血清Glypican－3联合AFP对肝癌患者的诊断效果

李志阳，李歆，杨素冰，丘熙廉（.广州医科大学附属肿瘤医院输血科，广州 50095；.中山大学附属第一医院检验医学部，广州 50080）

2008年世界卫生组织资料显示肝癌发病率在所有肿瘤中位于第5位，其病死率为第3位，并且两者均有逐年上升的趋势［1］。目前切除术仍是外科治疗肝癌最常用的方法，但由于大多数肝癌患者就诊时已经是中期或晚期，最佳手术切除的时机已经错过，因此影响肝癌治疗及预后的关键就是早发现［2］。目前甲胎蛋白（AFP）是肝癌诊断中应用最广泛的一种肿瘤标记物，但AFP在肝癌患者中敏感度很低，其特异性也不高，特别是在早期肝癌患者中阳性率更低，因此AFP作为肝癌的早期确诊方法并不是很理想，当前寻找新的肿瘤标记物已迫在眉睫。磷脂酰肌醇蛋白聚糖－3（Glypican－3）已成为国内外医学者研究的热点，Glypican－3是细胞膜表面的一种蛋白聚糖，在正常人体的肝脏及肝炎患者中均不表达，但是在肝癌患者的在肝细胞中呈高表达［3］。本研究以110例就诊的肝病患者及40例健康体检者的血清为研究对象，探讨Glypican－3和AFP 对肝癌患者的诊断效果，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2012年1月至2013年12月广州医科大学附属肿瘤医院和中山大学附属第一医院收治的110例肝病患者，其中肝癌患者42例（均为初发，且均没有经过任何抗癌治疗），男29例，女13例，年龄35～69岁，平均49.9岁。肝硬化患者24例，男14例，女10例，年龄36～58岁，平均32.8岁。肝炎患者44例，男28例，女16例，年龄29～62岁，平均45.5岁。所有患者均经影像学、病理学和实验室明确诊断。另收集健康体检者的血清40例，年龄26～45岁，为同期健康体检的肝功能生化指标检测均正常者。

1.2 方法所有研究对象均抽取5 mL 清晨空腹外周静脉血；4000r／min，离心10 min 后，分离出血清，然后放置于－80℃保存，集中检测。检测前将血清标本拿出解冻并混匀。血清Glypican－3检测：按美国BioMosaics公司提供的酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒的说明书进行操作，并在瑞士TECAN F50多功能酶标仪上进行分析［4］。每例待测血清重复3个孔，取平均值。采用试剂盒提供标准品实验，分6个浓度梯度，即0、50、150、450、1350和4050pg／mL。以标准品为自变量，以其对应的吸光值为应变量作标准曲线，计算出每例血清样品中Glypican－3浓度。正常参考值为：1.56～6.08pg／mL。血清AFP检测：每例受试者取250μL 的血清样品，应用美国ARCHITECT i2000全自动免疫发光仪、相应的检测AFP试剂盒及其说明书来检测血清中AFP 水平。正常参考值为3.09～5.21ng／mL。

1.3 统计学处理所有数据均采用SPSS19.0统计软件进行处理，计量资料采用来表示，组内均数间比较使用t检验，阳性率比较采用χ2检验，组间均数比较使用单因素的方差分析（One－way ANOVA），双变量计量资料的相关性分析采用Pearson相关检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4组研究对象血清Glypican－3及AFP 的表达水平Glypican－3在肝癌患者血清中的表达水平明显高于肝硬化组、肝炎组及健康对照组的患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；AFP在肝癌组及肝硬化组患者血清中的表达水平均高于肝炎组及健康对照组患者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 4组研究对象血清中的Glypican－3及AFP的表达水平（）

表1 4组研究对象血清中的Glypican－3及AFP的表达水平（）

注：与肝癌组相比，aP＜0.05；与肝硬化组相比，b P＜0.05。

2.2 Glypican－3、AFP及Glypican－3和AFP 的特异性与敏感性 Glypican－3和AFP 的值大于试剂盒规定的正常值（AFP＞20ng／mL，Glypican－3＞60pg／mL）均为阳性。42例肝癌患者血清Glypican－3和AFP 两者联合检测敏感性（85.71%）明显高于Glypican－3（76.19%）或AFP 单项检测的敏感性（61.90%），差异具有统计学意义。40例健康患者血清Glypican－3与AFP 联合检测的特异性（95.00%）明显高于Glypican－3（85.00%）或AFP单项检测的特异性（82.50%），差异具有统计学意义，见表2。

