高效液相色谱法测定清眩丸中欧前胡素含量

彭春梅，赵 英

(内蒙古自治区人民医院，内蒙古 呼和浩特 010017)

清眩丸是由川芎、白芷、薄荷等5味药材的生药原粉加水制得的水丸，具有散风清热的功效，主治风热头晕目眩、偏正头痛、鼻塞牙痛[1]1127。欧前胡素是方中白芷的主要活性成分[2]，具有兴奋交感神经、抗炎镇痛等作用[3－4]。为了控制清眩丸的质量，笔者选定欧前胡素为指标性成分，并用高效液相色谱(HPLC)法[5]对其进行含量测定。现报道如下。

1 仪器与试药

Lab Alliance高效液相色谱仪;Anastar色谱工作站。欧前胡素对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110826－200307);清眩丸(赤峰大吉药业集团有限公司);甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱:Agilent Zorbax SB －C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:甲醇－水(62∶38);流速:1 mL/min;检测波长:248 nm;柱温:40℃。理论板数按欧前胡素峰计算应不低于2 500。

2．2 溶液制备

取欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含10 μg的溶液，即得对照品溶液。取装量差异项下的本品，研碎，取本品粉末(过4号筛)约0．5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)45 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取方中除白芷外其余4味药材制得的阴性样品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性试验:分别精密吸取对照品溶液5 μL、供试品溶液和阴性对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪。结果阴性对照品溶液色谱中，在与供试品、对照品溶液色谱欧前胡素峰保留时间相应位置上无吸收(图1)，表明方中其他成分对欧前胡素含量测定无干扰，方法的专属性良好。

线性关系考察:精密称取欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含欧前胡素16．6 μg的对照品溶液。分别精密吸取该溶液 0．1，0．3，0．5，0．7，0．9 mL，置 10 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取上述溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图[6]，测定其峰面积，以峰面积积分值(Y)为纵坐标、欧前胡素进样量(X，ng)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=2 990．4 X －152．6，r=0．999 1(n=5)。结果表明，欧前胡素进样量在16．6～149．4 ng范围内与峰面积呈良好线性关系。

稳定性试验:分别精密吸取同一供试品溶液10 μL，于制备后 0，3，6，9，12 h 时进样，测定峰面积。结果的 RSD 为 0．93%(n=5)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

精密度试验:精密吸取同一供试品溶液10 μL，按拟订色谱条件重复进样5次，测定峰面积。结果的 RSD为1．24%(n=5)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批样品(批号为070915)5份，按供试品溶液制备方法平行处理并测定，计算含量。结果含量平均值为0．474 mg/g，RSD 为 1．89%(n=5)，表明方法重复性良好。

图1 高效液相色谱图

加样回收试验:分别精密称取5份已知含量为0．48 mg/g(批号为070915)的样品0．5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，以2份为1组，共3组，每组分别精密加入欧前胡素对照品0.14，0.71，0.19 mg，按供试品溶液制备方法制备溶液，并依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 欧前胡素加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

含量限度:2010年版《中国药典(一部)》白芷药材含量测定项下要求，“本品按干燥品计算，含欧前胡素(C16H14O11)不得少于0．080%”[1]98。3批白芷药材中欧前胡素(C16H14O11)的含量测定结果见表2。可见，白芷药材中欧前胡素的转移率均在95%以上。因此，确定样品中欧前胡素含量限度为“本品每1 g含白芷以欧前胡素(C16H14O11)计，不得少于 0．20 mg”。

表2 白芷药材中欧前胡素转移率测定结果

样品含量:取6批样品，依法制备供试品溶液并测定含量。结果见表3，制备的6批样品含量测定结果均符合含量限度要求。

表3 样品含量测定结果(n=2)

3 讨论

选择检测波长时，精密吸取欧前胡素对照品溶液，在200～600 nm波长范围内扫描，结果欧前胡素在248 nm波长处有最大吸收。

选择流动相时，参考2010年版《中国药典(一部)》清眩丸含量测定项下要求，采用甲醇－水(63∶37)为流动相测定[1]1127，结果欧前胡素峰与杂质峰分离效果较差，分离度小于1．5，经摸索试验，以甲醇－水(62∶38)为流动相时分离效果较好，达到了药典要求。

选择样品提取方法时，选取甲醇为溶剂，以欧前胡素提取量为考察指标，按2．2项下供试品溶液制备方法操作，分别精密吸取对照品溶液5 μL和供试品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪。结果表明，样品中欧前胡素含量转移率在95%以上，基本提取完全，因此本品的提取溶剂和提取方法可行。

方法学考察结果表明，方法灵敏度高、专属性强、重复性好，可作为清眩丸的质量控制方法[6－12]。

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