正交试验法优化连翘叶中连翘苷提取工艺的研究

纪丽丽

（黑龙江林业职业技术学院，黑龙江 牡丹江 157011）

连翘（Forsythiasuspense），木犀科植物，常以果实入药，具有清热解毒、消肿散结、抗菌及抑制真菌等功效，为双黄连口服液、银翘解毒冲剂等中药制剂的主要原料。有研究表明，连翘叶中有效成分如连翘苷、连翘脂素、齐墩果酸等含量高于果实，连翘叶资源开发前景广阔。本文将对连翘叶中的连翘苷的提取工艺进行研究，为连翘叶的开发提供依据。

1 材料、试剂与仪器

材料：连翘叶片，13年6月份采于本学院植物园内，洗净，烘干至恒重，研磨，备用。

试剂：连翘苷标准品（中国食品药品检定研究所），乙醇为分析纯。

仪器：UV762双光束紫外-可见分光光度计，SG250HE超声波清洗器，FA2004电子天平。

2 方法

2.1 标准曲线的绘制

采用分光光度法测定连翘苷含量，以连翘苷标准品绘制标准曲线。标准曲线方程为：A＝0.02593x＋0.00746（R2＝0.99701，n＝5）。其中：A为波长229nm处的吸光值；x为连翘苷的含量（mg／L）。

2.2 样品含量的测定

称取5g连翘叶粉末，乙醇溶液浸泡30min，超声波辅助提取，冷却补重，过滤，测定样品溶液的吸光度，根据标准曲线方程计算连翘苷的含量。

2.3 单因素试验

研究乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间4个因素对连翘苷得率的影响，确定各因素的最佳范围，每个因素重复试验3次，取其平均值。

2.4 正交试验

根据单因素试验结果，选取乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间4个因素的较优水平，按L9（34）设计进行正交试验。

3 结果与分析

3.1 乙醇浓度

在50℃下，以1∶10（g∶mL，以下同）的料液比例，用不同浓度的乙醇溶液，超声波提取10min，按照2.2的方法计算连翘苷的含量，来研究乙醇浓度与连翘苷得率的关系。结果如图1所示，随着乙醇浓度的增加，连翘苷得率也增大，但当乙醇浓度超过80%后，连翘苷的得率增加变化不明显，因此，确定最佳乙醇浓度为80%。

图1 乙醇浓度对连翘苷得率的影响

3.2 液料比

在50℃下，用60%乙醇溶液，以不同的料液比，超声波提取10min，测定连翘苷的得率。

结果如图2所示，随着料液比的增加，连翘苷的得率也随之增加。提取溶剂体积越大，溶剂与提取物接触越充分，相同的时间内会溶解出更多的连翘苷而使得率增大。但是料液比过大，会增加成产成本，也会增加超声波破碎细胞的阻力，降低细胞破碎程度，从而降低连翘苷的得率，因此综合考虑，料液比最适为1∶10。

图2 料液比对连翘苷得率的影响

3.3 提取温度

以60%乙醇溶液，1∶10料液比，在不同的温度下，超声波提取10min，测定连翘苷的得率。

结果如图3所示，随着提取温度的升高，连翘苷的得率也随之增大。但温度超过70℃后连翘苷得率下降。温度过高，连翘苷被破坏，而且乙醇挥发会导致乙醇浓度降低使得连翘苷含量降低。因此，单因素提取试验中最佳温度为70℃。

3.4 提取时间

在50℃下，用60%乙醇溶液，1∶10料液比，超声波提取若干分钟后，测定连翘苷的得率，研究提取时间与连翘苷得率的关系。

结果如图4所示，开始时随着提取时间的延长，连翘苷的得率随之增加。当提取时间超多12min后，提取时间的增加却引起连翘苷得率的下降，这可能是由于时间过长导致连翘苷不稳定，因此，最佳提取时间为12min。

图4 提取时间对连翘苷得率的影响

3.5 正交试验

根据单因素试验结果，选取4个因素的3个较优水平，按L9（34）设计进行正交试验，因素与水平见表1，正交试验见表2，方差分析见表3。

表1 正交试验因素与水平

表2 正交试验结果

表3 正交设计方差分析

极差分析及方差分析结果表明，影响连翘苷得率的因素的主次顺序为：乙醇浓度＞料液比＞提取温度＞提取时间，其中乙醇浓度对连翘苷得率的影响差异极显著（P＜0.01）。因此确定最优提取条件为：80%乙醇，1∶10（g∶mL）料液比，60℃，超声提取8min，在此条件下的连翘苷得率为0.3112%。

4 结论

正交试验法是最常用的确定中药提取最佳方案的方法，该方法准确、有效。以乙醇作为溶剂提取苷类物质时，乙醇浓度、料液比、提取温度以及提取时间是主要的影响因素。因此，本研究选择这4个因素进行正交试验，采用分光光度法测定连翘苷的含量，得出乙醇80%，料液比1∶10（g∶mL），提取温度60℃，提取时间8min为最佳提取方案。其中乙醇浓度为最主要的影响因素，其他因素对提取结果有影响但影响不显著。本研究对促进连翘叶资源的充分开发和利用提供了依据。

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