地黄饮子对Alzheimer’s disease和Parkinson’s disease大鼠T－SOD、LPO的影响＊

成金枝 张俊龙 郭 蕾 山东中医药大学2012级博士研究生（济南250355）

◇山西中医学院（太原030024）

方证研究一直是中医基础领域的重要内容，但对于中医临床基于“异病同证”理论运用同一方剂防治不同疾病的方证机理还缺乏深入的研究。本实验选择AD和PD病证结合动物模型作为研究对象，中医临床治疗AD和PD确有疗效的补肾名方地黄引子作为工具药，测定血清中T－SOD、LPO，为中医“异病同证”、“异病同治”理论在临床诊断及临床治疗中的应用提供现代科学实验依据。

1 实验材料1.1 实验动物 健康SD大鼠，购自中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，许可证编号为SCXK—（军）2012—0004，雄性，共84只，体重在250～300g，室温20～23℃，湿度50%～70%饲养，自由进水、饮食与采光。

1.2 药物与试剂 受试药：地黄饮子由熟地、山茱萸、肉苁蓉、巴戟天、附子、肉桂、麦门冬、石斛等组成，安徽亳州药材站提供

试剂：Aβ25～35（美国Sigma公司），T－SOD、LPO测试盒（南京建成生物工程研究所），D－半乳糖（BBI公司），鱼藤酮（美国Sigma公司），二甲亚砜（美国Amresco公司）等。

1.3 仪器 脑立体定位仪（美国BAS公司，型号：SAS－4100型），牙科钻（韩国STRONG型），酶标仪（美国BIO－RAD公司，型号：Mode l 680），离心机（上海安亭科学仪器厂，型号：GL－20G－H），电热恒温培养箱（上海齐欣科学仪器有限公司，型号：DH P－9162）及相关手术器械等。

2 实验方法2.1 动物分组 将84只健康SD大鼠随机分为AD正常对照组、AD模型组、AD假手术组、AD地黄饮子组、PD正常对照组、PD模型组、PD地黄饮子组，各组12只。

2.2 病证结合动物模型制备 2.21肾精虚证造模方法：采用亚急性衰老动物模型模拟肾精虚，即应用腹腔注射D－半乳糖6周。

2.22 疾病造模方法：AD动物用5%的水合氯醛300mg/kg经腹腔麻醉后，将大鼠固定在立体定位仪上，于颅顶正中切口，切开皮肤，找到bregma点，参照大鼠脑立体定位图谱，定位坐标为 AP3.6mm、ML2.0mm、DV3.0mm，钻开颅骨，以微量注射器垂直进针，将用2g/L Aβ25～35（Aβ25～35用无菌生理盐水配成2g/L，－20℃保存，使用前在37℃保温箱中放置7d，使其变成凝聚态）5μL缓慢注射到鼠脑的海马CA1区，注射时间持续5min，留针5min，起针后局部消毒，用牙科胶覆盖钻孔，常规缝合伤口，连续腹腔注射青霉素1周以防治感染。假手术组除注射药物换为生理盐水外，其余操作方法同肾虚组。

PD动物：PD动物模型的制备参照赵喜林等长期低剂量皮下注射鱼藤酮的方法［1］，将鱼藤酮（1.0g/L）溶解于二甲亚砜∶生理盐水（2∶1）的混合溶剂，正常对照组皮下注射无鱼藤酮的混合溶剂，模型组皮下注射鱼藤酮（1.0mg/kg/d）［2］，分两次注射，早晚8：00各1次，连续给药4周，每周停药1d。

2.3 给药 经体表面积换算公式得出动物给药剂量，在距离造模成功剩4周时开始，AD、PD地黄饮子组给予地黄饮子中药灌胃，1次/d，至造模结束为止。同时正常对照组（AD、PD）、空手术组（AD）、模型组（AD、PD）大鼠则给予等量生理盐水灌胃，至造模结束为止。

3 指标测定3.1 样本采集 造模结束后，各组大鼠给于腹腔麻醉，开腹后抽取腹主动脉血液并离心，获取血清。

3.2 酶标仪检测 T－SOD和LOP按照试剂盒说明要求进行检测。

4 结 果地黄饮子对AD、PD大鼠血清中T－SOD、LOP的影响 见表1。

表1 地黄饮子对AD、PD大鼠血清中 T－SOD、LOP的影响（±s）

表1 地黄饮子对AD、PD大鼠血清中 T－SOD、LOP的影响（±s）

注：与模型对照组比较，△P＜0.05，▲P＜0.01

AD PD组别正常组 模型组 地黄饮组T－SOD（U/mL）124.56±24.27▲ 97.88±11.79 114.98±7.73▲113.62±8.06△ 104.09±8.50▲ 91.71±6.61 101.93±8.19正常组 模型组 空手术组 地黄饮组△LPO（μmol/L）4.47±2.55▲ 9.53±5.23 6.41±2.59△ 6.21±2.91△ 5.46±2.24▲ 8.55±2.66 4.30±1.50▲

5 讨 论由于AD和PD都属于随增龄而出现的脑老化疾病，衰老（生理性肾虚）是目前唯一可以确定的病因［3，4］。本研究采用海马内注射Aβ25～35及背部皮下长期低剂量注射鱼藤酮来制造AD与PD病的模型，长期腹腔注射D－半乳糖来造亚急性衰老状态肾精虚证的模型，病证结合。近年来，研究表明T－SOD对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用，SOD活力的高低与衰老等有着密切联系。脂质过氧化合物能破坏人体细胞正常生理功能，与衰老等生理过程有密切联系。所以本实验抽取各组大鼠血液检测T－SOD、LPO，结果表明，地黄饮子能够使AD和PD大鼠血清中T－SOD活力上升，并且降低模型大鼠血清中脂质过氧化物的含量。从而为地黄饮子干预AD与PD提供了实验依据，同时也为中医“异病同证”、“异病同治”理论在临床诊断及临床治疗中的应用提供现代科学实验依据。

［1］赵喜林，顾振纶，秦正红.长期低剂量皮下注射鱼藤酮制作大鼠帕金森病模型［J］.中国药理学通报，2005，21（10）：1274－1277.

［2］李云鹏，董兆君，王仕丽，等.重复注射鱼藤酮对中枢多巴胺神经元的毒性作用［J］.第三军医大学学报，2003，25（13）：1123－1126.

［3］Fotuhi M，Hachinski V，Whitehouse PJ.Changing perspectives regarding late－life dementia［J］.Nat Rev Neurol.2009Dec：5（12）：649－658.

［4］沈自尹，黄建华，林 伟，等.从整体论到系统生物学进行肾虚和衰老的研究［J］.中国中西医结合杂志，2009，29（6）：548－550.