几种精液处理方法在宫腔内人工受精中的选择

张斓，刘灿华

(吉安市中心人民医院1、核医学科2、输血科，江西 吉安343000)

随着辅助生殖技术的迅速发展，精液体外处理的方法也越来越多，每一种方法都有其优缺点。洗涤法是精子经过洗涤可有效去除精液中的前列腺素，去获能因子，抗精子抗体等，使精子获能，提高精子受精能力，但不能很好去除白细胞、细胞碎片、细菌及死精子等。标准上游法是利用精子具有主动游过液体界面进入不同培养液的能力，而达到自行与死精、凝集精子、畸形精子和细胞杂质分离的目的。获得的精子活力、活率较高，达90%以上。但却存在精子回收率较低的缺点,仅适用于精子活动力、密度均正常的患者。而Isolate密度梯度离心法则是利用不同成熟阶段的精子和各种细胞成分各自的密度差异，使之在不同浓度的溶液中，在离心力作用下停留在不同密度的界面上，达到较好的分离目的，处理后精子数回收较高，处理的时间短，但由于离心时间长，可能对精子造成物理损伤如顶体的松动或不完整等，处理后死精子相对标准上游法多，回收的精子活动率较标准上游法低，可能引起精子受精功能下降等[1]。

1 材料与方法

1.1 临床资料 选取在本院2009年1月至2012年12月98例夫精宫腔内人工受精 (IUI)患者，共162个周期为研究对象，年龄22～38岁，平均(26.5±4.5)岁，原发性不孕62例，继发性不孕36例，不孕时间2～8年。不孕、不育原因：男性因素(少、弱精，心理因素，射精功能异常，液化异常，免疫性因素)70例，女性因素(轻、中度子宫内膜异位症，宫颈黏液分泌异常，排卵障碍，免疫性因素)26例，不明原因性不孕2例。根据患者精液质量情况，接受IUI时选择的精液处理方法分成三组。其中80个周期采用梯度离心法处理精液为一组，62个周期采用标准上游法处理精液为一组，20个周期采用两次洗涤处理精液为另一组。

1.2 设备与试剂 WLJY-9000伟力彩色精子分析仪、超净工作台(苏州净化)、水平离心机、二氧化碳培养箱、HTF-HEEPS、10%SSS、Isolate 精子分离液等。

1.3 处理方法

1.3.1 精液的采集 禁欲3～5d，在IUI日手淫法留取整份精液在无毒性一次性取精杯中，放入37℃恒温培养箱中等精液完全液化后处理。

1.3.2 精液的处理 两次洗涤法：一份精液加一份10%SSSHTF-HEEPS 稀释，200g×10min，去上清液，沉淀加2ml10%SSSHTF-HEEPS混匀，离心洗涤两次后，沉淀加0.5ml10%SSSHTF-HEEPS混匀做受精用。标准上游法：取试管数支，每管加入2.0ml精子培养液。再分别将0.5ml液化精液慢慢加入试管底部，使其形成两个界面。加盖，45°倾斜，置于37℃、5%CO2孵箱中30～60min。收集各管上清液，离心200g×5min，弃上清液，加2ml培养液，打允后离心200g×5min。留沉淀物，加0.5ml培养液制成精子悬液，调整精子浓度 10×106～30×106/ml备用[2]。

Isolate密度梯度离心法：向锥底离心试管内分别加入Lower phase和Upper phase各1ml、精液2 ml，300g×20min，弃上清液，留沉淀物，加 2ml洗精液，打匀后，离心200g×5min，重复洗涤2次后，弃上清液。留沉淀物，加0.5ml培养液制成精子悬液备用。

2 结果

精液处理前应取少许精液涂片在显微镜下观查：精液的密度、活力、活率等，并根据检验结果选择相应的精液处理方式。三组妊娠率比较见表1，三组精液处理方法在处理前、后精子密度、活率、活力比较见表2。标准上游法、密度梯度离心法两组之间妊娠率无显著差异 (P＞0.05),标准上游法、密度梯度离心法组与两次洗涤法组之间妊娠率有显著差异(P＜0.05)；标准上游法、密度梯度离心法组与两次洗涤法组处理后精子密度、活率、活力有显著差异(P＜0.05)。

表1 三种方法处理后妊娠率比较

表2 三种方法处理前、后精子密度、活率、活力比较

3 讨论

影响宫腔内人工受精的因素很多，而临床提高人工受精的妊娠率的关键是适应症的选择，精子的处理方法，排卵的监测，IUI的时机选择等。因此，选择相应的精液处理方法是人工受精取得成功的关键之一。综上所述,笔者认为，女方因素引起的不孕(如多囊卵巢等)，排除男方因素，宜采用标准上游法优选精子；男方因素引起的不育[3](如少精、弱精及精液量不足1ml)宜采用梯度离心法优选精子较好；男方因素引起的不育[3](如活力、活率太低)排除女方因素，宜采用洗涤法。总之，根据患者精液情况，采用相应的处理方法，以提高临床妊娠率，服务于更多的患者。

[1]刘灿华,张斓,陈铭,等.梯度离心法与标准上游法在宫腔内人工授精(IUI)中应用比较[J].泰山医学院学报,2010,31(6):469-470.

[2]邓晓惠.生殖医学技术及其彩色图谱[M].济南：山东科学技术出版社,2004:45.

[3]罗明,卢雪芳,饶研文.精浆锌浓度检测在不育症患者中的临床应用[J].实验与检验医学,2008,26(3):259-260.