黄精多糖对阿托伐他汀在大鼠体内药代动力学的影响

朱春红，万盟，李维，朱余兵

(1.海南省皮肤病医院 药剂科，海南 海口 570206;2.南京医科大学附属南京医院 药学部，江苏 南京 210006)

黄精多糖(polygahatous polysaccharides，PSP)是我国传统药物黄精中的重要成分，近年研究表明，PSP具有调血脂、抗缺氧损伤、抗动脉粥样硬化等作用［1-2］。阿托伐他汀是3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，其作用机制是抑制胆固醇的合成、降低血清低密度脂蛋白(LDL)含量及降低血清甘油三酯水平等［3-4］，临床广泛用于治疗冠心病与血脂异常等疾病，疗效确切显著。但长期临床研究发现，阿托伐他汀易引起一些不良反应，包括横纹肌溶解、肝肾功能损伤等［5-6］。本研究旨在观察PSP与阿托伐他汀合用后，PSP对阿托伐他汀的药动学参数是否有影响，为PSP的临床应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验主要仪器:Agilent1100高效液相色谱仪，配有二元高压泵、自动进样器、温控系统、紫外检测器;TGL-16G高速台式离心机(上海安亭仪器厂);电子天平(Mettler Toledo仪器有限公司)。

1.1.2 药品与试剂:阿托伐他汀钙对照品(中国食品药品检定研究院，99.6%，批号100590－200902);阿托伐他汀钙片(辉瑞制药有限公司，批号J20070061);PSP(江苏省中医院制剂部提供20120322);醋酸铵(天津市风船化学试剂科技公司，纯度≥98%，批号 20100506);乙腈为色谱纯(默克公司，批号JA025730);实验用水为双重蒸馏去离子水。

1.1.3 实验动物:雄性SD大鼠16只，体质量(240±20)g，动物许可证号:SCXK2008-0011，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 给药方法:取大鼠16只，随机分为对照组(阿托伐他汀)和试验组(PSP+阿托伐他汀)，每组8只。对照组每天1次按10mL/kg容积灌胃给予蒸馏水，试验组每天1次按400mg/kg的剂量灌胃给PSP水溶液，7d后2组大鼠禁食不禁水12 h，分别按10mg/kg的剂量一次性灌胃给予阿托伐他汀水溶液。所有大鼠分别于给药前和给药后5，10，20，30，45，60，80，100，120，150，180，240，360 min 从眼内眦取血 300 μL。置肝素化试管中，4 000 r/min离心 5 min，取上层血浆 120μL，立即置－20℃冰箱保存。

1.2.2 血浆样品处理:精密吸取100μL血浆，加入400μL乙腈，涡旋混合1 min，12 000 r/min离心5 min后，取上清液400μL，以空气流吹干，加入流动相100μL，涡旋混合，12 000 r/min离心5 min，自动进样器精密吸取20μL进样，并记录色谱图。

1.2.3 色谱条件:色谱柱:Hypersil C18(150 mm×4.6 mm，5μm);流动相:乙腈－0.1 mol/L醋酸铵缓冲液(45∶55)，pH 4.0;流速:1.0mL/min;柱温:30℃;检测波长:270 nm;进样量:20μL。

1.2.5 标准溶液制备:精密称取阿托伐他汀对照品2mg置10mL棕色容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为199.2μg/mL的对照品贮备液，4℃下保存待用。

1.2.6 阿托伐他汀血浆标准曲线的制备:精密吸取不同体积的阿托伐他汀标准溶液适量，吹干后分别加入100μL大鼠空白血浆，涡旋混合后使其浓度分别为9.96，19.92，49.8，99.6，249，498μg/L，按1.2.3项下方法操作，以阿托伐他汀峰面积(Y)对阿托伐他汀浓度(X)为作线性回归计算。

