奶牛乳头高效药浴消毒剂杀菌效果试验

文∕周庆民 侯美如 冯万宇 徐 馨 黄 健

（黑龙江省兽医科学研究所）

奶牛挤奶后用消毒剂对乳头进行消毒是生产中预防奶牛乳房炎发生的主要方法。奶牛乳头药浴消毒剂的质量对杀灭病原微生物的效果起到最为关键的作用。但奶牛的生活条件、乳头生理位置和特殊生理功能，决定了奶牛乳头始终处于十分复杂的环境中，这就要求乳头的药浴消毒剂必须具有广谱杀菌、杀菌速度快、安全可靠的特点。为了检验奶牛乳头高效药浴消毒剂的消毒效果，本文对其进行了杀菌速度和载体浸泡消毒效果试验。

1 材料与方法

1.1 材料

硫代硫酸钠、无水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾；营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、鲜血琼脂培养基、LB培养基；奶牛乳头高效药浴消毒剂（由本研究室研制）；菌种（金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌）由本研究室分离培养。

1.2 仪器设备

电子天平、超净台、高压灭菌器、干燥箱、恒温箱、显微镜。

1.3 方法

1.3.1 培养基的制作

参照《兽医微生物学实验指导（第2版）》[1]制作所有液体培养基和普通平板培养基。

1.3.2 硫代硫酸钠中和剂的制备

称取无水磷酸氢二钠 2.83 g、磷酸二氢钾1.36 g，加蒸馏水至1 000 mL，待完全溶解后，调pH值到7.2～7.4，于121 ℃高压灭菌器中灭菌20 min，配制成0.03 mol/L、pH值为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液。

取1.0 g硫代硫酸钠，溶解于100 mL 0.03 mol/L、pH值7.2～7.4的磷酸盐缓冲液中，于121 ℃高压灭菌器灭菌15 min，制备成1.0%的硫代硫酸钠中和剂。

1.3.3 试验菌液的制备

将金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌分别接种到营养琼脂培养基培养24 h后，再将金黄色葡萄球菌接种到营养肉汤培养基、无乳链球菌和停乳链球菌接种至鲜血琼脂培养基，大肠杆菌接种到LB培养基中，37 ℃培养18～24 h，备用。

1.3.4 杀菌速度试验

试验分为4组，分别为金黄色葡萄球菌杀灭试验组、无乳链球菌杀灭试验组、停乳链球菌杀灭试验组、大肠杆菌杀灭试验组，每组设6 个反应管，每组每管分别加入1 mL相应的菌液，随即加入5 mL奶牛乳头高效药浴消毒剂（边加入边摇匀）。6 个管依次在加入奶牛乳头高效药浴消毒剂5、10、15、20、25、30 s时，各取1 mL加入9 mL1.0%的硫代硫酸钠中和剂，摇匀，中和10 min，取出1 mL加入9 mL相应的液体培养基，摇匀后放入恒温箱37 ℃培养24 h，观察各管中细菌的生长情况。

1.3.5 载体浸泡消毒试验

选择大小为26 mm×76 mm的长方形载玻片24 片为载体，首先将载玻片放在含洗涤剂的水中煮沸30 min，然后用自来水冲洗干净，再用蒸馏水煮沸10 min，再用蒸馏水漂洗至pH值呈中性，晾干、单片包装，于恒温干燥箱160 ℃干热灭菌2 h，备用。分别取金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌液体培养物0.1 mL（含菌量约106个）均匀涂抹在灭菌的载玻片上，每种细菌涂抹6 片，放入恒温箱37 ℃培养1 h，取出放入室温的奶牛乳头高效药浴消毒剂中，依次作用5、10、15、20、25、30 s；取出放入1.0%的硫代硫酸钠中和剂中，作用10 min；取出放入液体培养基中，于恒温箱37 ℃培养24 h，观察细菌生长情况。

2 结果

2.1 杀菌速度试验

从表1可以看出，奶牛乳头高效药浴消毒剂在10 s即可杀灭悬液中的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌，在15 s杀灭悬液中的无乳链球菌和停乳链球菌，15 s可杀灭全部悬液细菌。

表1 不同消毒时间消毒剂对悬液细菌作用情况

2.2 载体浸泡消毒试验

从表2可以看出，奶牛乳头高效药浴消毒剂对载体金黄色葡萄球菌在10 s即可杀灭，对载体无乳链球菌、停乳链球菌和大肠杆菌在15 s杀灭，对载体细菌15 s即可全部杀灭。

表2 不同消毒时间消毒剂对载体细菌作用情况

3 分析与讨论

3.1 奶牛乳头高效药浴消毒剂是用目前临床常用的碘制剂研制而成的，含有碘的激活剂，可激活碘的活性，快速增加消毒剂中有效碘的含量，提高有效碘的浓度，增强对病原微生物的杀灭能力，效果快速而彻底。

3.2 奶牛乳房炎发病原因复杂，但90%以上是由外源性病原微生物通过乳头管口感染引起的，通过乳头药浴可以大大减少乳头上的病原微生物，尽可能地消除传染源，有效地预防奶牛乳房炎的发生，因此，乳头药浴消毒剂在使用安全的基础上，必须杀菌速度快、杀菌谱广，才能达到理想效果。本试验表明，奶牛乳头高效药浴消毒剂无论是悬液杀菌试验，还是载物杀菌试验，15 s即可全部杀灭引起奶牛乳房炎的主要细菌，杀菌率达到100%，2种试验效果基本一致，能够达到奶牛乳头药浴高效消毒的目的。

[1]姚火春.兽医微生物学实验指导（第二版）.北京：中国农业出版社，2012.