复方仙草素对肝癌血道肺转移瘤表达的实验研究*

薛晓彤 张博 董晓恺 陈建衡 任青华#

（1山东省泰山疗养院 泰安271000；2山东省医学科学院 济南250062；3山东省立医院 济南265513）

复方仙草素由止血的仙鹤草与补气的人参两味中药组成，其主要有效成分是仙鹤草素和人参皂甙。在以往的临床和基础实验中，我们发现该两味中药已经不再是传统意义上止血和补气的作用，而且具有非常广泛的药理功效，尤其对抑制恶性肿瘤的转移具有良好的治疗效果。为进一步探讨中医药抗肿瘤转移的作用机理，我们对中药复方仙草素进行了深入的实验研究。现报告如下：

1 材料与方法

1.1 材料 动物：昆明种健康小白鼠，清洁级（二级）、雄性、体重（25±0.5）g，山东省动物实验中心提供，合格证书：动管资字（SYXK鲁2009）第01569号。瘤株：W256肿瘤细胞，中国中医研究院生物科学研究所提供。标本：转移瘤组织，山东省医学科学院基础医学研究所提供。药品：复方仙草素，山东省医学科学院基础医学研究所中药室提供。仪器：GF-2卧式离心机，北京中外科技医疗公司生产。SD-3组织匀浆器，江苏南京药理研究院创强科技公司生产。LY型紫外分光光度计，上海浦江科技有限公司生产。QR-3型扭力天平，山东医疗器械总公司生产。

1.2 实验方法 动物分组：取小鼠60只，随机分成模型对照组、低浓度组与高浓度组各20只。肝癌血道肺转移瘤模型建立：取传代8～12 d、生长良好的W256肿瘤瘤株，颈椎脱臼，固定于蜡板上，用碘酊、酒精消毒瘤株腹部皮肤，打开腹腔，选择生长良好无坏死或液化的肿瘤组织，放置平皿内，剪成2～3 mm3的小块，用玻璃组织匀浆器研磨，混匀后放入无菌容器内，D-Hanks液洗涤3次，离心2次，取上清液加生理盐水稀释成1∶3的瘤细胞悬液。调整细胞浓度为2×106/mL（细胞存活率＞96%）。所有小鼠尾部消毒后，尾静脉注射W256肿瘤细胞悬液0.25 mL/只，整个操作应在60 min内完成。动物用药：模型对照组给予同体积的生理盐水；高浓度组给予复方仙草素4.80 g/kg；低浓度组给予复方仙草素2.40 g/kg。每日灌胃1次，每次0.80 mL，连续给药18 d，于第19天处死动物，剥离肺脏称重，Bouin液固定，以单盲法计数肺转移瘤结节数，计算肺结节抑制率、肺转移瘤生长指数抑制率，同时将剥离的转移瘤组织固定于福尔马林溶液中，石蜡包埋、切片、免疫组化，进行肿瘤组织形态学、病理学观察。

1.3 统计学方法 采用SPSS15.0统计软件进行方差分析检验，研究数据均以（±S）表示。

2 结果

2.1 三组实验效果比较 与模型对照组比较，高浓度组肺结节抑制率为34.86%、P＜0.05，肺转移瘤生长指数抑制率为31.50%、P＜0.05，具有显著性差异；与模型对照组相比较，低浓度组肺结节抑制率为28.84%、P＞0.05，肺转移瘤生长指数抑制率为16.53%、P＞0.05，无显著性差异。见表1。

表1 复方仙草素对肝癌血道肺转移瘤的影响 （±S）

表1 复方仙草素对肝癌血道肺转移瘤的影响 （±S）

注：与模型对照组比较，*P＜0.05。

组别 n 肺结节结节数（个） 抑制率（%）肺转移瘤生长指数（×10-3）抑制率（%）模型对照组高浓度组低浓度组20 20 20 12.45±6.13 8.11±3.78*8.86±4.11 34.86 28.84 9.212±2.124 6.310±1.803*7.689±2.045 31.50 16.53

2.2 转移瘤组织形态学及病理学观察 模型对照组肺组织可见广泛的转移病灶，结节大小不一，分布于肺组织血管及支气管周围；癌组织呈浸润性生长，细胞核深染，核浆比例失调，大部分肺叶被瘤组织取代。高浓度组肺组织转移结节显著少于模型对照组，以小转移灶为主，边界清楚，少数侵袭血管壁和围绕血管生长，可见较多部分癌细胞变性坏死。低浓度组癌细胞浸润结缔组织，有少量围绕气管和血管生长，癌细胞坏死面积局限于肺组织边缘。实验研究表明，高浓度组对小鼠肝癌血道肺转移瘤具有良好的抑制作用，肺结节抑制率与转移瘤生长指数抑制率均高于低浓度组，具有明显的量效依赖性。

3 讨论

复方仙草素含有多种药理活性，具有非常广阔的应用前景。本实验结果表明，高浓度组肝癌血道肺转移结节显著少于模型对照组，可见较多部分的癌细胞变性坏死，明显优于低浓度组，呈现出较强的量效关系。提示临床用药在一定的情况下应该达到足够的剂量（浓度）甚至更大的剂量（浓度），才能具有良好的抗肿瘤转移作用。现代药理研究表明，仙鹤草对恶性肿瘤具有显著的抗扩散作用，其水提液能明显抑制小鼠S180肉瘤、U14宫颈癌、B16黑色素瘤、H22肝癌实体瘤，同时还具有改善血液高黏状态的作用[1]。人参皂甙能提高生物体内网状细胞的吞噬功效，增强IL-2和自然杀伤细胞的活性[2]，诱导肿瘤细胞的凋亡，抑制血管内皮生长因子的表达[3]，从而控制肿瘤新生血管的形成和转移。本实验进一步证实，高浓度的复方仙草素对肝癌血道肺转移瘤具有较强的抑制作用。

[1]黄自丽，黄修燕，郑起.中药抗肿瘤作用及其作用机制研究进展[J].医学综述，2010，16(3)：386-389

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[3]Suzuki S，Kuwajima T，Yoneyama Y，et al.Maternal peripheral T-helper 1-type and T-helper 2-type immunity in nonpreeclamptic twin pregnancies[J].Gynecol Obstet Invest，2002，53(3)：140-143