重金属在中国林蛙体内富集特征研究

肖井雷,于洋洋,姜大成

(长春中医药大学药学院,长春130117)

中国林蛙(Rana temporaria chensinensis David),是一种主要分布于我国东北地区的名贵野生药用动物,亦是一种药食同源的珍贵佳品。近年来,由于人们普遍认识到中国林蛙及其输卵管(哈蟆油)、卵的营养价值,大力开展中国林蛙的人工养殖,地球生态环境的污染以及两栖类动物特有的呼吸方式(用皮肤呼吸),可能会导致生态环境中的一些有害物质在中国林蛙体内富集。因此,本文对中国林蛙不同部位中的重金属含量进行了测试分析,以诠释重金属在中国林蛙体内的吸收富集特征,揭示中国林蛙药用、食用的安全性。

1 实验仪器、试药与材料

1.1 实验仪器 AFS-930型顺序注射原子荧光光度计(北京吉天仪器有限公司)、AA-6800原子吸收分光光度计(日本岛津公司)。

1.2 实验试药 盐酸、硝酸、高氯酸、氢氧化钾均为优级纯,氢氟酸氯化钠、氢氧化钠、硫脲、抗坏血酸、硼氢化钾为分析纯。5种重金属标准物质均购于国家标准物质中心,规格为1.0 mg/mL。

1.3 实验材料

1.3.1 样品采集 选定吉林省桦甸市苏密沟乡3个不同的养蛙场。在每个样品采集点的越冬池中随机捕捉3～6年的中国林蛙(雌、雄各50只)。

1.3.2 样品处理 用自来水冲洗掉林蛙体表的杂物,用去离子水冲洗干净,穿起在阴凉处风干。雄蛙阴干后装入干净的食品袋-4℃密封保存。雌蛙装入食品袋中后,用适量热去离子水喷洒,封好袋口,在30℃电热恒温箱内放置12～24 h后,用手术刀剖开腹部取出输卵管和卵分别放入用去离子水冲洗干净的干燥磨口玻璃瓶内-4℃密封保存待用。除去输卵管和卵的其他部分单独装入干燥的食品袋中-4℃密封保存。

2 实验方法与结果

2.1 样品前处理 称取10.0 g样品放入用去离子水冲洗干净的培养皿中,在55℃下烘干24 h后,用玛瑙研钵研碎至全部能通过60目筛,盛入用去离子水冲洗干净的磨口玻璃瓶中,放入干燥器中密封备用。

2.2 供试品的制备 参照《中国药典》中相应项下制备。

2.3 供试品中重金属的含量测定[1-9]

2.3.1 仪器工作条件

2.3.1.1 铅测定工作条件 波长:283.3 nm;灯电流:440 mA;狭缝:0.7 nm;燃烧高度:1 nm;干燥温度:110～130℃;灰化温度:850℃;原子化温度:160℃;净化温度:2 450℃;乙炔气压力:1 mPa。

2.3.1.2 镉测定仪器条件 波长:228.8 nm;灯电流:230 mA;狭缝:0.7 nm;燃烧高度:1 mm;干燥温度:110℃～130℃;灰化温度:500℃;原子化温度:1 600℃;净化温度:2 450℃。

2.3.1.3 铜测定仪器条件 检测波长:324.75 nm;空气-乙炔火焰;氘灯背景校正;火焰高度:5 mm;狭缝:0.2 nm;灯电流:3 mA。

2.3.1.4 砷测定仪器条件 光电倍增管负高压:270 V;灯电流 :60 mA;载气流量:400 mL/min;屏蔽气流量:800 mL/min;原子化器高度:8 mm。

2.3.1.5 汞测定仪器条件 光电倍增管负高压:270V;灯电流:30 mA;载气流量:400 mL/min;屏蔽气流量:800 mL/min;原子化器高度:8 mm。

2.3.2 方法学考察

2.3.2.1 线性关系 分别对铅、镉、铜、砷和汞进行线性关系的考察,结果显示各种元素在相应线性范围内线性关系良好,结果见表1。

表 1 Pb、Cd、Cu、As和 Hg 的标准曲线

2.3.2.2 精密度试验 取适量对照品溶液,按照上述条件进行重金属含量测定,平行进样10次,计算每种元素的RSD值,结果见表2。5种元素RSD值分别在0.204%～1.761%之间,表明该仪器精密度良好。

表2 5种重金属元素精密度检查

2.3.2.3 稳定性试验 将定容后的样品放置,分别于0、12、24、48、72 h 后进行测定,结果见表 3。各个元素的含量随着放置时间没有明显改变,表明重金属元素在0～72 h内稳定性良好。

表3 样品中重金属元素稳定性ng/mL

2.3.2.4 回收率试验 取已知含量的样品粉末,分别精密称取样品0.5 000 g,共12分,其中6份加入适量Pb、Cd、Cu标准品溶液,另外 6分加入适量As和Hg标准溶液,按照上述方法进行操作,求各元素的回收率,见表4。各元素回收率在96.9%～100.2%,表明实验所用方法对各个元素回收率较高。

表4 中国林蛙及其药用部位重金属元素回收率 μ g/g

2.3.3 样品测定 以5 mL消化液按样品处理方法进行加热消化为空白对照,每份样品平行进样3次,实验结果见表5。

表5 中国林蛙不同部位中重金属含量 mg/kg

3 结论

依据药用植物及制剂外经贸绿色行业标准WM/T2-2004中重金属限量要求:各产地的中国林蛙输卵管、卵及雌雄蛙全体中重金属均不超标。

依据水产或鱼类重金属限量的标准要求:各产地的中国林蛙输卵管、卵及雌雄全体中重金属均不超标。

通过此实验研究可知,重金属在中国林蛙体内有一定的富集,但并未显示靶向积聚趋势。此研究表明中国林蛙在应用时不存在安全隐患。

由于《中华人民共和国药典》中并未对药材中铅、砷、汞、镉、铜的含量限度给以标准,只有总重金属含量的限度标准,并且国家未出台对动物药中重金属含量的标准。因此,本实验借鉴了相关标准进行了检测分析。

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