1.2.7 血浆样品测定方法的精密度和回收率试验:配制19.92，99.6，498μg/L 3种质量浓度的阿托伐他汀血浆样品，每个质量浓度平行5份，按1.2.3项下进行操作，在一天内测定5次，记录色谱图，考察日内和连续3日的变异情况，计算日内及日间精密度。另将3种质量浓度的峰面积，与相应浓度的标准对照品直接进样所得的峰面积之比求算提取回收率。

1.3 统计学方法 按标准曲线计算每只大鼠各时间点血药浓度并绘制药-时曲线。采用DAS2.11药动学统计软件对其进行自动拟合处理，得到每只动物的药代动力学参数。正态计量数据用“±s”表示，组间采用t检验进行比较。

2 结果

2.1 专属性实验结果 按1.2.2项的方法操作，对3组血浆样品进行分析。目标化合物能有效分离，并且峰形良好，无杂峰干扰，表明该方法具有较高的特异性，可以用于测定阿托伐他汀的血浆浓度，色谱图见图1。

图1 血浆中阿托伐他汀色谱图A.空白血浆组;B.空白血浆+阿托伐他汀组;C.大鼠口服阿托伐他汀后1 h的血浆组;1－阿托伐他汀Fig.1 HPLC chromatograms of atorvastatin in plasma of ratsA.blank plasma;B.blank plasma+atorvastatin;C.plasma sample at 1 hour after oral adminstration of atorvastatin;1-atorvastatin

2.2 阿托伐他汀血浆标准曲线 按1.2.2项下方法操作，以阿托伐他汀峰面积(Y)对阿托伐他汀浓度(X)为作线性回归计算。得血浆中阿托伐他汀的标准曲线Y=27.18X+21.54，r=0.9998(n=6)。结果表明，阿托伐他汀血药浓度在9.96～498 μg/L范围内线性关系良好。

2.3 血浆样品测定方法的精密度和回收率试验结果 血浆样品测定方法的精密度和回收率试验结果见表1。

表1 精密度与回收率试验结果Tab.1 Results of precision and recovery test

2.4 药物浓度曲线 对照组与试验组的阿托伐他汀平均血药浓度－时间曲线，结果见图2。

图2 阿托伐他汀与阿托伐他汀+PSP的阿托伐他汀平均血药浓度-时间曲线(n=8)Fig.2 Mean concentration-time profiles of atorvastatin group and combination group(n=8)

2.5 药动学参数 对照组及试验组血药浓度-时间经DAS2.11软件处理，算出2组的主要药动学参数。统计结果表明，大鼠体内的阿托伐他汀在对照组与试验组的药代动力学参数均无著性变化(见表2)。

表2 阿托伐他汀与阿托伐他汀+PSP 2组大鼠体内阿托伐他汀药动学参数统计结果(n=8)Tab.2 Statistical results of pharmacokinetic patameters of atorvastatin group and combination group in rats(n=8)

3 讨论

阿托伐他汀阻断细胞内甲羟戊酸代谢途径，使细胞内胆固醇合成减少。除了具有降低血清总胆固醇(TC)、升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-ch)作用外，还发现它具有抗炎、改善血管内皮功能、抑制血小板激活、降低血液黏度、抑制凝血、防止血栓形成及稳定、阻止、消退粥样斑块等作用，广泛用于动脉粥样硬化、心肌梗死、心力衰竭等心脏疾病中［7-9］。“冠心平”是通过历代文献回顾和现代临床观察根据冠心病基本病机研制而成的中成药，其药物配伍组成在临床应用已有近十年。文献［10-11］表明其可以调节脂质代谢，防治动脉粥样硬化。从而增加冠脉血流量，减轻心肌缺血缺氧，达到治疗冠心病的目的。对于“冠心平”的作用机制研究本研究室也进行了一系列的探索［12-13］。黄精是制剂“冠心平”中的主要组成部分，同时也广泛的存在于调血脂、治疗冠心病的中成药制剂当中。

