SYSMEX CS5100血凝分析仪性能评估及凝血六项参考区间的调整

闫宏斌， 郑善銮， 郝晓柯

(第四军医大学附属西京医院检验科，陕西西安710032)

凝血酶原时间(prothrombin time，PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time，APTT)、凝血酶时间(thrombin time，TT)纤维蛋白原(fibrinogen，FIB)、D-二聚体(D-dimer，DD)和纤维蛋白原降解产物(fibrinogen degradation product，FDP)的联合检测，可以更全面了解人体凝血系统和纤溶系统的功能，特别是在出血性疾病和血栓病方面有重要的临床意义。我们对新引进的SYSMEX CS5100全自动血凝分析仪(简称CS5100)进行了全面的性能评价，并在此基础上建立了本实验室的临床参考区间。

材料和方法

一、研究对象

收集陕西地区健康成人222名血浆样本，其中男120例，女102例，年龄20～79岁。均为2013年5至6月来第四军医大学附属西京医院体检中心进行体检的健康体检者，经查看最终体检报告筛选各项检测指标均未见异常改变。参照临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)H21-A5 文件［1］规定采集血浆，将枸橼酸钠(0.11 mol/L)1份与静脉全血9份混合，为避免产生气泡，1500×g离心10～15min分离出血浆样本待检。

二、仪器和试剂

CS5100(日本 SYSMEX公司)。德国SIEMENS 公司 PT、APTT、TT、FIB、DD 试剂盒、质控品、缓冲液。日本一化FDP试剂盒、质控品。

三、方法

1.精密度试验 参照美国临床实验室标准化委员会(National Committee for Clinical Laboratory Standards，NCCLS)EP5-A2 文件的要求，分别选取正常和异常的质控品或混合血浆检测 PT、APTT、TT、FIB、DD和 FDP，了解仪器的重复性。(1)批内精密度:用同一批号的试剂对正常和异常3个水平混合血浆检测，2 h内连续测定10次，计算批内均值()、标准差(s)和变异系数(coefficient of variation，CV);(2)批间精密度:选取3个水平质控品近20 d的质控数据，计算20 d质控数据、s和CV。

2.准确性试验 CS5100经校准、日常维护保养后，使用配套德灵各水平的定值质控品，PT、APTT为3个水平，FIB、TT为1个水平，DD、FDP为2个水平，验证其准确性，重复测定3次，对测定的数据计算出相对偏倚(Bias%)。

3.线性范围试验 根据CLSI对线性评价的要求，选取多个高浓度患者的血浆充分混合，重复测定5次，取平均值作为接近预期上限的高浓度血浆(H)，用配套稀释液分别按100%、80%、60%、40%、20%、0%进行稀释，分别测定FIB、DD和FDP，每个稀释度重复测定2次，计算相关系数(r)值。

4.血浆样本携带污染率试验 将精密度验证的质控品水平3的8、9、10号结果标示为H1、H2、H3，质控品水平 1 的 1、2、3 号结果标示为L1、L2、L3，按公式求携带污染率。

5.可比性实验 用该仪器与厂家已知性能经过校正的SYSMEX CA7000(A2390)分析系统［简称CA7000(A2390)］平行检测20份血浆，其中包含正常、异常的样本，进行PT、APTT、FIB、TT等6个项目的对比，按1→20、20→1排序检测2次，检测后对检测结果进行相关性分析。

6.参考区间验证 严格按照试剂说明书进行试剂配置，用CS5100对选取的表面健康者222名进行PT、APTT、TT 、FIB 、DD和FDP检测，计算r值(落在参考范围内的样本数/总的试验样本数)，要求r＞0.95。检测前和检测时均用正常和异常质控进行监控，须在样本采集后2 h内完成检测。

7.参考区间的确立 对于未通过参考区间验证的项目，根据222例样本检测结果计算95%可信区间。

三、统计学方法

采用SPSS 11.0软件进行统计分析，计量资料呈正态分布，用±s表示。两组间比较采用t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、精密度试验

CS5100的重复性和稳定性检测结果见表1、表2。各项目批内 CV 均＜3.0%，PT、APTT、TT和FIB的批间 CV＜5.0%，DD和 FDP的批间CV＜6.3% 符合CLIA'88提出的血凝分析仪指标质量分析要求。

表1 CS5100重复性测定结果(批内)

表2 CS5100重复性测定结果(批间)

二、准确度实验

根据NCCLS相关标准，PT、APTT、FIB的总允许误差分别为±15% 、±15%、±20%，TT、DD和FDP的总允许误差暂参照FIB标准执行。结果显示，CS5100的偏差均在允许误差范围内。见表3。

三、线性实验

各浓度的DD、FIB和FDP测定值和标准值之间具有良好的线性关系，r值分别为0.997 4、0.999 8、0.996 8，均＞0.975，表明测定值和理论值高度相关，a 值分别为0.983 0、1.022 4、0.990 6，在所要求的1±0.05范围内，见图1。