表2 Glypican－3、AFP及二者联合检测的特异性与敏感性

3 讨论

早期诊断和早治疗是诊治肝细胞癌的关键，AFP 广泛应用于肝细胞癌的普查、诊断及判断预后［5］。Glypican－3作为Glypican家族中的一员，其氨基端的可溶性片段可被分泌到细胞外并且能被检测到，因此Glypican－3在临床肝细胞癌患者的血清中的水平是否存在一定的价值值得研究［6］。熊波［7］报道，在区分肝癌与肝良性疾病方面，Glypican－3显示了良好的诊断价值。本研究通过分析110例就诊的肝病患者和40例健康对照者的血清中Glypican－3和AFP的表达情况，探讨Glypican－3联合AFP对肝癌患者的诊断价值。

本研究结果显示，肝细胞癌患者血清中Glypican－3的表达水平明显增高，显著高于肝硬化组、肝炎组及健康对照组，这结果与江枫等［8］的研究结果一致，这一结果提示Glypican－3蛋白作为一个肝癌的特异性的标记物，在肝细胞发生癌变时在恶性癌细胞内有稳定的表达。本研究中AFP在肝癌组及肝硬化组血清中的表达水平均高于肝炎组及健康对照组，但是在肝硬化患者的血清中AFP的表达水平明显低于肝癌患者，这结果与文献［9］的结果有些出入，分析原因可能是由于试验中所规定的界限值不同有关，也可能与本研究所选的对象所处阶段及病例数有关。这一结果也提示在肝癌诊断方面，Glypican－3蛋白的特异性高于AFP。本研究结果还显示，Glypican－3联合AFP检测肝细胞癌的敏感性明显高于Glypican－3或AFP单项检测的敏感性；在特异性方面，Glypican－3联合AFP 明显高于Glypican－3或AFP单项检测。这一结果与Ozkan等［10］的研究结果一致，分析其原因可能是由于在诊断肝细胞癌中Glypican－3联合AFP检测两者可以进行互相补充，弥补Glypican－3或AFP单项检测的局限性；同时还为肝癌患者筛选出了个体化的敏感肿瘤标志物，并可以对其进行动态监测，最终在判断疗效及提示复发等方面提供了重要的提示作用。

综上所述，Glypican－3为一种新型的、敏感性和特异性均很好的肝癌的肿瘤标志物，联合AFP检测可有效提高肝癌患者的诊断效率。Glypican－3联合AFP 检测在临床工作肝癌的诊断中应该大力推广应用。

［1］宋孟锜，杨永飞，王冬冬，等.磷脂酰肌醇蛋白聚糖－3和甲胎蛋白联合检测对原发性肝癌的诊断价值［J］.临床肝胆病杂志，2011，27（4）：391－399.

［2］杨永飞.Glypican－3、AFP、CD133联合检测在原发性肝癌诊断中的价值［D］.华中科技大学，2010：299.

［3］Matsuda M，Asakawa M，Amemiya H，et al.Lens culinaris agglutinin－reactive fraction of AFP is a useful prognostic biomarker for survival after repeat hepatic resection for HCC［J］.J Gastroenterol Hepatol，2011，26（8）：731－738.

［4］马庆庆，黄建廷，童华波，等.血清标志Glypican－3对肝细胞癌诊断价值初步评价［J］.中华肿瘤预防杂志，2014，21（2）：127－130.

［5］王丽丽，王立群，高歌.原发性肝癌患者血清中Glypican－3检测及与AFP 联合试验的诊断价值［J］.中国实验诊断学，2011，15（6）：1055－1056.

［6］郭大伟，侯学忠，魏云涛，等.GPC3基因转染的树突状细胞对人肝癌HepG2细胞杀伤作用的观察［J］.中华肿瘤防治杂志，2009，16（12）：906－909.

［7］熊波.血清肿瘤标记物GPC3对原发性肝癌诊断价值的系统评价［D］.重庆医科大学，2012：30.

［8］江枫，肖明兵，倪润洲，等.血清glypican3ELISA 检测法的建立及初步应用［J］.临床检验杂志，2011，29（6）：244－246.

［9］Yao M，Yao DF，Bian YZ，et al.Oncofetal antigen glypican－3as a promising early diagnostic marker for hepatocellular carcinoma［J］.Hepatobiliary Pancreat Dis Int，2011，10（3）：289－294.

［10］Ozkan H，Erdal H，Kocak E，et al.Diagnostic and prognostic role of serum glypican 3in patients with hepatocellular carcinoma［J］.J Clin Lab Anal，2011，25（5）：350－353.