PSP是黄精的主要成分，在前期实验中，在对冠心平试验研究基础上，开展PSP的作用机制探讨，发现PSP具有良好的调节血脂，抗氧化损伤，保护血管内皮细胞的作用［14-15］。目前关于其体内代谢研究较少，而PSP对阿托伐他汀体内药动学的影响一直未见报道。在本研究中，采用乙腈－0.1 mol/L醋酸铵缓冲液(pH 4，45∶55)为流动相，杂质峰对样品峰干扰小，保留时间适宜。为了充分观察阿托伐他汀与PSP合用后药动学参数的变化，本实验PSP采用多次给药方式，可以充分体现2药长期合用的影响。结果显示，联用PSP后，阿托伐他汀在大鼠体内的药代动力学参数与单用阿托伐他汀比较均无著性变化。因此初步认为，PSP对阿托伐他汀在大鼠体内的药代动力学无影响。但在人体内的影响是否与大鼠相同，尚需要进一步探讨。

［1］李友元，邓洪波，向大雄，等.黄精多糖的降血脂及抗动脉粥样硬化作用［J］.中国动脉硬化杂志，2005，13(4):429-431.

［2］张萍，刘丹，李友元.黄精多糖对动脉粥样硬化家兔血清IL-6及CRP 的影响［J］.医学临床研究，2006，23(7):1100-1101.

［3］Shin J，Pauly DF，Pacanowski MA，etal.Effect of cytochrome P450 3A5 genotype on atorvastatin pharmacokinetics and its interaction with clarithromycin［J］.Pharmacotherapy，2011，31(10):942-950.

［4］Furman A，Meier JL，Malmstrom RA，etal.Comparative efficacy of ezetimibe/simvastatin，rosuvastatin，and atorvastatin in uncontrolled hyperlipidemia patients［J］.Am JManag Care，2011，17(8):538-544.

［5］Yu XL，Zhang HJ，Ren SD，etal.Effects of loading dose of atorvastatin before percutaneous coronary intervention on periprocedural myocardial injury［J］.Coron Artery Dis，2011，22(1):87-91.

［6］Robinson JG，Ballantyne CM，Grundy SM，etal.Lipid-altering efficacy and safety of ezetimibe/simvastatin versus atorvastatin in patients with hypercholesterolemia and the metabolic syndrome(from the VYMET study)［J］.Am J Cardiol.2009，103(12):1694-1702.

［7］牟会举，高兴浩.阿托伐他汀的应用与研究概况［J］.中国医院用药评价与分析，2013，13(6):570-572.

［8］张优佳，高茜吴，三妮，等.阿托伐他汀钙在高血压患者抗动脉粥样硬化治疗中的临床疗效观察［J］.中国现代药物应用，2013，7(21):17-18.

［9］刘子兴.阿托伐他汀治疗冠心病心绞痛临床疗效研究［J］.实用心脑肺血管病杂志，2014，22(1):24-25.

［10］李七一，张洪斌.冠心平治疗冠心病心绞痛56例分析［J］.中医药学刊，2003，21(10):1752-1753.

［11］韩旭，李七一，蒋萌，等.冠心平片治疗冠心病心绞痛患者33例临床观察［J］.中医杂志，2013，54(21):1840-1846.

［12］万盟，朱萱萱，李七一，等.冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤炎性因子水平的影响［J］.中华中医药学刊，2011，29(12):2631-2633.

［13］万盟，李七一，朱萱萱，等.冠心平对动脉粥样硬化金黄地鼠NO、NOS、ET、AngII水平的影响［J］.中华医药学刊，2012，30(3):532-534.

［14］倪文澎，朱萱萱，王海丹.黄精多糖对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护机制研究［J］.中华中医药学刊，2012，30(12):2644-2646.

［15］陈广，严士海.黄精多糖对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的保护作用［J］.时珍国医国药，2011，22(3):623-624.