表3 CS5100准确度实验测定结果

图1 CS5100线性实验

四、携带污染实验

PT、APTT、TT、FIB、DD和 FDP 的携带污染率均＜2.0%，见表4。仪器自洁系统良好。

五、与CA7000(A2390)的比对

2 种系统对 PT、APTT、TT、FIB、DD和 FDP 的回归方程的R2均＞0.975，回归斜率＞0.95而＜1.05。见图2。

表4 CS5100携带污染率

图2 CS5100与CA7000(A2390)的能力比对线性回归图

六、参考区间验证结果

TT、DD和FDP的r均＞0.95，表明厂家推荐的参考区间适用于本实验室。PT、APTT、FIB的r＜0.95，其推荐参考区间不符合本实验室参考区间要求，需要重新建立PT、APTT、FIB的实验室参考区间。见表5。

七、PT、APTT、FIB实验室参考区间的建立

对222名健康体检者的生理、生化指标的观察值采用正态分布法，求PT、APTT、FIB的95%参考区间的上下限。PT的下限值为－1.96s=11.66－1.96×0.658≈10.4，PT的上限值为+1.96s=11.66+1.96×0.658≈13.0，本实验室PT参考区间为10.4～13.0 s。APTT的下限值为－1.96s=24.91－1.96×2.761≈19.5，APTT的上限值为+1.96s=24.91+1.96×2.761≈30.3，本实验室APTT(以白陶土为激活剂)参考区间为19.5～30.3 s。FIB的下限值为－1.96 s=2.60－1.96× 0.489≈1.6，FIB 的上限值为+1.96 s=2.60－1.96×0.489≈3.6，本实验室 FIB 参考区间为1.6～3.6 g/L。

八、222名不同性别健康成人凝血指标的检测结果

不同性别健康成人凝血各指标差异均无统计学意义(P＞0.05)。见表6。

表5 CS5100参考区间验证结果

表6 性别分组凝血指标结果比较(±s)

表6 性别分组凝血指标结果比较(±s)

女性组 102 11.6±0.70 24.8±2.1 2.58±0.59 17.8±2.13 0.08±0.09 0.50±0.43 P值＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05

讨 论

目前，国内越来越多的医院已经采用了全自动血凝分析系统，而且随着科技的发展，全自动血凝仪为我们提供了高性能、高精密度和高效率的自动化分析水平，同时也准确地为临床提供有价值的检验结果。尽管血凝仪在装机时仪器厂商已提供了仪器性能的初步参数，但由于各实验室之间的差异，在仪器使用前必须对性能参数重新评估。本研究参照国际血液学标准化委员会(International Council for Standardization in Haematology，ICSH)制定的评价内容，对CS5100进行精密度、准确度、线性范围、携带污染率、比对实验等方面的评价。研究表明，以CLIA'88的室间质评能力(PT)为参考标准［2］，TT、DD和 FDP由于无室间质评能力要求，因此TT、DD和FDP批内CV参照厂家标准，批间参照FIB标准(本实验室对TT、DD和FDP的室内质控经过2年的累计，发现与FIB的CV很接近，故暂按FIB的室间质评标准判断)进行评价。PT、APTT的批内CV符合规定允许误差(3.75%)的1/4，FIB的批内CV符合允许误差(5.0%)的1/4，TT、DD和FDP的批内CV允许值符合厂家标准(10.0%、7.8%、10.0%)。PT、APTT 的批间 CV 符合允许误差(5.0%)的 1/3，TT、FIB、DD和 FDP 的批间 CV符合允许误差(6.67%)的1/3，说明该仪器具有良好的重复性和稳定性。准确度实验表明偏差在允许范围内，提示仪器具有较高的准确度。线性实验和携带污染实验也表明仪器具有良好的检测线性关系和自洁系统，比对实验中可见与CA7000(A2390)的相关性良好，保证了实验室结果的一致性。各实验室均应根据自己实验条件的不同建立自己实验室的参考区间［3］。此外，由于各实验室在仪器、试剂、环境和地域人群等方面有所不同，所以本实验室进一步建立了适用于自己实验室的参考区间。首先对厂家推荐的PT、APTT、TT、FIB、DD和FDP的参考区间进行验证，以结果r＞0.95为判断标准，TT、DD和FDP的推荐参考区间适用于本实验室，而PT、APTT、FIB的r值分别为0.81、0.81、0.91，因此通过统计方法计算其参考区间分别为10.4～13.0 s、19.5～30.3 s、1.6～3.6 g/L。此外，男、女之间血凝指标各参数值的差异无统计学意义(P＞0.05)，与相关文献报道一致。

PT、APTT分别为外源性和内源性凝血因子的首要检测指标［4］，TT主要是对血中循环抗凝物质如肝素等的筛查［5］，FIB主要用于纤溶筛查［6］，DD不仅可作为急性脑梗死病程判断及疗效观察的有用指标［7］，而且还是一种最简便、可靠的急性肺栓塞筛选指标［8］，DD在临床上已被视为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物，对高凝状态和血栓性疾病的诊断及预后判断有一定实用价值，FDP联合DD检测可以区分原发和继发性的纤溶亢进，上述6种指标不仅可用于凝血功能的筛选，而且可应用于口服抗凝药物的监控、肝素和溶栓治疗的监控以及弥漫性血管内凝血的筛查等，因此，本研究在进行系统的仪器性能评估后，进一步验证了厂家推荐的参考区间，建立起适用于本实验室的临床凝血项目参考区间，旨在为临床提供更加精准、可靠、有价值的检验结果，在协助临床诊断、疗效观测方面具有重要意义。

［1］Clinical and Laboratory Standards Institute.Collection，transport，and processing of blood specimens for testing plasma-based coagulation assays［S］.H21-A5，CLSI，2008.

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