论该方法操作简单、结果准确、重现性好，可用于活血益肾散中丹参酮ⅡA的含量测定。

活血益肾散 丹参酮Ⅱ A HPLC

活血益肾散为四川省雅安市人民医院院内制剂，由丹参等药组成，具有活血止痛、养血强筋等功效，临床用于血虚失养引起的股骨头坏死症。原质量标准均为一般鉴别反应，专属性差，无含量测定项，为控制本品质量，确保疗效和安全性，结合该制剂的组分特点，丹参为该制剂主药，而丹参的有效成分为丹参酮ⅡA，笔者参照有关文献［1-10］，建立了丹参酮ⅡA含量测定的高效液相色谱法。现报告如下。

1 仪器与试药

美国Agilent 1260型高效液相色谱仪，DAD检测器；AS5150A型超声波清洗器 （天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；BP211D电子天平 （德国赛多利斯公司）；UPT-Ⅱ-10T超纯水机（成都超纯科技有限公司）。丹参酮ⅡA对照品（来源：中国药品生物制品检定所，批号：110766-200518）；样品及阴性样品为我院制剂室提供（批号：20090504、20090601、20090602）。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：phenomenex Gamini-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。流动相为甲醇∶水（85∶15）。流速：1.0 mL/min。柱温：35℃。检测波长：270 nm。进样量：10 μL。理论塔板数按丹参酮ⅡA峰计不低于2000。

2.2 对照品溶液制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥12 h的丹参酮ⅡA对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制成40 μg/mL的溶液 （精密称取丹参酮ⅡA 11.46 mg制成45.84 μg/mL的对照品溶液）。

2.3 供试品溶液的制备 取样品约3 g，精密称定，置于塞棕色瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补充减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；按处方比例制备不含丹参的阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2.4 专属性试验 取2.3项下的3种溶液，按拟定的色谱条件分别进样测定，记录色谱图，结果见图1。从图中可见，供试品溶液色谱在与丹参酮ⅡA对照品相应保留时间有一致的色谱峰，阴性对照品溶液无干扰。

图1 高效液相色谱图

2.5 线性关系考察 精密吸取丹参酮ⅡA对照品（45.84 μg/mL）溶液2、5、8、10、15、25 μL，依次进样，记录峰面积。以进样量X（μg）为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=6.10591X-14.66637，r=0.99999（n=6）。结果表明，丹参酮ⅡA进样量在0.09168～1.146 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 精密吸取丹参酮ⅡA对照品（45.84 μg/mL）溶液，重复进样6次，测定，峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.5%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性考察 取同一供试品溶液，室温下放置，精密吸取10 μL，每隔2 h测定1次，20 h内共测10次，测定其峰面积，RSD为1.8%。结果表明供试品溶液在20 h内稳定性较好。

2.8 重复性试验 取同一批样品6份，制备供试品溶液，进样，分析，结果样品峰面积的RSD为0.4%，表明本试验条件下重现性较好。

2.9 回收率试验 见表1。取已知含量供样品（含量为0.28mg/g）6份，分别精密加入对照品溶液（0.2292mg/mL）5 mL，置水浴上挥干，再按2.3项下方法制备溶液。

2.10 样品含量测定 取样品3批，测定其含量。结果分别为0.28、0.27、0.29 mg/g。

3 讨 论

取对照品溶液，在200～400 nm波长进行紫外扫描，最大吸收在270 nm处。

提取方法及时间确定：分别考察了超声20、30、 40、60 min的提取效率和回流30、60 min的提取效率，结果超声20 min和回流提取30 min时还未完提取完全，而超声30、40、60 min提取率与回流60 min无明显差别，考虑实验的方便性，故确定其提取方法及时间为超声30 min。

表1 加样回收率试验结果

流动相比例的确定：对流动相甲醇与水的不同比例进行了考察，结果以甲醇∶水（85∶15）为最佳，基线平稳，丹参酮ⅡA的色谱峰与杂质峰分离最好，峰形最好。

对照品及样品贮存条件：由于丹参酮类见光不稳定，因此样品及对照品应贮存于棕色瓶中。

本文建立了HPLC法测定活血益肾散中丹参酮ⅡA的含量，该方法简便、结果准确、重现性好，回收率高，可用于提高该制剂的质量标准。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京：化学工业出版社，2010：71，905.

［2］ 段喜云.HPLC法测定溶栓通脉胶囊中丹参酮ⅡA的含量［J］.中国中医药咨讯，2010，2（15）：252.

［3］ 图雅，张贵军.HPLC法测定通脉灵片中丹参酮ⅡA的含量［J］.山东中医药大学学报，2008，32（3）：253-254.

［4］ 刘明海.高效液相色谱法测定活血通脉片丹参酮ⅡA的含量［J］.浙江中医杂志，2012，47（5）：383.

［5］ 黄玮.HPLC法测定活血效灵丸中丹参酮ⅡA的含量［J］.现代中药研究与实践，2008，22（2）：50-51.

［6］ 汤迎爽，康阿龙，宋红儒.HPLC法测定心脉乐片中丹参酮ⅡA的含量［J］.中医药导报，2012，18（9）：97.

［7］ 吕高明，张静.高效液相色谱法测定活血通脉胶囊中丹参酮ⅡA的含量［J］.中国药业，2013，22（6）：59-60.

［8］ 张静宇，李冬梅.高效液相色谱法测定抗栓胶囊中丹参酮ⅡA的含量［J］.中国药业，2008，17（15）：31-32.

［9］ 牛晓钢，赵玉梅.高效液相色谱法测定丹参通脉胶囊中丹参酮ⅡA的含量［J］.河南中医药学刊，2002，17（1）：16-17.

［10］丰艳梅，马小亚.HPLC法测定颈康宁胶囊中丹参酮ⅡA的含量［J］.西北药学杂志，2008，23（1）：10-11.

Determination of Tanshinone IIA Content in Huoxue Powder by HPLC

YU Zhigang，YANG Xiaomao，CHENG Peixiu，et al. Ya’an People’Hospital，SiChuan Province，Sichuan，Ya’an 625000，China

Objective：To establish a method for determining tanshinone IIA content in huoxueyishen powder by HPLC.Method：Tanshinone IIA was analysed by using Phenomenex Gamini-C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）with the mobile phase of methanol-water（85∶15）at the flow rate was 1.0 mL/min，and the detection wavelength was 270 nm，column temperature was 35℃.Result：The linear regression equation of tanshinone IIA was from 0.09168 μg to 1.146 μg，the average recoveries were 97.07%with RSD of 1.69%（n=6）.Conclusion：The method is simple，reliable and accurate，and can be used for the determination of tanshinone IIA content in huoxueyishen powder.

Huoxueyishen powder；Tanshinone IIA；HPLC

R289.5

A

1004-745X（2015）06-0988-02

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.06.017

2015-01-21）

四川省雅安市中西医结合重点建设专科

△通信作者（电子邮箱：cheng-cheng2004＠163.com）