HPLC法测定珍龙醒脑胶囊中西红花的含量

任松鹏 孙绪丁 赵延霞 魏永义

[摘要] 目的 建立藏药珍龙醒脑胶囊中西红花的西红花苷Ⅰ、Ⅱ的高效液相色谱法（HPLC）含量测定方法。方法 Waters C18色谱柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm），流动相为乙腈-体积分数比1%冰醋酸水溶液（25∶75）；流速为1.0 mL/min，检测波长440 nm，柱温为室温。结果 西红花苷Ⅰ在6.03～60.30 μg/mL，西红花苷Ⅱ在3.01～30.10 μg/mL浓度范围内均与色谱峰峰面积呈良好的线性关系，相关系数r分别为0.9997、0.9999；西红花苷Ⅰ、Ⅱ的平均回收率分别为97.80%、97.44%，RSD分别为0.66%（n=6）、1.71%（n=6）。结论 该方法可同时测定制剂中的西红花苷Ⅰ、Ⅱ，可用于珍龙醒脑胶囊的质量控制。

[关键词] 珍龙醒脑胶囊；西红花苷Ⅰ；西红花苷Ⅱ；HPLC；含量测定

[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）02（b）-0020-02

珍龙醒脑胶囊由珍珠、天竺黄、西红花、丁香、肉豆蔻等29味藏药制成的藏药成方制剂，具有开窍醒神、消热通络的作用，西红花为该制剂处方中的君药，具有很强的中枢降压、抗炎和治疗软组织损伤的药理活性[1-2]，其因此控制方中西红花所含西红花苷含量变得尤为重要。而现行标准[3]未对西红花进行质量控制，也尚未发现关于珍龙醒脑胶囊中的西红花测定的文献报道。为了更加有效的控制该制剂的质量，该研究首次建立了珍龙醒脑胶囊中西红花的两种西红花苷类成分西红花苷Ⅰ、Ⅱ的HPLC含量测定方法，经方法学考察，结果表明：该方法具有良好的分离效果、较高的灵敏度、方便快捷、准确可靠等优点，能够更加有效的控制珍龙醒脑胶囊的质量。现报道如下。

1 仪器

高效液相色谱仪：日立L-2100型泵，日立L-2400紫外检测器；电子天平：岛津AUW220D型；紫外分光光度计：岛津UV-2450型；超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司KQ-300B。

2 方法与结果

2.1 测定溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ适量加稀乙醇制成，每1 mL中含西红花苷Ⅰ30 μg、西红花苷Ⅱ15 μg的对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 本品研细后，取粉末0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，避光，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，称定重量，冰浴中超声30 min，放至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。同法制得西红花阴性对照溶液。

2.2 色谱条件及系统适应性试验

色谱柱为Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈- 1%冰醋酸（25∶75），流速为1.0 mL/min，检测波长440 nm；分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL，测定。结果表明：西红花苷Ⅰ、Ⅱ与其它组分的分离度均>1.5；阴性对照不干扰样品测定。

2.3 线性关系考察

精密量取不同浓度西红花苷Ⅰ、Ⅱ混合溶液，依上述“2.2”项的色谱条件进行测定，以色谱峰峰面积（A）分别对西红花苷Ⅰ、Ⅱ对照品浓度（C）进行线性回归。结果表明：西红花苷Ⅰ在6.03～60.30 μg/mL，西红花苷Ⅱ在3.01～30.10 μg/mL浓度范围内均与色谱峰峰面积呈良好的线性关系，相关系数r分别为0.999 7、0.999 9。

2.4 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液，依上述“2.2”项的色谱条件进行测定，连续进样测定6次，计算峰面积相对标准偏差RSD%=1.05%，结果表明：仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

取“2.1.2”项的方法制备供试品溶液，依法测定，记录峰面积，以后每隔2 h测定1次，考察8 h，结果表明：供试品溶液中的西红花苷Ⅰ、Ⅱ在8 h内测定结果稳定。

2.6 重复性试验

精密称取同一批珍龙醒脑胶囊样品6份，依上述“2.1.2”项的方法制备供试品溶液，依上述“2.2”项的色谱条件进行测定，结果表明：该分析方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验

别精密称取珍龙醒脑胶囊样品6份，置具塞的锥形瓶中，各精密加入混合对照品溶液适量，按“2.1.2”项下的供试品制备方法制成供试品溶液，按照“2.2”项下的色谱条件进行测定，试验结果：供试品中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的平均回收率分别为97.80%、97.44%，RSD分别为0.66%、1.71%。

2.8 样品含量测定

取珍龙醒脑胶囊3批样品，依上述“2.1.2”项的方法制备供试品溶液，按照“2.2”项下的色谱条件进行测定，按外标法分别计算供试品中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的含量，见表1。

3 讨论

参考相关文献[4-5]，对供试品溶液的制备方法进行了研究，结果表明：采用甲醇为提取溶剂提取西红花苷Ⅰ、Ⅱ含量结果较高；常温超声比冰浴超声西红花苷Ⅰ、Ⅱ含量低，故未进行回流提取试验；提取时间20 min、30 min、40 min西红花苷Ⅰ、Ⅱ含量结果一致，为保证提取完全，选择提取时间30 min。故最后确定的提取方法为甲醇冰浴超声30 min提取。

参考相关文献[4-5]，对色谱系统进行筛选，乙腈- 1%冰醋酸体系作为检测珍龙醒脑胶囊中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的流动相，而且乙腈-冰醋酸 （15～30∶85～70）均能达到含量检查要求，其中以乙腈- 1%冰醋酸 （25∶75）条件下效果最好，西红花苷Ⅰ、Ⅱ保留时间分别约为5.3 min、9.9 min，峰形较好。

[参考文献]

[1] 刘瑛，古天明，周红.西红花苷类成分药理作用研究概况[J].成都大学学报：自然科学版，2008（1）：16-19 .

[2] 孙创斌，刘艳霞，刘国清，等.西红花的药理研究进展[J].西南国防医药，2011，21（8）：914-916.

[3] 国家食品药品监督管理局.中华人民共和国药品标准WS-10708（ZD-0708）-2002-2012Z[S].北京：国家食品药品监督管理局.

[4] 梁华正，丁武辉，袁东香，等.栀子中西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的高效液相色谱法测定[J].时珍国医国药，2012（10）：2386-2388.

[5] 何常明，谢晓梅，何美莲，等.西红花中西红花苷-1和西红花苷-2含量测定方法的建立[J].药物分析杂志，2006（9）：1270-1273.

（收稿日期：2014-01-05）