Ack1在胃癌中的表达及其临床意义

阳 佳，刘寿行，刘 展

(湖南师范大学第一附属医院，湖南省人民医院消化内科，湖南 长沙 410005)

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，在我国其发病率居各类肿瘤的首位［1］。胃癌可发生于任何年龄、胃的任何部位，其发病有明显的地域性差别，在我国的西北与东部沿海地区胃癌发病率比南方地区明显为高，因此了解胃癌的病因，加强胃癌的预防对胃癌的早期诊断、治疗及其预后至关重要［1，2］。Ack1 是主要分布于胞浆的非受体酪氨酸激酶，具有催化底物蛋白酪氨酸残基磷酸化、激活底物酶活性的功能［8］。近年来，国内外研究显示，Ack1 表达的激活与肿瘤的发生、侵袭、转移等过程相关，已在其他脏器中有所体现，但在胃癌中暂无相关报道。本实验将通过免疫组化的方法对Ack1 蛋白在胃癌中的表达及其临床意义进行研究。

1 材料与方法

1.1 材料

收集2013年1月～2013年11月湖南省人民医院胃腺癌手术后病理科保存胃癌石蜡标本60 例作为胃癌组，其中男性38 例，女性22 例。年龄35 ～78 岁，平均年龄56.37 岁。收集癌旁组织(距肿瘤边缘2 ～5cm)15 例作为癌旁组织，同期术后正式为良性疾病的为组织15 例作为正常组。Ack1 多克隆抗体购自abcam 公司;即用型非生物素免疫组化EliVi-sionTMsuper 检测试剂盒、DAB 显色剂、柠檬酸抗原修复液及PBS 缓冲液粉剂等购自福州迈新生物技术公司。

1.2 方法

1.2.1 制片及分类

全部石蜡标本连续切片，用免疫组织化学SP法检测胃癌组织、癌旁组织及正常为组织Ack1 的表达。严格按照试剂盒说明书只是步骤操作，取Ack1 一抗稀释浓度为1:50，用PBS 缓冲液作为阴性对照。试验组所有病例均依据国际抗癌联盟第7版胃癌TNM 分期系统标准进行分期，按性别、年龄、肿瘤大小、TNM 分期，有无淋巴结转移进行分类。

1.2.2 判定标准

结果进行半定量分析，按阳性着色范围和阳性着色强度分别记为:0 ～10%为0 分，11% ～30% 为1 分，31% ～50% 为2 分，51% ～70% 为3 分，＞70%为4 分。显色弱为0 分，中等为1 分，强为2分，极强为3 分。两者相加，积分0 ～1 分为阴性“－”，2 分为弱阳性“+”，3 分为阳性“++”，4 分级以上为强阳性“+++”。

1.2.3 统计学处理

用SPSS13.0 软件进行统计学分析，定性资料率的比较用卡方检验;非参数检验用Wilcoxon 秩和检验、Kruskal-Wallis H 检验，检验仪α=0.05，P ＜0.05为差异，具有统计学意义。

2 结果

2.1 Ack1 蛋白在胃癌组织、癌旁组织及正常为组织中的表达特点

研究结果显示Ack1 蛋白在胃癌组织中表达升高，在癌旁组织中的有部分表达，在正常组织中表达降低或无表达。显微镜下可见细胞质、细胞膜中棕褐色颗粒着色即为阳性表达。Ack1 蛋白在胃癌组中未见阴性表达，弱阳性表达8 例，阳性表达22 例，强阳性表达30 例;癌旁组织中阴性表达1 例，弱阳性表达7 例，阳性表达4 例，强阳性表达3 例;正常为组织中阴性表达9 例，弱阳性表达6 例，未见阳性及强阳性表达(图1)。三者比较非参数检验Kruskal-Wallis H 检验得P ＜0.05，可认为胃癌组织、癌旁组织及正常卫组织中Ack1 蛋白的表达有差异。三者两两比较以秩和检验Wilcoxon 检验得到Ack1 蛋白在胃癌组织与正常组织、胃癌组织与癌旁组织中的表达有差异，P ＜0.05，有统计学意义。在正常组织与癌旁组织中的表达(P ＞0.05)，无统计学意义。

2.2 Ack1 蛋白的表达与胃癌患者临床病例特征的关系

Ack1 蛋白的表达与胃癌患者的分化程度及TNM 分期有关，分化程度越低、TNM 分期越高，Ack1 蛋白表达的阳性率就越高(P ＜0.05)。Ack1蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤部位及是否发生淋巴结转移无关(P ＞0.05)，见表1。

图1 显微镜下所示Ack1 蛋白在胃腺癌、癌旁及正常组织中的表达

表1 Ack1 蛋白表达阳性率与临床病例参数的关系比较

3 讨论

Ack1 蛋白是1993年，Manser 等人在寻找小G蛋白Cdc42 的作用蛋白时发现的。是一种主要结合GTP-Cdc42(活化形式的Cdc42)蛋白，是一种非受体型酪氨酸激酶［3］。Ack1 基因定位于人染色体3q29，其编码蛋白大小约120KD，主要定位于细胞胞浆，其分子结构包括一个激酶区、一个SH3 区、一个Cdc42/Rac 结合区和一个富含脯氨酸的羟基端［9］。Ack1 蛋白属于酪氨酸激酶家族，最早作为Cdc42 下游的作用蛋白被发现。已有研究表明，Ack1 作为Cdc42 下游的效应器参与了多条信号通路，在细胞增殖、运动和侵袭中发挥重要作用［3，4-6］。之后，Van der Horst 等人通过比较基因组杂交的技术分析发现，Ack1 在人的乳腺癌、食道癌、胰腺癌、卵巢癌和前列腺癌等多种肿瘤组织中存在着不同程度的表达上调［7-9］。但Ack1 在肿瘤组织中表达上调的机制目前尚不十分明了。在最近的一项研究中现实Ack1 在肿瘤中的表达上调可能亦与其低甲基化有关［10］。

本研究通过免疫组化的方法首次初步研究了Ack1 蛋白在人胃癌组织、癌旁组织、正常组织中表达的差异，结果以半定量方法经统计学检验比较后发现Ack1 蛋白在胃癌组织、癌旁组织及正常卫组织中的表达差异有统计学意义。Ack1 蛋白在胃癌组织与正常组织、胃癌组织与癌旁组织中的表达差异也有统计学意义。而在正常组织与癌旁组织中的表达无统计学意义。Ack1 蛋白的表达与胃癌患者的分化程度及TNM 分期有关，分化程度越低、TNM分期越高，Ack1 蛋白表达的阳性率就越高。Ack1蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤部位及是否发生淋巴结转移无关。

本文结果显示Ack1 作为一个具有强大功能的酪氨酸激酶在胃癌的发生、生长过程中发挥了十分重要的作用。与组织细胞形态学相结合，有助于临床胃癌诊断，为恶性肿瘤的防治提供一个新的诊断、预后标志物和一个潜在的治疗靶点。

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