薛晓彤 张博 董晓恺 陈建衡 任青华#
(1山东省泰山疗养院 泰安271000;2山东省医学科学院 济南250062;3山东省立医院 济南265513)
复方仙草素由止血的仙鹤草与补气的人参两味中药组成,其主要有效成分是仙鹤草素和人参皂甙。在以往的临床和基础实验中,我们发现该两味中药已经不再是传统意义上止血和补气的作用,而且具有非常广泛的药理功效,尤其对抑制恶性肿瘤的转移具有良好的治疗效果。为进一步探讨中医药抗肿瘤转移的作用机理,我们对中药复方仙草素进行了深入的实验研究。现报告如下:
1.1 材料 动物:昆明种健康小白鼠,清洁级(二级)、雄性、体重(25±0.5)g,山东省动物实验中心提供,合格证书:动管资字(SYXK鲁2009)第01569号。瘤株:W256肿瘤细胞,中国中医研究院生物科学研究所提供。标本:转移瘤组织,山东省医学科学院基础医学研究所提供。药品:复方仙草素,山东省医学科学院基础医学研究所中药室提供。仪器:GF-2卧式离心机,北京中外科技医疗公司生产。SD-3组织匀浆器,江苏南京药理研究院创强科技公司生产。LY型紫外分光光度计,上海浦江科技有限公司生产。QR-3型扭力天平,山东医疗器械总公司生产。
1.2 实验方法 动物分组:取小鼠60只,随机分成模型对照组、低浓度组与高浓度组各20只。肝癌血道肺转移瘤模型建立:取传代8~12 d、生长良好的W256肿瘤瘤株,颈椎脱臼,固定于蜡板上,用碘酊、酒精消毒瘤株腹部皮肤,打开腹腔,选择生长良好无坏死或液化的肿瘤组织,放置平皿内,剪成2~3 mm3的小块,用玻璃组织匀浆器研磨,混匀后放入无菌容器内,D-Hanks液洗涤3次,离心2次,取上清液加生理盐水稀释成1∶3的瘤细胞悬液。调整细胞浓度为2×106/mL(细胞存活率>96%)。所有小鼠尾部消毒后,尾静脉注射W256肿瘤细胞悬液0.25 mL/只,整个操作应在60 min内完成。动物用药:模型对照组给予同体积的生理盐水;高浓度组给予复方仙草素4.80 g/kg;低浓度组给予复方仙草素2.40 g/kg。每日灌胃1次,每次0.80 mL,连续给药18 d,于第19天处死动物,剥离肺脏称重,Bouin液固定,以单盲法计数肺转移瘤结节数,计算肺结节抑制率、肺转移瘤生长指数抑制率,同时将剥离的转移瘤组织固定于福尔马林溶液中,石蜡包埋、切片、免疫组化,进行肿瘤组织形态学、病理学观察。
1.3 统计学方法 采用SPSS15.0统计软件进行方差分析检验,研究数据均以(±S)表示。
2.1 三组实验效果比较 与模型对照组比较,高浓度组肺结节抑制率为34.86%、P<0.05,肺转移瘤生长指数抑制率为31.50%、P<0.05,具有显著性差异;与模型对照组相比较,低浓度组肺结节抑制率为28.84%、P>0.05,肺转移瘤生长指数抑制率为16.53%、P>0.05,无显著性差异。见表1。
表1 复方仙草素对肝癌血道肺转移瘤的影响 (±S)
表1 复方仙草素对肝癌血道肺转移瘤的影响 (±S)
注:与模型对照组比较,*P<0.05。
组别 n 肺结节结节数(个) 抑制率(%)肺转移瘤生长指数(×10-3)抑制率(%)模型对照组高浓度组低浓度组20 20 20 12.45±6.13 8.11±3.78*8.86±4.11 34.86 28.84 9.212±2.124 6.310±1.803*7.689±2.045 31.50 16.53
2.2 转移瘤组织形态学及病理学观察 模型对照组肺组织可见广泛的转移病灶,结节大小不一,分布于肺组织血管及支气管周围;癌组织呈浸润性生长,细胞核深染,核浆比例失调,大部分肺叶被瘤组织取代。高浓度组肺组织转移结节显著少于模型对照组,以小转移灶为主,边界清楚,少数侵袭血管壁和围绕血管生长,可见较多部分癌细胞变性坏死。低浓度组癌细胞浸润结缔组织,有少量围绕气管和血管生长,癌细胞坏死面积局限于肺组织边缘。实验研究表明,高浓度组对小鼠肝癌血道肺转移瘤具有良好的抑制作用,肺结节抑制率与转移瘤生长指数抑制率均高于低浓度组,具有明显的量效依赖性。
复方仙草素含有多种药理活性,具有非常广阔的应用前景。本实验结果表明,高浓度组肝癌血道肺转移结节显著少于模型对照组,可见较多部分的癌细胞变性坏死,明显优于低浓度组,呈现出较强的量效关系。提示临床用药在一定的情况下应该达到足够的剂量(浓度)甚至更大的剂量(浓度),才能具有良好的抗肿瘤转移作用。现代药理研究表明,仙鹤草对恶性肿瘤具有显著的抗扩散作用,其水提液能明显抑制小鼠S180肉瘤、U14宫颈癌、B16黑色素瘤、H22肝癌实体瘤,同时还具有改善血液高黏状态的作用[1]。人参皂甙能提高生物体内网状细胞的吞噬功效,增强IL-2和自然杀伤细胞的活性[2],诱导肿瘤细胞的凋亡,抑制血管内皮生长因子的表达[3],从而控制肿瘤新生血管的形成和转移。本实验进一步证实,高浓度的复方仙草素对肝癌血道肺转移瘤具有较强的抑制作用。
[1]黄自丽,黄修燕,郑起.中药抗肿瘤作用及其作用机制研究进展[J].医学综述,2010,16(3):386-389
[2]Klangsinsirikul P,Russell NH.Peripheral blood stem cell harvests from G-CSF-stimulated donors contain a skewed Th2 CD4 phenotype and a predominance of type 2 dendritic cells [J].Exp Hematol,2002,30(5):495-501
[3]Suzuki S,Kuwajima T,Yoneyama Y,et al.Maternal peripheral T-helper 1-type and T-helper 2-type immunity in nonpreeclamptic twin pregnancies[J].Gynecol Obstet Invest,2002,53(3):140-143