Ki-67在乳腺癌中的表达及临床价值

鲁亮，张汉群，杨飞月，张赟，罗旻，曹辉

(贵州省人民医院肿瘤科，病理科,贵州550002)

孕激素受体(progesterone receptor，PR)、雌激素受体(estrogen receptor，ER)和人类表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2，HER-2)是评价乳腺癌治疗效果和判定预后的生物学指标。而Ki-67渐渐成为近年来一个新的研究热点。本文通过对86例乳腺癌病人的临床资料进行分析，探讨Ki-67于乳腺癌各亚型中的表达及临床价值。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集贵州省人民医院肿瘤科2011年1月-2012年12月收治的86例乳腺癌患者，筛出满足下列条件的病例：(1)女性；(2)有手术指征；(3)术后病理诊断为乳腺癌；(4)手术行了腋窝淋巴结清扫；(5)术前未行化放疗和内分泌治疗。共86例患者的临床病理资料(我院病理科出示的病理报告)。患者年龄20～76岁，中位年龄49岁，年龄≤35岁者9例(10.5%)，>35岁者 77例(89.5%)。 Tis 5例(5.8%)，T1 46 例(53.5%)，T2 29 例(33.7%)，T3 4 例(4.7%)，T4 2例(2.3%)。腋窝淋巴结有转移者36例(41.9%)，无转移者50例(58.1%)。按照第7版AJCC乳腺癌TNM病理分期标准：0期5例(5.8%)，Ⅰ期24例 (27.9%)，Ⅱ期41例 (47.7%)，Ⅲ期16例(18.6%)。组织学类型：浸润性导管癌75例(87.2%)，浸润性小叶癌6例(7.0%)，导管原位癌5例(5.8%)。

1.2 免疫组化检测 使用免疫组化二步法进行病理诊断。石蜡切片脱蜡后，用蒸馏水冲洗，PBS液浸泡5 min，置于pH 6.0的枸橼酸液中，于120℃的高压锅中抗原修复6 min，冷却至常温。使用3%H2O2于常温下温育5～10 min，为消除内源性过氧化物酶的活性，用PBS冲洗3次，每次2 min。分别滴加 Ki-67、PR、ER、HER-2 一抗工作液，于 37 ℃温育1～2 h。用PBS冲洗3次，每次2 min。滴入试剂 1(Polymer Helper)，37℃温育 20 min，用 PBS 冲洗3次，每次2 min。滴入试剂2(多聚过氧化物酶抗兔及抗鼠抗体)，常温温育20～30 min，用PBS冲洗3次，每次2min。使用DAB显色剂显色5～8 min。清水充分冲洗，采用苏木素复染，脱水至透明、封片。

1.3 结果评定 PR及ER阳性判断标准：肿瘤细胞少于5%的细胞核呈较弱棕黄色或无细胞核呈棕黄色为阴性，>5%的细胞核呈棕黄色为阳性。Ki-67阳性定位于细胞核染色，以视野中出现阳性细胞所占的比例进行计数，任意每5个高倍视野中出现阳性细胞数所占比例的平均值为阳性细胞数百分比并作为判定依据。HER-2阳性评定标准：细胞膜呈现棕黄染色为阳性。<10%的细胞膜呈较弱染色或无细胞膜染色为(-)；>10%的细胞膜呈现部分较弱染色为(+)；>10%的细胞膜完全呈较弱至中等染色为(++)；>10%的细胞膜呈现全强染色为(+++)。因未对HER-2(++)的病例行进一步FISH检测，故将结果(++)及以者下定为阴性，(+++)者定为阳性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件进行统计分析，资料计数比较采用χ2检验，P<0.05有统计学意义。

2 结果

临床病理特征和Ki-67指数的关系:>35岁与≤35岁的患者间Ki-67指数无统计学意义 (P=0.078)。肿瘤直径≤2 cm的患者Ki-67指数低于肿瘤直径>2 cm患者(P=0.002)。淋巴结有转移与无转移者Ki-67指数无差异(P=0.214)。病理分期为Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ期患者的Ki-67指数均明显高于病理分期为0期者(P<0.05)，而Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ期三者间的Ki-67指数无差异(P>0.05)。PR(-)患者Ki-67指数明显高于 PR(+)者(P<0.001)；ER(-)患者 Ki-67 指数明显高于 ER(+)患者(P<0.001)；HER-2(+)患者的 Ki-67指数明显高于 HER-2(-)者(P=0.011，表1)。

表1 乳腺癌临床病理特征与Ki-67的关系

3 讨论

Gerdes等于1983年发现Ki-67，是细胞增殖中表达的一种核抗原。Ki-67在细胞分裂中的S期后期及G2期表达明显增加，M期时达到高峰，细胞分裂的后期及末期快速下降；而在S期早期及G1期表达水平较低，在G0期基本不表达。对于Ki-67的这个显著特点，被认为是能够有效评估细胞增殖的一个重要指标。文献报道，正常乳腺组织和乳腺癌组织中Ki-67的表达存在明显差异，正常乳腺组织 Ki-67显低表达(<3%)[1，2]。 Fasanella等[3]报告315例乳腺癌的Ki-67阳性指标为36%±14%，与本研究结果类似。在本项研究中，不同年龄的患者Ki-67之间无差异(P=0.078)。对于肿瘤大小与Ki-67的关系，较早报道两者呈正相关[4]，而Inwald等报道两者间无关[5]。该研究显示肿瘤较大者Ki-67指数增高(P=0.002)。对于腋窝淋巴结转移和Ki-67的关系，部分研究认为，Ki-67和淋巴结转移呈正相关[6]。Park等报道两者无关[7]，本项研究的结果显示，Ki-67指标与淋巴结转移无明显相关(P=0.214)。 Ki-67与病理分期相关(P=0.001)，进一步分析显示，病理分期为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期Ki-67指数均明显高于病理分期为0期者(P<0.05)，而Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期三者间的Ki-67指数无差异(P>0.05)。结果提示，Ki-67指标主要与肿瘤局部的增殖相关，并不能反应区域淋巴结的情况。

关于Ki-67与ER、PR的关系，有报道呈正相关[8]；也有报道呈负相关[9]。本研究结果显示，ER、PR表达为阴性者，Ki-67指数明显高于ER、PR表达阳性者(P<0.001)。因ER、PR阳性的乳腺癌对内分泌治疗有效，预后比ER、PR阴性的乳腺癌较好，故可以推测Ki-67高表达的乳腺癌患者预后可能较差。关于Ki-67和HER-2表达有报道呈正相关[10]，也有呈负相关的报道[11]。本研究显示HER-2阳性者Ki-67指数明显高于HER-2阴性者 (P=0.011)。若HER-2呈过度表达，患者预后较差已成定论，由此可以推测Ki-67高表达的患者预后较差。

本项研究提示，乳腺癌的发生、发展过程中，Ki-67和ER、PR、HER-2之间可能存在着某种关系，Ki-67的高度或高表达可能是一个不良预后因素。目前仍缺乏统一的Ki-67检测和评估方案，尚缺乏大样本的前瞻性研究，现Ki-67不能成为公认的乳腺癌预后指标。尽管如此，Ki-67很可能是继HER-2之后又一个重要的生物预后指标[12]，将在乳腺癌的预测预后和指导治疗方面发挥着重要的作用。

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